改良酶消化法在人脑胶质瘤细胞快速原代培养中的应用

目的 建立一种人脑胶质瘤细胞原代培养的改良酶消化法.方法 基于文献并结合实际工作中经验,改良既往文献报道的酶消化法,对32例不同级别的胶质瘤进行消化后行原代细胞培养,通过倒置相差显微镜观察肿瘤细胞的形态学特点,传代时采用差速贴壁法对原代细胞进行纯化.采用细胞免疫荧光法对原代细胞进行鉴定,通过细胞增殖实验(CCK-8法)绘制生长曲线,研究体外培养细胞的增殖情况.结果 采用改良的酶消化法成功培养28例,失败4例,成功率为87.5％.培养成功的细胞贴壁生长,细胞状态稳定,形态各异,生长状态良好,并可传代.细胞免疫荧光检测显示胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,证明培养的细胞为胶质瘤细胞;细胞增殖实验显示细胞在体外增殖活跃,肿瘤病理级别越高,细胞增殖能力越强.结论 改良的酶消化法用于人脑胶质瘤细胞原代培养具有简单、高效、成功率高等优点.     

Ｗｉｌｌｉｓ环及脑白质变化对急性缺血性脑卒中静脉溶栓患者预后的影响

目的 探讨急性缺血性脑卒中患者 Ｗｉｌｌｉｓ环的形态特征与脑白质病变（ＷＭＬ）关系，分析两指 标对静脉溶栓预后 １年的影响。方法 收集分析急性缺血性脑卒中静脉溶栓患者发病时 Ｗｉｌｌｉｓ环形态特征 与 ＷＭＬ关联性，并观察其溶栓 １年后的预后情况，同时纳入溶栓预后危险因素进行多因素 ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析。 结果 本研究患者 ２３２例，男 １７２例，女 ６０例，不同部位 Ｗｉｌｌｉｓ环变异的 ＷＭＬ评分高于 Ｗｉｌｌｉｓ环完整组（Ｆ＝ ５.５９４，Ｐ＝０.００３）。影响患者 １年预后不良（复发／死亡）的危险因素包括：ＷＭＬ评分（ｒｓ＝０.１５５，Ｐ＝０.０１８）、 Ｗｉｌｌｉｓ变异（ｒｓ＝０.１６２，Ｐ＝０.０１４）、溶栓前血糖（ｒｓ＝０.１４７，Ｐ＝０.０３０）。ｌｏｇｉｓｔｉｃ逐步回归分析显示 ＷＭＬ评分 （９５％ＣＩ１００３～１４３２）、Ｗｉｌｌｉｓ变异（９５％ＣＩ１０３２～３４９７）是急性缺血性脑卒中溶栓患者１年预后不良的相 关危险因素。结论 Ｗｉｌｌｉｓ环变异和 ＷＭＬ是急性缺血性卒中静脉溶栓后 １年预后的不良（复发／死亡）危险 因素。     

pEGFP-ING4真核表达载体的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的构建携带生长抑制因子4(ING4)基因的真核表达载体pEGFP-ING4并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),为进一步研究ING4对胶质瘤血管生成影响提供基础。方法提取人胎盘细胞中总RNA,RT-PCR扩增ING4并克隆至pEGFP-C2载体,酶切电泳鉴定出阳性克隆送测序,利用靶向转染试剂jetPEI-HUVEC转染HUVEC,通过免疫组化检测转染细胞中ING4的表达。结果 成功扩增ING4基因,基因全长747 bp。重组质粒pEGFP-ING4的酶切鉴定及测序结果均证明ING4基因成功克隆到真核表达载体中。酶切片段电泳结果表明:目的条带与ING4的开放读码框大小相符;测序结果和ING4的开放读码框比对相似性为100%。转染重组质粒后的HUVEC中ING4蛋白表达水平增强。结论本实验成功构建携带ING4基因的真核表达载体pEGFP-ING4,并可在HUVEC中获得ING4蛋白的增强表达。     

ING4蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨ING4(inhibitor of growth family4)蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法 用PEI转染ING4蛋白过表达(pEGFP-C2/ING4转染组)及阴性对照载体(pEGFP-C2转染组)至人胶质瘤U251细胞,G418筛选后建立ING4蛋白稳定表达细胞株;RT-PCR、免疫...     

Circ-0080229结合蛋白的筛选及其在胶质瘤调控中的意义

目的鉴定EGFR基因来源的环状RNA circ-0080229在胶质瘤中所结合的蛋白,并分析其在胶质瘤调控中所发挥的作用。方法通过PCR技术验证circ-0080229在胶质瘤中高表达,再应用RNA结合蛋白纯化实验及蛋白质谱技术,分析circ-0080229所结合的蛋白质。利用TCGA数据库进行circ-0080229结合蛋白的差异表达分析及生存分析,筛选出最有价值的circ-0080229结合蛋白ANXA2,并进行细胞功能实验的验证。结果共有33个蛋白可与circ-0080229结合,其中以ANXA2和SIL1为代表的蛋白与胶质瘤病理分级和预后相关。在胶质瘤U251细胞系中,下调ANXA2的表达可显著抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论环状RNA circ-0080229可特异性结合ANXA2等RNA结合蛋白,同时circ-0080229结合蛋白ANXA2可促进胶质瘤的增殖能力、迁移能力与侵袭能力。     

颅骨骨膜减张修补硬脑膜在急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术中的应用

目的分析比较急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术中,颅骨骨膜瓣减张修补硬脑膜与常规缝合硬脑膜的临床疗效。方法回顾性统计分析2016年1月份~2017年6月份我院急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术患者的预后,采用曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)分析颅骨骨膜瓣减张修补硬脑膜(观察组,n=26)与常规缝合硬脑膜(对照组,n=241)两组患者GOS的差异。结果两组组患者GOS比较,U检验发现硬脑膜减张缝合组(观察组)的GOS与对照组之间的差异具有统计学意义(P0.05)。结论硬脑膜减张缝合组的患者预后明显优于常规缝合组,并发症明显小于对照组。     

siRNA干扰微管微丝交连因子1表达增强替莫唑胺诱导的胶质瘤细胞毒性

目的 研究微管微丝交连因子1(MACF1)在胶质母细胞瘤应对TMZ刺激中的作用.方法 替莫唑胺刺激人类胶质母细胞瘤细胞系U87细胞后,通过Western blot、RT-PCR和免疫荧光检测其蛋白表达和细胞内定位.通过RNA干扰技术干扰MACF1的表达.通过裸鼠皮下成瘤和免疫组化检测在活体中TMZ刺激后胶质母细胞瘤中MACF1的表达.结果 在体外培养和体内成瘤中均发现替莫唑胺刺激后胶质母细胞瘤MACF1的表达上调(差异约2倍),胞内分布改变(P＜0.01).敲除MACF1表达的胶质母细胞瘤细胞在TMZ刺激后其增殖能力下调约45％(P＜0.01).替莫唑胺诱导胶质母细胞瘤MACF1表达上调的同时,其细胞骨架发生重组.结论 MACF1可能成为胶质母细胞瘤治疗的一个潜在靶点.     

1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖靶向NFKB2的分子对接研究

目的:1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖是否可与NFKB2形成良好的分子对接,形成稳定的相互作用。方法:使用Auto Dock软件计算NFKB2与PGG的结合模式和亲和力。结果:PGG与受体NFKB2具有较好的对接,可形成稳定的相互作用,极性相互作用及氢键是主要的相互作用类型。结论:PGG很有可能通过NFKB2发挥作用,NFKB2很有可能是PGG的作用靶点。     

高血压脑出血钻孔引流术中血肿组织清除情况与炎症因子水平的关系研究

目的研究钻孔引流术清除高血压脑出血患者血肿组织清除情况与炎症因子水平。方法选取我院2016年3月～2018年3月行血钻孔引流术治疗的高血压脑出血患者112例,根据术后24h内头颅CT复查结果将其分为完全清除组(残留血肿体积≤5ml)62例和部分清除组(残留血肿体积≥10ml)50例。观察两组患者治疗1、2周的炎症因子水平、血流参数水平、出血量及周围水肿情况。结果治疗1、2周,完全清除组TNF-α、TXB2、SF水平均明显低于部分清除组(P0.05);治疗1、2周,完全清除组平均血流量、平均血流速水平均明显高于部分清除组(P0.05);治疗1、2周,完全清除组外周阻力水平均低于部分清除组(P0.05);治疗1、2周,完全清除组出血量、周围水肿量均低于部分清除组(P0.05)。结论采用钻孔引流术完全清除高血压脑出血患者的血肿组织,患者的炎症水平将明显降低,且能有效减少术后出血及水肿。