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目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点)。双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶。涂布含有5%蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况。结果sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5%蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5%蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点。结论建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础。 相似文献
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化学发光免疫分析法与放射免疫分析法测定性激素的评价 总被引:2,自引:0,他引:2
我院2007年引进一台全自动微粒子化学发光酶免疫分析仪器(Access2),并将原来使用RIA测定的性激素等项目调整到新仪器测定.为评价微粒子化学发光免疫分析法(CLIA)的临床使用价值,我们采用CLIA和RIA对性激素标准品、质控品及临床患者血清性激素项目六项(LH、FSH、Prog、E2、Test、PRL)进行了测定,现评价报告如下. 相似文献
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目的探讨大麻素受体2(CB2)缺失对伴刀豆球蛋白A(ConA)所致急性肝损伤小鼠肝巨噬细胞的影响。方法 20只8周龄野生型(WT)C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组; 20只CB2基因敲除(CB2~(-/-))C57BL/6J雄性小鼠随机分为CB2~(-/-)对照组、 CB2~(-/-)模型组。WT和CB2~(-/-)小鼠模型组尾静脉注射ConA(20 mg/kg)复制小鼠急性肝损伤模型,对照组注射等量PBS。造模9 h后,留取血清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT), HE染色观察各组肝损伤情况, Western blot法分别检测肝巨噬细胞相关CD68、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平,免疫组织化学染色法检测肝组织F4/80的表达。结果与两组对照组相比,两组模型组小鼠肝脏损伤程度严重,血清ALT明显增高,肝组织F4/80阳性表达及CD68、 TNF-α蛋白水平均明显增强;与WT模型组比较, CB2~(-/-)模型组小鼠肝损伤程度和损伤面积增加,血清ALT有所增高,肝组织F4/80阳性表达以及CD68和TNF-α蛋白水平均有所升高。结论 CB2基因缺失促进ConA所致急性肝损伤小鼠肝脏中巨噬细胞的增殖与活化。 相似文献
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近年来,随着四环素被再次用于临床幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)根除治疗,临床可能会出现Hp四环素耐药株,影响Hp的根除率。为了解Hp对四环素的耐药机制,促进建立快速筛查Hp四环素耐药株检测方法,指导临床医师为患者制定个性化Hp根治方案,本文对Hp感染及治疗现状及四环素耐药机制作一综述。 相似文献
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裂解抗体 (Catalytic antibodies),又称催化抗体或抗体酶(abzyme),也称程序抗体(programmable antibodies),它是一种具有催化活性的抗体。裂解抗体具有高特异性和高亲和力,使它在生物学、化学和医学领域可望有广阔的应用前 相似文献
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血清裂解质粒DNA能力的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
1989年,Paul等[1,2]在哮喘患者体内发现能水解肠血管活性肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)的自身抗体,而后又相继分别在SLE患者血 清[3]及肝炎[4]、AIDS患者[5]体内发现了具有催化裂解活性的自身抗体。这些具有催化裂解活性的抗体可催化蛋白质、多肽、DNA和RNA等裂解,故简称为裂解抗体(catalytic antibodies),它们的底物是多种多样的。 相似文献
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目的:探讨燃煤砷暴露对人体T细胞增殖能力的影响及其作用机制。方法:采集贵州省燃煤污染型砷中毒病区居民及非病区居民外周血,按《地方性砷中毒诊断标准》(WS/T211-2001)分为暴露组(17例)、轻度砷中毒组(35例)、中度砷中毒组(38例)、重度砷中毒组(19例)及对照组(35例)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测T细胞刺激指数;钙离子荧光探针(Fluo-3/AM)染色流式细胞术检测外周血单个核细胞(PB-MC)钙离子指数(IECa^2+);电泳迁移率改变实验(EMSA)检测PBMC活化T细胞核转录因子(NF-AT)结合DNA的活性。结果:经刀豆蛋白A(ConA)刺激后,暴露组及轻、中、重度砷中毒组刺激指数(1.315±0.962、1.611±1.224、1.114±0.545、1.289±0.875)均低于对照组(2.322±1.241,P〈0.01)。经抗CD3单克隆抗体(McAb)刺激后,暴露组及轻、中、重度砷中毒组刺激指数(0.997±0.177、1.103±0.291、1.007±0.221、0.957±0.205)亦均低于对照组(1.842±0.429,P〈0.01)。轻、中、重度砷中毒组PBMC经抗CD3 McAb处理后,IECa^2+(110.130±49.637、92.429±31.191、77.640±35.372)均显著低于对照组(145.986±59.450,P〈0.01);中、重度砷中毒组IECa^2+亦均显著低于暴露组(121.337±46.410,P〈0.05)。轻、中、重度砷中毒组PBMC内NF-AT结合DNA活性(1.354±0.446、1.290±0.291、1.159±0.411)均显著低于对照组(1.722±0.291,P〈0.01)和暴露组(1.611±0.294,P〈0.05)。结论:燃煤砷暴露可导致人体T细胞刺激指数下降、PBMC内IECa2+减少及NF-AT结合DNA的活性降低,表明砷可抑制人体T细胞增殖能力,其原因可能与砷对T细胞受体(TCR)/CD3信号转导途径的影响有关。 相似文献