《临床基础检验学》实验教学应重视的几个方面

《临床基础检验学》(以下简称《临检》)是门专业性和技术性很强的课程,亦是一门实践性很强、涉及面很广的专业学科,而实验课是这门课的关键内容。如何搞好实验课,增强学生的基本技能训练,为学生以后的实习与工作打下基础,培养“实用型”医学检验人才,我们认为,应着重注意以下几个方面。     

微RNA在肿瘤研究中的意义

微RNA（microRNA;miRNA）,又名小分子RNA,是序列特异转录后抑制基因表达的调节因子,是一种长约19～25nt广泛存在于真核细胞胞质内的单链小分子RNA,是一组不编码蛋白质的短序列RNA,它本身不具有开放阅读框（ORF）;成熟的miRNA 5′端有一个磷酸基团,3′端为羟基.miRNA参与生命过程中一系列的重要进程,包括个体发育、造血生成、器官形成、细胞凋亡、细胞增殖与分化、脂肪代谢,甚至肿瘤发生.为更全面地认识miRNA,特别是miRNA在肿瘤诊治中的意义,本文将从以下几个方面对miRNA的研究做一介绍.     

外源性Wnt5a诱导K562细胞分化表型的实验研究

本研究探讨外源性Wnt5a诱导K562细胞定向分化的作用。用重组腺病毒AdWnt5a、AdGFP感染CHO细胞,分别制备Wnt5a和GFP对照条件培养液,并处理K562细胞1-7天,用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态变化;采用过氧化物酶(POX)、糖原(PAS)和非特异性酯酶(α-NAE)染色、细胞表面分化抗原CD13、CD14、CD68鉴定K562细胞的分化表型;用流式细胞术检测细胞分化周期的变化。结果表明:与对照GFP条件培养液相比,Wnt5a条件培养液处理的K562细胞形态和超微结构均出现了分化成熟的特征;POX、PAS、α-NAE细胞化学染色均为阳性,并且α-NAE阳性70%可被氟化钠抑制;单核细胞系表面标志抗原CD14、CD68和粒细胞系表面标志抗原CD13经免疫细胞化学染色均呈阳性,但CD13与对照比较无显著性差异;Wnt5a处理K562细胞5天,细胞周期阻滞在G2期。结论:外源性的Wnt5a可诱导K562细胞向成熟方向分化,并且有向单核细胞系分化的现象。     

医学检验专业临床血液学与检验课程设置与实施探讨

为提高教学质量，在医学检验专业临床血液学与检验课程的教学中取得更好的效果，培养适应21世纪需要的高素质专业人才，结合实际情况，从课程特点、教学思想、课程设置和教学实施四个方面进行了探讨。     

Wnt5a基因在急性髓细胞白血病病例中的表达分析

目的检测Wnt5a基因在良性血液病、急性髓细胞白血病及缓解病例骨髓中的表达情况,探讨Wnt5a在急性髓细胞白血病发生中的作用。方法RT-PCR方法检测18例良性血液病病例,30例急性髓细胞白血病初诊病例和25例缓解病例骨髓中Wnt5amRNA的表达情况;免疫细胞化学法检测对应骨髓中Wnt5a蛋白的表达情况。结果Wnt5a mRNA在良性血液病、急性髓细胞白血病病例和缓解病例中的阳性表达率分别为88.9%(16/18)、30%(9/30)和68.0%(17/25),半定量值分别为(0.3826±0.1908)、(0.1041±0.0590)和(0.2606±0.1466)。统计学分析Wnt5a mRNA在初诊病例中的表达明显低于缓解病例(P0.05),缓解病例与良性血液病之间无明显差异(P0.05);Wnt5a蛋白在良性血液病中阳性表达,在急性髓细胞白血病初诊病例中低表达或表达缺失,在缓解病例中表达恢复。结论Wnt5a基因在急性髓细胞白血病初诊病例中表达缺失而在治疗缓解病例中表达恢复,提示急性髓系白血病的发生可能与Wnt5a基因表达缺失或下调有关,Wnt5a可以作为一个髓系白血病诊断、指导治疗和疗效评价的指标。     

小剂量MIP-1α联合IL-8体外对人骨髓造血细胞集落形成的影响

目的 了解小剂量巨噬细胞炎症蛋白－1α(Macrophage inflammatory protein-α MIP-1α）联合白细胞介素－8（Interleukin-8,IL-8）对人骨髓造血细胞集落形成的影响。方法 取人骨髓，根据随机单位组方差分析设计，将每例标本分为空白组（不加MIP－1α和IL－8）；10ng/ml联合组（加入10ng/ml的MIP－1α和IL－18）。建立半固体培养体系，一定时间后，观察集落粒单细胞集落形成单位（CFU－GM）、红细胞集落形成单位（CFU－E）和混合信集落（CFU－E）和混合集落（CFU－Mix）的形成情况。结果 1ng/ml的浓度下，相同浓度的MIP－1α与IL－8联合使用对人骨髓造血细胞集落的形成没有明显的抑制作用；而在10ng/ml的浓度下，两者联合使用则能明显地抑制人骨髓造血细胞集落的形成。两种因子单独使用，未见明显的集落形成抑制作用。结论 10ng/mlMIP-1α与IL－8能相互协同抑制人骨髓造血细胞集落的形成。     

6 Gy γ射线对骨髓细胞生物力学特性的影响

目的了解放射损伤条件下骨髓细胞(包括基质细胞和造血细胞)生物力学特性的改变。方法以6Gy^60Coγ射线照射昆明系小鼠制备动物模型，以细胞电泳法检测骨髓细胞的细胞电泳率，荧光探针法测定细胞膜微黏度，旋转法检测细胞的黏附性，核孔滤膜法检测细胞的变形指数。结果放射损伤后骨髓细胞的变形能力降低，细胞膜微黏度增加，细胞的黏附率和电泳率显著降低。结论6Gy^60Coγ射线对骨髓细胞的生物力学特性有显著影响，可能是放射损伤后造血功能减退的原因之一。     

体外培养中K562细胞对BMSCs凋亡及其分泌FGF-β1的影响研究

目的　研究在体外培养方式下K5 6 2细胞对正常骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs)的凋亡及其造血负调因子TGF β1表达的影响。 方法　加入K5 6 2与BMSCs直接接触与用隔离膜两种方式培养 ,第 2、4、7、12d检测培养上清的TGF β1含量和BMSCs中TGF β1mRNA的表达 ;TUNEL法检测BMSCs的凋亡。 结果　接触培养BMSCs的凋亡在第 4d后显著高于对照组 (P <0 .0 1) ;TGF β1水平升高到 4d与对照组有显著差异 (P <0 .0 1) ;BMSCs胞浆TGF β1mRNA阳性率升高到第 4d后与对照组有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　K5 6 2细胞可抑制正常BMSCs生长 ,促进其凋亡 ,上调其TGF β1的表达 ,是造成正常造血抑制和白血病细胞导致造血微环境损伤的主要原因之一。     

髓细胞白血病β—catenin表达及与外源性Wnt5a的作用关系

目的调查β-catenin在髓细胞白血病标本及细胞株中的表达,明确外源性Wnt5a与K562细胞β-catenin表达的关系。方法首先以RT-PCR和免疫组化检测β-catenin在髓细胞白血病标本及细胞株中的表达,再以Wnt5a条件培养液处理K562细胞,然后用Westernblot检测β-catenin表达变化。结果β-catenin在髓细胞系白血病标本及细胞株中有普遍表达,但外源性Wnt5a不能明显下调K562细胞β-catenin表达。结论外源性Wnt5a对K562细胞Wnt／β-catenin信号传导途径无明显抑制作用。     

Cyr61和VEGF在肝细胞癌及癌周肝硬化组织中的表达及相关性分析

目的分析高半胱氨酸蛋白16（Cyr61）和血管内皮生长因子（VEGF）在肝细胞癌、癌周肝硬化组织中的表达及相关性,探讨其在肝癌发生过程中的作用。方法采用免疫组化S-P法检测58例原发性肝细胞肝癌（HCC）及癌周肝硬化组织中Cyr61和VEGF蛋白的表达,并与其临床病理特征比较分析。结果Cyr61、VEGF在癌周肝硬化组织中的表达均高于HCC,差异有统计学意义（P〈0.01）;Cyr61、VEGF蛋白的表达均与肿瘤的转移密切相关（P〈0.05）;相关性检验提示Cyr61、VEGF在HCC组织、癌周肝硬化组织中呈正相关（r=0.444,P〈0.01）。结论Cyr61、VEGF异常表达与肝硬化肝癌的发展密切相关,可能在肝硬化向肝癌转化和肿瘤血管生成过程中发挥重要的作用,为肝癌的早期诊断提供了较为客观的参考指标。