肝豆状核变性患者Wilson病蛋白及其基因的改变

目的探讨肝豆状核变性(WD)发病的分子生物学机制.方法通过肝活检获得WD患者的肝标本,利用体外胶原酶温育分离并培养肝细胞,对WD患者肝细胞WD蛋白进行Western-blot蛋白印迹检测;同时采用荧光PCR技术筛查其WD基因突变,并进行直接DNA测序.结果肝细胞蛋白印迹可见特异WD蛋白(Mr155 000条带)的表达.3例WD患者中WD1的Mr155000条带密度无明显变化,WD2,WD3的特异条带密度降低,仅有对照组的36%,提示其WD基因肝内表达异常;荧光PCR筛查发现一例患者存在exon8 Arg778Leu突变,DNA直接测序证实为2333 G→T杂合突变.结论 WD基因在WD患者肝细胞的表达存在异常,这可能与WD基因Arg778Leu位点突变有关,直接检测WD基因产物有助于研究WD的病理机制.     

内源性安定样活性在癫痫患者脑脊液释放情况的初步研究

已证实哺乳类动物脑中存在有安定受体的内源性配基。本文应用放射受体法检测了１５例癫痫（ＥＰ）患者和１０例正常对照者脑脊液中安定样受体结合活性，结果显示ＥＰ患者脑脊液内源性安定样活性（２２．７０±８．３４％Ｉｎｈｉｂｉｔｏｎ）明显低于对照组（３９．０４±１４．３５％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ），Ｐ＜０．０１。ＥＰ发作类型、ＥＰ发作控制与否等同内源性安定样活性改变之间未发现有明显关系。内源性安定的真正来源尚不清楚，但本文结果提示ＥＰ患者中枢神经系统内源性安定样活性的下降，通过对γ—氨基丁酸能神经传递的负性作用，而可能为ＥＰ发作的原因之一     

生食青蛙致嗜酸性脑膜炎1例报告

生食青蛙易导致寄生虫感染 ,而致嗜酸性脑膜炎者少见 ,现报告 1例如下。1　病例　男 ,44岁。因受凉后流涕、咳嗽 2周 ,头面部疼痛10天于 2 0 0 1年 6月 1日入院。患者头痛呈持续性胀痛 ,左顶枕部及右侧面部明显 ,伴头昏、全身乏力。曾在当地医院按感冒治疗 ,头痛不缓解 ,自服“止痛散”可暂时止痛。入院前 1天服药后出现恶心 ,并呕吐胃内容物 1次。既往体健。10年前曾因跌伤按土法生吞活青蛙 30只 ,当时无异常。本次发病前 2 0多天因跌伤右肘部致右尺骨骨折 ,又按土法生吞拇指大活青蛙 6只 ,当时有少许腹痛 ,约 3天后自觉腹部皮肤发痒 ,2天…     

WilSon病蛋白及其基因在肝豆状核变性患者中的改变

目的探讨肝豆状核变性(WD)发病的分子生物学机制.方法通过外科手术获得3例WD患者、2例对照者的肝活检标本,利用胶原酶温育消化法分离肝细胞,并进行体外原代培养;肝细胞裂解离心后,使用6%聚丙烯酰胺凝胶行SDS-PAGE电泳,分离WD蛋白;以抗人WD蛋白抗体为第一抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为第二抗体,对肝细胞WD蛋白进行Westem-blot印迹检测,观察特异性条带数目、密度深浅和分子量大小;同时采用荧光PCR技术,筛查所有研究对象WD基因8号外显子(exon 8)的突变情况,对异常者进行DNA直接测序结果 WD患者及对照者肝细胞WD蛋白Westem-blot检测均表现为特异的155kDa条带,3例WD患者中1例无明显变化,另2例出现155kDa条带密度降低,仅有对照组密度的1/3～1/2,提示这两例患者的WD蛋白在肝内表达异常;荧光PCR筛查发现1例患者存在exon 8 Arg778 Leu突变,DNA直接测序证实为2273G→TG杂合突变.结论 WD基因蛋白产物在WD患者肝细胞的表达存在异常,这可能与WD基因Arg778Leu位点突变有关,直接检测WD基因蛋白产物有助于研究WD的发病机制.     

肝豆状核变性基因在皮肤成纤维细胞株转染后的表达

目的利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法在核酸水平检测并证实肝豆状核变性(Wilson病,WD)基因可以在Me32aT22细胞株中得到有效表达,为以后更深入的研究奠定基础。方法采用脂质体转染法将WDcDNA重组真核表达载体pRc/CMV-WD导入无血清的Me32aT22/2L细胞株,RT-PCR在核酸水平检测WD基因在Me32aT22/2L细胞株的表达。结果在转染的Me32aT22/2L细胞株中可检测到WDcDNA表达,而在未转染的Me32aT22/2L细胞中RT-PCR检测结果呈阴性。结论WD基因转染至Me32aT22/2L细胞株后能得到有效表达。     

PCR技术对Wilson病基因进行定点突变的研究

【目的】利用聚合酶链反应 (PCR)技术对Wilson病 (WD)基因进行体外定点突变的研究。【方法】采用PCR定点突变技术 ,首先设计两对引物 ,将突变位点设计在引物上 ,通过重叠延伸法两次PCR扩增 ,扩增片段上含有所需要的突变位点 ,最后将扩增片段克隆入pRc/CMV载体中。【结果】DNA测序表明在预期位点已经发生突变 ,WD基因第 778位密码子由精氨酸 (Arg)残基突变为亮氨酸残基 (Leu) ,用PCR定点突变技术成功构建Wilson病基因突变体。【结论】PCR技术诱导定点突变准确、高效。Wilson病基因突变体的构建成功 ,为进一步研究该突变位点导致Wilson病的发病机制和Wilson病蛋白的结构和功能的关系奠定了基础。     

蒙药治疗慢性咽炎疗效观察

目的:观察蒙医治疗慢性咽炎的疗效。方法:对151例慢性咽炎患者随机分为两组,观察组以蒙药治疗,对照组用西药治疗,对比观察临床疗效。结果:总有效率观察组96.5%,对照组76.92%,两组间具有显著性差异(P0.05)。结论:蒙医治疗慢性咽炎疗效显著,值得在临床上推广。     

Wilson病基因产物及铜转运P型ATP酶的研究进展

肝豆状核变性(WD)基因已被克隆,序列分析表明,其基因产物(ATP7B)编码的是一种含有1411个氨基酸的铜转运P型ATP酶。ATP7B具有这些酶所独有的功能结构区:金属离子结合位点、阳离子转导区、SEHP序列及跨膜区等,WD基因高频突变位点多与这些结构有密切关系。对ATP7B的深入研究将为探讨WD的发病机制及诊断和治疗提供帮助。     

解剖钢板治疗胫骨平台骨折的临床疗效

目的探讨应用解剖钢板治疗胫骨平台骨折的临床疗效。方法回顾性分析我院2006年1月至2010年12月收治的34例应用解剖钢板治疗胫骨平台骨折的病例。结果本组患者均获随访,随访时间12—24个月,平均18个月,骨折均全部愈合,膝关节功能评分参照HSS评分标准,优良率达到91．2％。结论解剖钢板是按照胫骨关节部位解剖特点设计,外形与关节部位骨骼外形匹配,能与骨面贴敷,易于保持骨折复位,为最大限度的恢复关节功能提供了良好的基础,是临床上治疗胫骨平台骨折较好的内固定方法。