月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

基于骨组织工程技术比较骨碎补总黄酮两种给药方式修复大鼠大段骨缺损模型的效果

背景:复合材料支架治疗大段骨缺损已被证实有效,但骨修复缓慢、成骨质量不佳是其主要问题.骨碎补总黄酮可促进成骨、加速骨愈合,但骨碎补总黄酮给药途径依然局限于灌胃形式,局部载药直接作用于骨缺损部位方式的研究仍相对不足.目的:构建骨碎补总黄酮缓释微球/β-磷酸三钙复合支架,观察骨碎补总黄酮局部给药与灌胃两种方式修复大鼠胫骨大...     

月华丸(胶囊)对耐多药结核菌感染自噬相关蛋白LC3的影响

目的:观察月华丸(胶囊)对结核分枝杆菌感染巨噬细胞自噬的影响,探寻其抗结核分枝杆菌的药效药理作用及其机制。方法:以月华丸(胶囊)含药血清干预感染结核分枝杆菌小鼠的单核巨噬细胞(RAW264. 7),实验共分为5组:阴性对照组、10%月华丸(胶囊)含药血清组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华丸(胶囊)含药血清组、自噬诱导剂雷帕霉素(Rep)组,另设未被感染的细胞为正常组。采用免疫荧光染色法检测LC3。结果:阴性对照组细胞胞浆中未见LC3蛋白颗粒。与阴性对照组比较,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组细胞胞浆中可见少量LC3蛋白颗粒,10%月华丸(胶囊)含药血清组及Rep组细胞胞浆LC3蛋白颗粒均明显增多,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组多于10%月华丸(胶囊)含药血清组。结论:月华丸(胶囊)含药血清能诱导被耐多药结核菌感染巨噬细胞自噬。     

基于肌肉功能和质量探讨肌肉与膝骨关节炎关系的研究进展

膝骨关节炎(KOA)不仅与软骨、骨的病变相关, 也与肌肉功能和质量的改变相关。肌肉强度、肌肉量、肌肉横截面积、肌肉厚度、肌肉疲劳度等是描述肌肉功能和质量的重要客观量化指标。研究显示, KOA可使肌肉功能和质量发生改变。因此, 对于肌肉功能和质量的量化显得尤为重要。本文系统地回顾了临床上肌肉功能和质量的常见指标和测量方法, 同时讨论了其与KOA的关系, 并整理总结了恢复肌肉功能和质量对KOA患者症状和生活质量改善的意义。     

大承气汤课堂教学设计和实施

方剂学是中医药高等院校的主干课程.方剂是中医临床防治疾病的主要工具和手段,以“汤剂”最为常见和独显特色.方剂学的教学任务,是要使学生在对一定量方剂的学习过程中达到“知方”“析方”“用方”.“知方”就是对每一首方剂的主治、组成药物、功用最基本内容的掌握,以“知其然”;“析方”就是进一步理解方剂的制方原理和配伍规律等,以“知其所以然”;“用方”就是具备“辨证用方”及“举一反三”的临床用方能力,这是学习方剂的最主要目的.因此,“教好”方剂学,进而帮助学生“学好”方剂显得尤其重要.     

MyotonPRO用于评估健康青年人股四头肌肌肉弹性的信度研究

目的:检验MyotonPRO肌肉弹性测试仪测量健康青年人股直肌、股内侧肌及股外侧肌肌肉弹性的复测信度和测试者间信度.方法:本研究纳入了38例健康青年人,采用MyotonPRO评估放松状态下的股直肌、股内侧肌及股外侧肌肌肉弹性,计算组内相关系数(ICC)、绝对信度,两次测量结果绘制成Bland-Altman图并进行系统偏...     

消炎散中活血化瘀药含药血清对成软骨诱导下兔骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路及SOX9影响的研究

目的探讨消炎散中活血化瘀药含药血清对成软骨诱导下兔间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)Wnt/β-catenin信号通路及SOX9的影响。方法提取并培养MSCs,先分为成软骨细胞诱导剂组和未成软骨细胞诱导剂组,每组又分为不加血清组、含药血清组、空白血清组、sFRP-3组。采用流式细胞仪检测细胞周期情况,运用RT-PCR、Western Blotting检测Wnt信号通路相关Wnt5a、β-catenin,SOX9基因及蛋白水平表达的变化。结果RT-PCR及Western Blotting显示,活血化瘀含药血清抑制诱导前MSCs表达Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白,促进SOX9 mRNA和蛋白表达,而对诱导后的MSCs促进Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白表达,抑制SOX9 mRNA和蛋白表达。结论消炎散中活血化瘀药含药血清可通过作用Wnt/β-catenin信号通路,改变SOX9的表达水平,进而影响MSCs的软骨分化。     

加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将体外培养的兔关节软骨细胞按随机数表分为6组:空白对照组,模型组,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组及Wnt信号通路阻断剂组,后五组予白介素-1β诱导为退变软骨模型,然后予不同剂量的含药血清及s FRP-3干预。采用流式细胞仪检测细胞生长及周期情况,实时荧光定量PCR检测Wnt/β-catenin mRNA的表达。结果流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组比较,模型组及加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组细胞生长情况明显减慢。实时荧光定量PCR检测结果显示,与模型组相比,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组β-catenin mRNA均有降低。结论加味独活寄生合剂含药血清对白介素-1β诱导为退变软骨模型有一定的保护作用,其作用机制可能与调控Wnt信号通路有关。     

成血管-成骨耦联相关因子、细胞在骨中作用机制的研究进展

血管生成与骨生成是促进骨骼生长发育和维持骨量平衡不可或缺的部分,二者之间的耦联作用贯穿骨发育和重塑的整个过程,在新骨生成、骨折愈合、骨缺损修复以及骨质疏松症防治等方面的机制中扮演重要角色。其中血管内皮细胞和血管内皮生长因子等生物活性成分是成血管-成骨耦联中的关键部分,尤其是近些年特异性H型血管的发现丰富了成血管-成骨耦联内容,加深了对二者耦联作用的了解。血管与骨联系密切而又相互作用,血管对于骨骼的意义不仅体现在为骨生长和修复发挥转输氧气、营养物质、生长因子及代谢废物的作用,更为重要的是分泌因子、信号传递、功能调控等方面,而成骨细胞能够分泌或促进分泌血管内皮生长因子等促血管生成因子,对血管生成具有调节作用。故笔者就成血管-成骨耦联相关因子、细胞及机制在骨中所起的作用进行综述。