近年新细胞因子的克隆及其技术路线

本文简要介绍了近二年来所克隆的几种新的细胞因子，如ＩＬ－１５，ＴＰＯ，ＭＣＰ－３等。新因子的发现不仅有助于人们对免疫调节，细胞因子网络的深入和全面了解，而且具有巨大的潜在临床应用价值，成为征服疾病的有力武器。本文还试图从新因子克隆过程出发，总结概括新因子克隆的技术路线，以期对我们以后的工作有所帮助。     

微藻异养产生二十碳五烯酸的新进展

二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid简写EPA)是一种长链多不饱和脂肪酸，在营养强化、防治心血管疾病、减轻炎症等方面起着十分重要的作用。目前EPA主要来源于鱼油，很难满足市场对EPA日益增长的需求，必须寻求替代生产EPA的资源。一些微藻可在不需要光的条件下以廉价的有机物为原料异养生长，在异养条件下，可以很好地控制培养模式，有可能大规模地生产EPA。工业上用微藻生产EPA研究包括：筛选高EPA产量的微藻株，通过基因工程改善藻株，优化培养条件以及建立有效的培养体系。本文综述了近几年微藻在异养条件下生产EPA的最新进展，着重阐明硅藻是一种能在异养条件下生长且具有高EPA产率的模式藻株。     

杜氏盐藻基因组文库的构建

目的　构建杜氏盐藻基因组文库,旨在进一步分离和研究杜氏盐藻基因的结构和功能。方法　采用改进的SDS裂解法提取杜氏盐藻基因组DNA ,通过限制性内切酶Sau3AI进行部分酶切,用T4DNA连接酶将目的片段与噬菌体EMBL3载体臂进行连接后转染大肠杆菌LE3 92。结果　体外包装构建了杜氏盐藻基因组文库,得到重组子数为2 .2×10 4,经测定文库滴度为2 .2×10 5pfu/mL。结论　构建了杜氏盐藻基因组文库,为进一步筛选盐藻重要基因及其序列分析奠定基础。     

ST段抬高急性心肌梗死患者血清氧化低密度脂蛋白抗体-IgM水平与冠状动脉病变程度及住院期间预后的相关研究

目的：探讨血清氧化低密度脂蛋白抗体-IgM（ox-LDL-Ab IgM）水平在ST段抬高急性心肌梗死（STEMI）患者中与冠状动脉病变程度及近期预后的相关性。方法选取2008年8月至2009年5月诊断明确并行急诊经皮冠状动脉介入（PCI）治疗的STEMI患者95例,根据冠状动脉造影结果分为单支病变组、双支病变组及三支病变组,并以Gensini积分评价冠状动脉狭窄程度,分别测定血清ox-LDL-Ab IgM、丙二醛（MDA）、血脂,计算体质量指数（BMI）,统计患者住院期间心血管事件发生情况,分析ox-LDL-Ab IgM水平与冠状动脉病变程度及近期预后的关系。结果 STEMI患者血清ox-LDL-Ab IgM水平随冠状动脉病变支数增加而降低（P＜0.05）,但与Gensini积分无明显相关性（P＞0.05）;ox-LDL-Ab IgM水平与血脂、血糖水平等无明显相关性（P＞0.05）,与MDA水平呈显著负相关（r＝-0.319,P＜0.05）;ox-LDL-Ab IgM水平与患者住院期间心血管事件发生率呈显著负相关（r＝-0.708,P＜0.05）,logistic回归分析显示, ox-LDL-Ab IgM是STEMI患者住院预后的保护因素（OR＝-0.588,P＜0.05）。结论血清ox-LDL-Ab IgM水平可在一定程度上反映STEMI患者冠状动脉病变的严重程度。其可能通过调节机体氧化应激水平,减少LDL氧化修饰生成ox-LDL,从而减轻冠状动脉粥样硬化的面积,可能对STEMI患者近期预后具有保护作用。     

大黄与西药的相互作用

大黄是中医临床上最常用的一味中药,最近研究和临床证明,大黄具有显著的清热解毒、消炎抑菌、利胆通便等多种功效。随着对其药理作用研究的不断深入,目前已引起国内外医药学界的重视。本品与西药联用现象亦与日俱增。大黄中的多种有效成分尤其是蒽醌类和鞣质类成分与西药发生作用,对临床疗效有很大影响。因此,了解其相互作用具有重要意义。     

杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达

目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白.方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中.酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果.结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白.Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%.结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白.     

PTKs及其在信号传导和T细胞活化中的作用

PTKs(Protein Tyrosine Kinases)即酪氨酸蛋白激酶,是1980年由Hunter等人首先在Rous肉瘤病毒的编码蛋白质中发现的。它能特异地将磷酸基团转移到酪氨酸(Tyr)而对Ser/Thr,Hyp无作用。随后相继发现了多种PTKs及其作用底物。进一步研究表明它在调控细胞生长、分裂、转化、衰老及细胞信号传导诸方面有极其重要的作用。本文就PTKS的特性及     

杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5'上游序列的克隆与序列分析

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5'上游序列,并对其进行测序和序列分析.方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamH I、EcoR I、Hind Ⅲ、Pst I、Sal Ⅰ及Xbal Ⅰ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL、EL、HL、PL、SL和XL.采用巢式(LA)-PCR方法,从上述步行基因组文库中扩增杜氏盐藻NR基因5'上游序列,克隆至pMD18-T,对酶切鉴定正确的克隆进行测序.结果:从HL里扩出约1 200 bp特异性片断,回收此片段并进行T载体克隆,对阳性克隆测序.该序列的3'端与已知NR基因cDNA 5'端序列完全一致.该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如CAAT-box和GAGA-box),含有与EBP、EFII、NF-E1、LV 等转录因子以及广谱激活剂Oct-1结合位点相似的核苷酸序列.结论:采用LA-PCR基因组步行方法,从已知cDNA 周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的NR基因的5'上游区序列,可能是一种新的杜氏盐藻启动子区序列.     

SLE患者PBMC中IL-6mRNA和IL-10mRNA的表达

为了进一步了解TH2型细胞因子IL-6和IL-10在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单核细胞（PBMC）中的基因表达情况，对7例SLE患者和4例年龄相匹配对照PBMC中IL-6mRNA和IL-10MRNA表达进行了原位杂交检测，并对检测结果进行计算机图象灰度扫描分析、结果SLE患者PBMC中IL-6mRNA和IL-10mRNA均明显高表达，并与患者ANA滴度及抗（ISDNA抗体有一定的相关性尤以IL-6为著。提示IL-6和IL-10作为B细胞刺激因子在SLE发病中具有重要病理性作用，阻止或减少其分泌可能有助于SIE治疗。     

常见遗传性结肠癌中的基因缺陷

最近,人们对肿瘤的遗传基础有了新的认识,科学家已经发现了导致一种遗传性结肠癌的基因,这种结肠癌是遗传性非息肉病性结肠癌(HNPCC)。尽管HNPCC并不是易于找寻其遗传本质的唯一遗传性结肠癌,但它却是最常见的一种。每200人中就有一人携带它的缺陷基因,15％的结肠癌发生与它有关。两个分别研究组都有此新发现。一个由