桑色素对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究桑色素(morin)对小鼠T淋巴细胞活化、增殖和细胞周期的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)刺激培养的淋巴结来源的小鼠淋巴细胞,再以不同终浓度的morin与T细胞共培养,利用流式细胞术(FCM),检测早期T细胞活化的标志CD69分子的表达,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色检测T细胞的增殖;以碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期。结果:小鼠T细胞培养6 h后,未经ConA刺激的对照组中CD69 T的细胞比率为(2.97±0.12)%,经ConA刺激的CD69 T细胞的比率明显增高,达到(72.52±0.66)%,与对照组相比差别明显(P<0.01)。终浓度为25、50、100μmol/L的morin均下调CD69 T细胞的比率,其中,100μmol/L的morin抑制作用最强,为(48.95±0.81)%,与对照组比较具有统计学意义(P<0.01)。CFDA-SE染色分析显示,ConA组培养48 h和72 h的T细胞的增殖指数(PI)分别为(1.58±0.04)和(1.95±0.02),各浓度的morin对ConA刺激的T细胞增殖,具有明显地抑制作用,以100μmol/L的morin抑制作用最明显。培养48 h的ConA组T细胞的PI为(1.02±0.02)、培养72 h的ConA组T细胞的PI为(1.03±0.01),与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。PI染色后流式细胞术分析的结果表明,ConA组处于S期的T细胞的比率为(27.05±0.39)%,显著高于对照组的比率(5.10±0.07)%。morin组中S期的细胞比率较高。结论:Morin可显著抑制ConA刺激的T细胞活化及增殖;其对增殖的抑制作用主要表现为S期的细胞的阻滞。     

胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成的作用

目的观察胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成作用的影响。方法大鼠胆道结扎４８小时后,用胶原酶灌流后分离肝细胞,加入胰高血糖素温育,用分光光度计按标准酶学方法检测葡萄糖、乙酰乙酸和三羟基丁酸。结果在基础或最大刺激条件下,加胰高血糖素结扎组、假手术组葡萄糖异生均明显大于未加胰高血糖素组（Ｐ＜０．０５）,加胰高血糖素对结扎组和假手术组的酮体异生无促进作用。结论胰高血糖素对胆道梗阻４８小时大鼠肝细胞的糖异生存在有意义的刺激作用,对酮体异生则无刺激作用     

细胞间黏附分子1的MRM-MS测定方法建立与优化

目的建立并优化室间隔缺损潜在生物标记物细胞间黏附分子1(ICAM-1)MRM-MS测定方法。方法借助Uni Prot数据库和辅助软件Skyline建立ICAM-1多重反应监测质谱定量(MRM-MS)方法,进一步筛选其各肽段及母子离子对,并通过改变MS的碰撞能量CE值和去簇电压DP值进一步优化其MRM质谱扫描方法。结果从ICAM-1的11个肽段88对离子对中优选出3个肽段9对离子对作为ICAM-1的定量依据。采用优化后的MRMMS进行检测,10个血清样本中ICAM-1蛋白含量为(318.40±97.20)ng/m L,与经酶联免疫法测定的结果(330.30±130.24)ng/m L相比差异无统计学意义(P0.05)。结论借助Uni Prot数据库和辅助软件Skyline,经过多个循环可以建立并优化ICAM-1蛋白的MRM-MS测定方法。     

一维凝胶电泳图谱数字化定量比较法的建立及验证

目的探讨凝胶定量软件Quantity One用于血清差异蛋白质组学研究的可行性。方法运用凝胶成像系统中的定量软件Quantity One对各电泳图上的各条带进行定量分析,将图形结果转换为数据结果;用上述技术分别对健康体检者和肝癌病人各32份除高丰度蛋白的血清电泳图进行分析,验证该研究方法的可行性。结果两组间有10个条带差异具有统计学意义（P〈0.05）。通过文献检索,其中9条找到相对应分子量的HCC标志物。结论凝胶定量软件QuantityOne可量化处理电泳条带的分子量和灰度;一维凝胶电泳技术可用于血清差异蛋白初期比较研究。     

肝癌血清高表达多肽——人血纤肽A的发现及生物信息学分析

目的 筛选和鉴定肝癌血清高表达的蛋白分子,并对筛选出的人血纤肽(fibrinopeptide)A进行初步分析.方法 运用ClinProt技术系统筛选并鉴定出肝癌血清高表达的蛋白分子,应用生物信息学方法对该蛋白进行分析.结果 一个在肝癌患者血清中高表达的m/z为1465的多肽,经鉴定为fibrinopeptide A,其在肝癌等多种肿瘤中表达上调.结论 fibrinopeptide A可能是肝癌候选血清标志物.     

两种巢式PCR方法在HIV-1早期检测的应用和比较

目的 建立并应用HIV-1早期检测的单重巢式PCR和多重巢式PCR方法检测HIV-1感染,探讨两种方法检测结果的差异.方法 针对HIV-1主要流行毒株的pol、gag、env 3个基因的保守序列设计巢式PCR引物,建立单重巢式PCR和多重巢式PCR方法.运用两种巢式PCR方法对118例HIV-1阳性样本和48例HIV-1阴性样本进行检测.结果 多重巢式PCR方法的灵敏性为96.6%,高于env区单重巢式PCR的80.5%和pol区单重巢式PCR的88.1%(P＜0.05),但与gag区单重巢式PCR检测结果(90.7%)差异无统计学意义(P＞0.05);多重巢式PCR的特异性为99.2%,高于env区单重巢式PCR的85.4%(P＜0.05),但与gag区和pol区的特异性差异无统计学意义(P＜0.05);多重巢式PCR方法的平均重复性为98.3%,检测下限至少可以达到250 copy/ml.结论 多重巢式PCR检测方法与单重巢式PCR检测方法相比,具有更高的灵敏性、特异性以及较好的重复性,能检测到较低拷贝数的样本,是一种快速、简便、可靠的HIV-1早期检测方法.     

广西壮、汉族人群HIV-1感染相关基因CCR2-64I和SDF1-3'A多态性的研究

[目的]研究HIV-1感染相关的CCR2-64I及SDF1-3'A等位基因在广西壮、汉族人群的突变频率和多态性特点. [方法]抽取广西天等县、南宁市100名壮族和50名汉族人,提取全血基因组DNA,采用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测CCR2-64I和SDF1-3'A的基因多态性,分析CCR2-64I及SDF1-3'A等位基因在研究人群中的分布及其特征.[结果]壮族、汉族人群中CCR2-64I等位基因突变频率分别为25.5%、26.0%,SDF1-3'A等位基因突变频率均为27.0%,CCR2-64I和SDF1-3'A等位基因突变频率在壮、汉族之间差异无统计学意义(P>0.1).[结论]广西壮、汉族人群中具有较高的CCR2-64I及SDF1-3'A等位基因.本研究了解广西壮、汉族人群中CCR2-64I和SDF1-3'A等位基因的分布和多态性特点,为进一步深入研究广西壮、汉族人群的遗传背景与HIV感染及疾病病程的关系提供了重要数据.     

三七提取物对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的 分析三七提取物(SE)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用机制.方法 分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白(Con A)或者佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析三七提取物对淋巴细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布.结果 CFSE染色分析显示,SE对Con A或者佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.对细胞周期分析表明,随着三七提取物浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期,而处于亚二倍体峰的细胞数基本不变.结论 三七提取物对小鼠淋巴细胞的增殖有明显抑制作用,它能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期,这种抑制作用表现出明显的周期特异性.     

胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成的作用

目的：观察胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成的作用影响。方法：将大鼠胆道结扎４８ｈ后,用胶原酶灌流后分离肝细胞,加入胰岛血糖素温育,用分光光度计按标准酶学方法检测葡萄糖,乙酰乙酸和三羟基丁酸。结果;在基础或最大刺激条件下,加胰高血糖素结扎组,假手术葡萄糖异生均明显大于未加胰高血糖素组,加胰高血糖素对结扎组和假手术组的酮体异生无促进作用。     

巴马长寿人群血清长寿标记蛋白的鉴定及血脂分析

目的筛选广西巴马长寿老人的血清特异蛋白,并进行分离及鉴定,探讨相关脂蛋白与长寿的关系。方法以巴马长寿区长寿老人62例为长寿组,巴马非长寿区无长寿家族史的健康对照者41例为对照组,用表面加强激光解析电离化飞行-时间质谱检测2组人群的血清蛋白表达谱,并分析差异蛋白;一维电泳液相色谱-质谱技术分离并鉴定目的差异蛋白;再选择包括长寿组的入选者257例长寿老人为长寿老人组,包括对照组的入选者123例非长寿老人为非长寿对照组,检测2组HDL-C和TG水平。结果分子量在1000～10 000,共检测长寿组与对照组表达差异的蛋白有25个(P<0.05),在长寿组高表达的4个蛋白的相对表达量比值>2;对蛋白5336.81进行分离鉴定,其可能与血脂代谢密切相关的载脂蛋白(apo)C-Ⅱ酶解片段;长寿老人组的HDLC水平高于非长寿对照组(P<0.01),2组的TG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论巴马长寿老人与巴马非长寿区对照人群的血清蛋白图谱存在差异;apoC-Ⅱ蛋白在巴马长寿老人中的适度高表达,可能是其出现动脉粥样硬化、冠心病、脑血栓等心脑血管疾病发生较少的原因之一。