高效液相色谱法测定人血清中大黄素的含量

[目的]建立高效液相色谱法测定人体血清中大黄素含量的方法,为人体血清中大黄素浓度的测定及药代动力学、生物利用度研究提供新的定量方法。[方法]采用Nova—PakC18（3．9mm×150mm,4μm）色谱柱,流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液（80：20）,紫外检测器检测,检测波长254nm。[结果]大黄素在（0．1～20）μg／mL范围内具有良好的线性关系,r=0．9993,平均回收率为99．01％,日内RSD为2．16％,日间RSD为3．78％。[结论]本方法操作简单,数据准确,重现性好,适用于人体血清中大黄素浓度的测定及药动学研究。     

重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达

目的 构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能.方法 利用试剂盒对MLCK ATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达:利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体在细胞中的分布:运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度.结果 重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose 4B和Superose 6 HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带.结论 重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带.     

神经外科重症监护室护士压力现状分析及应对措施

压力理论之父Hans Selye认为:生活事件过度或急慢性心理压力可以引发集体应激反应,并出现相应的一系列神经、内分泌功能改变,持续的压力可损害人的神经心理防御机制,从而使免疫功能下降并导致疾病的发生[1]。护士所承受的压力已经成为一种职业性危险[2],护士的     

DEC205在幽门螺杆菌感染的巨噬细胞中的表达

目的:探讨幽门螺杆菌( H pylori)感染与巨噬细胞表面的胞吞受体DEC205的关系.方法:用蛋白纯化法提取得到H pylori-HSP60.分别用H pylori、H pylori-HSP60和E.coli-LPS刺激单核细胞(NOMO1)后提取蛋白进行免疫印迹法分析. 利用PMA将NOMO1细胞分化成巨噬细胞, 再用H pylori或H pylori-HSP60刺激细胞后提取RNA进行实时PCR分析; 细胞表面DEC205抗原的表达通过流式细胞术进行分析.结果:H pylori的刺激能明显引起DEC205蛋白的表达, 而H pylori-HSP60或E.coli-LPS的刺激只引起了少许DEC205蛋白的表达; 经PMA分化后的NOMO1细胞表面DEC205 mRNA的表达增强, 分化后的NOMO1细胞被H pylori或H p y l o r i-HSP60刺激后也增强了DEC205mRNA的表达; 流式细胞术结果表明NOMO1细胞在H pylori刺激后, 细胞表面DEC205抗原的表达明显增加(88.10% vs 7.84%, P<0.05), 而且当NOMO1细胞被PMA分化后, 经H pylori或H pylori-HSP60刺激后DEC205表达也有所增高(74.73%, 51.31% vs 43.77%, 均P<0.05).结论:H pylori感染与巨噬细胞表面的胞吞受体DEC205有着密切的联系.     

医学院校仪器分析实验教学模式探索

仪器分析作为一门随科学发展日益更新的专业课程,具有很强的实践性。针对不同层次、不同专业特点进行仪器分析实验教学的改革和实践,探索仪器分析实验教学的新思路,旨在培养高素质、创新型、应用型人才。     

指导研究生电镜取材的体会

电子显微镜技术现已广泛用于科研、医学领域，用于临床诊断。对于疾病的治疗提供可靠的依据。我们电镜室工作人员主要负责电镜制样工作，但是取材是由研究生和科研人员亲自操作，标本取好后，放入2．5％戊二醛固定后送到我们电镜室。在取材过程中出现的问题最多，如果方法不正确将导致实验结果失败，所以电镜取材是整个样品制备过程中的关键步骤之一。研究生肩负着建设国家的重任，是国家的栋梁，培养研究生是我们当老师的责任。下面是如何指导研究生电镜取材和取材过程中出现的一些问题及怎样解决做一介绍，介绍如下：     

蕲艾治疗溃疡性结肠炎的活性筛选与作用评价

目的评价蕲艾Artemisia argyi的抗炎活性,筛选其最佳抗炎活性部位,确证其对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用。方法采用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立体外炎性细胞模型,给予蕲艾水部位、正丁醇部位、醋酸乙酯部位、石油醚部位进行干预,观察各组细胞形态;采用Griess法测定各组细胞上清液中一氧化氮(nitrite oxide,NO)水平;采用ELISA法检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)、IL-1β水平;采用qRT-PCR法检测各组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS) 和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3 (nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)mRNA 表达情况。利用超高效液相色谱(UPLC)法对最佳抗炎活性部位的主要化学成分进行定量分析。建立2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠UC模型,给予蕲艾醋酸乙酯部位和异泽兰黄素,记录各组小鼠体质量、摄食量和饮水量变化,并进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分;测量结肠组织长度,并采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组小鼠结肠组织病理变化;采用免疫组化法检测各组小鼠结肠组织紧密连接蛋白-1 (zonula occluden-1,ZO-1)表达情况。结果与模型组比较,10μg/mL蕲艾醋酸乙酯部位能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的分化程度,显著降低上清液中NO、TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P0.01),下调 TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2、iNOS 和 NLRP3 mRNA 表达水平(P0.05、0.01)。异泽兰黄素在蕲艾醋酸乙酯部位中具有最高的质量分数,为该部位中的主要成分。与对照组比较,模型组小鼠体质量明显降低(P0.01),DAI评分升高(P0.01),结肠长度缩短(P0.01),结肠组织中TNF-α、IL-6、IL-1β和COX-2 mRNA表达水平显著升高(P0.01),ZO-1表达减少;给予蕲艾醋酸乙酯部位和异泽兰黄素后,上述指标均得到显著改善(P0.05、0.01)。结论蕲艾醋酸乙酯部位具有最佳的体外抗炎活性,醋酸乙酯部位及其主要成分异泽兰黄素对UC小鼠有较好的治疗作用。     

冷冻保存连续冰冻切片在免疫组化染色中的应用

[目的]探讨科研工作中使用连续冰冻切片进行免疫组化染色时切片的保存方法。[方法]将不能马上完成染色的连续冰冻切片采用干燥、密封的方法置于-80℃保存,需要时取出自然干燥后进行常规免疫组化染色。[结果]使用冷冻保存的冰冻切片进行免疫组化染色,组织结构清晰完整,细胞境界分明,染色对比度好,特异性抗原标记明显,与未经冷冻的新鲜切片比较各项观察指标无明显差异。[结论]-80℃冷冻保存冰冻切片的方法是可行的。     

生物显微镜的使用与维护

作者根据在使用显微镜中所积累的经验,对显微镜日常使用中经常会遇到的各种问题、显微镜主要部件的维护与保养方法及其注意事项等作了比较详细的介绍。