基于脑血管重建的血管内皮生长因子缓释微球制备及性质研究

目的制作用于脑血管重建研究的血管内皮生长因子(VEGF)缓释微球并研究其性质。方法采用W1/O/W2复乳溶剂挥发法制作VEGF-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)微球和载罗丹明B微球;使用扫描电镜观察其表面形态结构;采用微量蛋白测定法测定微球中药物的载药量和包封率,并对微球的体外释药性能进行研究;将用罗丹明B标记的微球注入大鼠颞肌组织,分别于第10天和第30天取颞肌组织行冰冻切片,倒置荧光显微镜下观察。结果扫描电镜观察到微球表面光滑无孔隙,粒径为4~10μm;微球载药量及包封率的测定显示其平均载药量为(25.50±1.57)%,平均包封率为(85.07±0.15)%,累积释放率可达80%以上;微球在颞肌组织中可持续存在30 d以上。结论 VEGF-PLGA微球能稳定长时间释放VEGF,可用于脑血管重建研究。     

止咳平喘方辅助布地奈德雾化对支气管哮喘患儿肺换气功能及血清miR-155、miR-21的影响

目的:探讨止咳平喘方辅助布地奈德雾化对支气管哮喘患儿肺换气功能及血清miR-155、miR-21的影响。方法:将支气管哮喘患儿90例随机分为对照组与试验组,每组45例,对照组给予常规治疗及布地奈德雾化,试验组在常规治疗基础上采用止咳平喘方辅助布地奈德雾化治疗,观察治疗前后患儿中医证候积分变化,咳嗽消失时间、憋喘消失时间、肺哮鸣音消失时间,肺功能变化及血清miR-155、miR-21变化。结果:2组主症、次症的中医证候积分治疗后较治疗前明显下降,具有统计学差异(P<0.05),且试验组治疗后低于对照组,具有统计学差异(P<0.05)。试验组咳嗽消失时间、憋喘消失时间、肺哮鸣音消失时间短于对照组,具有统计学差异(P<0.05)。2组治疗后肺功能较治疗前改善,具有统计学差异(P<0.05),试验组肺功能改善程度优于对照组,具有统计学差异(P<0.05)。2组治疗后较治疗前miR-155升高、miR-21下降,具有统计学差异(P<0.05),且试验组miR-155升高、miR-21下降程度较对照组更为明显,具有统计学差异(P<0.05)。结论:止咳平喘方辅助布地奈德雾化有助于改善支气管哮喘患儿肺换气功能,调节血清miR-155、miR-21表达,缩短症状改善时间。     

硝苯地平联合泮托拉唑治疗肝硬化合并食管胃静脉曲张破裂出血患者的临床疗效

目的探讨硝苯地平联合泮托拉唑治疗肝硬化合并食管胃静脉曲张破裂出血(EGVB)患者的临床疗效,以及联合治疗对于血清血管紧张素转化酶(ACE)、一氧化氮(NO),胃肠激素及肝功能的影响。方法选择2014年10月至2017年10月在陕西省核工业二一五医院就诊的91例肝硬化合并EGVB患者,按随机数字表法分为44例对照组和47例研究组。对照组给予泮托拉唑治疗,研究组在对照组基础上联合硝苯地平治疗。比较两组患者的临床疗效,止血时间,再出血率,住院时间,血清ACE、NO表达水平,胃肠激素表达水平,肝功能,以及不良反应发生情况。结果研究组的总有效率高于对照组,且止血时间、再出血率及住院时间均低于对照组,差异均有统计学意义(P均0.05)。治疗后,两组患者的血清ACE、NO及胃肠激素表达水平均下降,且研究组低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者的总胆红素(TBiL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)表达下降,白蛋白(Alb)表达升高,且研究组的变化程度更显著(P0.05)。两组患者的不良反应发生率差异无统计学意义(P0.05)。结论硝苯地平联合泮托拉唑治疗肝硬化合并EGVB患者的临床疗效确切,能够降低血清ACE及NO表达水平,调节胃肠激素分泌,改善肝功能。     

提高O-糖基化水平对CHO-K1细胞突变型tau蛋白过度磷酸化的影响

目的观察提高O-糖基化水平对CHO-K1细胞中突变型R406W tau蛋白过度磷酸化及细胞轴突转运功能的影响。方法分别将突变型PSG-5 R406W tau质粒和PSG-5空载体质粒转染CHO-K1细胞。将成功转染PSG-5 R406W tau质粒的CHO-K1细胞分为实验组与对照组,分别加入20μM的NAG-Ae及等量的DMEM/F12培养基,转染PSG-5空载体的细胞为空载体组,培养12 h。用Western blot法检测tau蛋白表达;免疫印迹法检测实验组与对照组细胞tau蛋白的糖基化及磷酸化水平;荧光漂白后恢复技术(FRAP)检测三组细胞漂白后荧光恢复的速度以表示细胞轴突转运速度。结果转染空载体的细胞未见tau蛋白表达,转染PSG-5 tau R406W的细胞tau蛋白呈高表达。实验组与对照组细胞O-糖基化水平分别为1.30±0.09、0.59±0.04(P<0.05)。实验组tauThr205、tauS-er396、tauThr212位点磷酸化水平分别为0.44±0.21、0.98±0.01、0.44±0.19,对照组分别为1.11±0.38、1.34±0.22、0.79±0.05,两组相比,P均<0.05。10、40、70 s时实验组荧光强度分别为262.00±12.50、300.00±10.00、461.66±10.40,对照组分别58.33±10.40、131.66±11.54、208.33±14.43,空载体组分别为514.00±10.14、888.33±11.06、1188.00±10.60,三组相比,P均<0.05。结论提高CHO-K1细胞的O-糖基化水平有助于减轻突变型tau蛋白的过度磷酸化水平,改善细胞轴突转运功能。     

HPLC法测定注射用甲钴胺在0.9%氯化钠注射液中的浓度

摘 要 目的: 建立0.9%氯化钠注射液中甲钴胺的含量测定方法。方法: 采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters XTerra C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈-水(含冰乙酸1.84%)（20∶80）,流速为1.0 ml·min^-1,检测波长267 nm。结果:在0.9%氯化钠注射液中甲钴胺在2.96～118.40 μg·ml^-1范围内线性关系良好,r=0.999 8,平均加样回收率为99.1%,RSD=1.77%(n=9)。结论:该方法简便、准确可靠、重复性好,可用于0.9%氯化钠注射液中甲钴胺浓度的测定。     

胰岛素对AD样小鼠学习记忆的影响及其机制

【摘要】目的 研究胰岛素对阿尔茨海默病（AD）样小鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法 将21只小鼠随机分为对照(CON) 组、模型（链脲佐菌素,STZ）组和胰岛素治疗(INS) 组,每组7只,后2组小鼠脑室内注射STZ建立 AD模型,INS组小鼠皮下注射胰岛素持续30 d。Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,Western blotting检测Tau和神经丝（NFs）蛋白的磷酸化水平,荧光染料Fluoro-Jade B（FJB）标记退化神经元。结果 与CON组相比,STZ组小鼠平均逃避潜伏期和路径长度明显增加(P < 0.05)、穿越隐匿平台次数明显减少(P < 0.05),小鼠脑内Tau蛋白在Ser199/ 202、Ser396/404、Thr212和Thr205位点的磷酸化水平以及NFs蛋白的磷酸化增加(P < 0.05),FJB标记的小鼠海马CA1 区平均累积光密度(IOD)较CON组明显增加(P < 0.001);与STZ组相比,INS组小鼠学习记忆改善,逃避潜伏期和路径长度明显减少(P < 0.05)、穿越隐匿平台次数明显增加(P < 0.05),Tau蛋白特异性位点和NFs蛋白的磷酸化作用明显降低(P < 0.05),FJB标记的小鼠海马CA1区平均累积分光密度(IOD)明显减少(P < 0.001)。结论 胰岛素能改善STZ脑室内注射的AD样小鼠学习记忆减退,可能与降低Tau和NFs蛋白的过度磷酸化和神经细胞退行性变有关。     

四氧嘧啶对人神经瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 观察四氧嘧啶对人神经瘤SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将人神经瘤SK-N-SH细胞分为两组,对照组常规培养12h,观察组分别加不同浓度的四氧嘧啶培养12 h.用MTT法测细胞吸光度值观察细胞增殖情况,用PI/Hoechst染色法观察细胞凋亡,用蛋白免疫印迹法检测细胞中糖基化和磷酸化的神经丝蛋白.结果 对照组细胞吸光度值为0.43 ±0.01,观察组加入2、4、6、8、10 mM四氧嘧啶作用12 h,细胞吸光度值分别为0.39 ±0.01、0.35 ±0.02、0.30±0.01、0.26±0.03、0.21 ±0.02;观察组与对照组比较,P均＜0.05;观察组不同浓度间比较,P均＜0.05.对照组细胞凋亡率为5％±1％,观察组加入2、4、6 mM四氧嘧啶作用12 h,细胞凋亡率分别为10％±1％、18％±2％、29％±1％;观察组与对照组比较,P均＜0.05;观察组不同浓度间比较,P均＜0.05.对照组细胞中磷酸化、糖基化神经丝蛋白OD值为1.00 ±0.20、1.00±0.20,观察组加入2、4、6 mM四氧嘧啶作用12 h,细胞中磷酸化、糖基化神经丝蛋白OD值分别为1.21±0.42和0.95±0.21、1.32±0.51和0.78±0.32、1.51±0.30和0.75±0.24;观察组与对照组比较,P均＜0.05;观察组不同浓度间比较,P均＜0.05.结论 四氧嘧啶可抑制SK-N-SH细胞增殖,并诱导其凋亡;可能与神经丝蛋白的糖基化降低、磷酸化增加有关.     

羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制异常增殖血管内皮细胞的作用机理。方法建立人结肠腺癌细胞LS180上清液和人脐静脉内皮细胞ECV304体外共培养模型,通过实时荧光定量PCR检测ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及其受体(b FGFR)、HSPG2、p53、c-myc mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清VEGF、VEGFR(KDR)、b FGF、b FGFR蛋白的表达。结果在共培养细胞模型中,0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR和癌基因c-myc及与细胞增殖相关蛋白多糖HSPG2的mRNA表达具有抑制作用;对抑癌基因p53 mRNA的表达具有促进作用。0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR的蛋白表达具有抑制作用。结论 HSYA抑制新生血管的生成、抑制共培养模型中血管内皮细胞的异常增殖,其可能的作用机理是通过调控VEGF及其受体、b FGF及其受体、HSPG2、c-myc和野生型p53的表达发挥抗肿瘤作用,揭示HSYA可能是潜在的肿瘤血管生成抑制剂。     

二甲双胍对STZ诱导小鼠AD样症状的保护作用的研究

目的研究二甲双胍对侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)所诱导的阿尔采末病(Alzheimers disease,AD)动物模型的保护作用。方法选用Morris水迷宫试验评估二甲双胍对STZ侧脑室注射诱导的AD动物模型的学习记忆能力的影响;采用蛋白免疫印迹法分析二甲双胍对AD动物模型脑内细胞骨架蛋白神经丝蛋白及Tau蛋白磷酸化的表达水平的影响。结果二甲双胍对链脲佐菌素侧脑室注射所诱导的AD模型小鼠的学习记忆能力有明显的改善作用。①Morris水迷宫:定位航行试验中,STZ组平均逃避潜伏期和路径长度较对照组明显增加,二甲双胍治疗组平均逃避潜伏期和路径长度较STZ组明显减少;空间探索试验中,STZ组穿越隐匿平台次数较对照组明显减少,二甲双胍治疗组穿越隐匿平台次数较STZ组明显增加(P均<0.05)。②Westernblot:与对照组相比,STZ组细胞骨架神经丝和tau蛋白的磷酸化较正常组表达明显增多,二甲双胍治疗组细胞骨架神经丝和tau蛋白的磷酸化较STZ组明显减少(P均<0.05)。结论二甲双胍可以改善小鼠阿尔采末病(AD)样的学习记忆能力的减退和早期细胞骨架的病理学改变。