重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓问充质干细胞

目的探讨重组质粒plRESneo-EGFP-BDNF构建及转染至骨髓问充质干细胞（MSCs）制备BDNF基因工程细胞的方法。方法将pEGFP（N1）-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结,构建携带BDNF的高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF,采用电转染技术转染骨髓MSCs,经G418筛选,通过倒置荧光显微镜判断转染效率,采用Westernblot方式判定转染细胞是否表达BDNF蛋白。结果经过双酶切鉴定,pIRESneo-EGFP-BDNF携带EGFP及BDNF基因,以EGFP为报告基因,质粒构建成功;通过电穿孔技术以及G418筛选,提高plRESneo-EGFP-BDNF转染骨髓MSCs效率。结论成功制备高效表达携带BDNF基因的质粒,且转染骨髓MSCs,为进一步开展BDNF基因治疗神经系统变性疾病奠定基础。     

新型标准肾镜联合微造瘘经皮肾镜术一期双通道治疗复杂性肾结石（附46例报告）

目的探讨彩超引导下建立一期双通道用新型标准肾镜联合微造瘘经皮肾镜术治疗复杂性肾结石的可行性与临床疗效。方法回顾性分析采用新型标准肾镜联合微造瘘肾镜治疗46例复杂性肾结石患者的临床资料,单侧肾结石39例,双侧肾结石7例,铸型肾结石21例,多发性肾结石15例,结石直径2．5～6．5cm,有开放性取石史手术3例。结果46例中一期双通道均成功建立,手术时间60～150min,平均100min,术中出血50～120ml,平均70ml,无术中输血。术后住院时间6～14d,平均7d,结石清除率89．1％,无胸腹腔脏器损伤等严重并发症发生。结论彩超引导下一期建立双通道用新型标准肾镜联合微造瘘经皮肾镜术治疗复杂性结石安全高效、住院时间缩短,结石清除率提高。     

Smac和XIAP基因在肾细胞癌中的表达及意义

目的 探讨Smac和XIAP基因在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测95例肾癌标本不同分型、分级、分期及10例正常肾组织中Smac和XIAP的表达,分析其表达与肾癌分级、分期的关系及二者表达相关性.结果 Smac在各型肾细胞癌中随分期、分级的增加表达减低,XIAP在各型肾细胞癌中随分期、分级的增加表达增高,二者的表达呈负相关.结论 Smac和XIAP表达与肾细胞癌分期、分级关系密切,共同参与了肾癌的发生发展. Abstract： Objective To study the expression and significance of Smac and XIAP in renal cell carcinoma(RCC). Methods The expressions of Smac and XIAP were detected using SP immunohistochemical technique in 95 cases of RCC and 10 cases of normal renal tissue. Results The postitive expressions of Smac were statistically significant differences in different clinical statges. The postitive expressions of XIAP were higher in RCC related to the lower histological grade. Smac protein and XIAP protein expression had negative correlation. Conclusions It indicate that Smac and XIAP may play an important role in RCC. The expression of Smac and XIAP are statistically significant associated with tumor grade and clinical stage.     

移植脑源性神经营养因子转染的骨髓间充质干细胞对AD大鼠的影响

目的:研究移植脑源性神经营养因子(BDNF)转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)对阿尔茨海默病(AD)大鼠N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)及认知功能的影响。方法:将50只SD大鼠随机平均分为正常对照组、假手术组、AD组、MSCs组、BDNF组。正常对照组不予任何处理,其他4组制备AD模型;MSCs组和BDNF组于制模第11天分别注入10μL(约5×106)MSCs或pIRESneo-EGFP-BDNF转染的MSCs。采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,免疫组化染色法测定NMDAR1水平。结果:MSCs组、BDNF组与AD组比较平均逃避潜伏期(AEL)明显缩短、跨平台次数显著增加;BDNF组较MSCs组改善更显著(P<0.01),NMDAR1水平更高(P<0.01)。结论:BDNF转染骨髓MSCs对AD大鼠的认知有改善作用,且促进海马区NMDAR1的表达。     

重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞

目的 探讨重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染至骨髓间充质干细胞(MSCs)制备BDNF基因工程细胞的方法.方法 将pEGFP(N1)-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结,构建携带BDNF的高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF,采用电转染技术转染骨髓MSCs,经G418筛选,通过倒置荧光显微镜判断转染效率,采用Western blot方式判定转染细胞是否表达BDNF蛋白.结果 经过双酶切鉴定,pIRESneo-EGFP-BDNF携带EGFP及BDNF基因,以EGFP为报告基因,质粒构建成功;通过电穿孔技术以及G418筛选,提高pIRESneo-EGFP-BDNF转染骨髓MSCs效率.结论 成功制备高效表达携带BDNF基因的质粒,且转染骨髓MSCs,为进一步开展BDNF基因治疗神经系统变性疾病奠定基础.     

转染pIRESneo-EGFP-BDNF的骨髓间充质干细胞侧脑室注射对帕金森大鼠行为学的影响

[目的]观察转染pIRESneo- EGFP-BDNF的骨髓间充质干细胞(MSCs)侧脑室注射对帕金森病(PD)大鼠行为学的影响.[方法]将pEGFP(N1)-BDNF与pIRESneo进行双酶切后再连接,构建高拷贝质粒pIRESneo-EGFPBDNF,采用电穿孔法将其转染MSCs.采用6-羟多巴(6-OHDA)制备PD大鼠模型(36只),造模成功后将其随机分为3组,每组12只.B组为模型组:侧脑室注射生理盐水;C组:侧脑室注射MSCs;D组:侧脑室注射转染pIRESneoEGFP-BDNF的MSCs;A组(12只大鼠,为假手术组):以生理盐水代替6-OHDA后,侧脑室注射生理盐水.分别于侧脑室注射后2、4、8周腹腔注射阿扑吗啡(APO)诱导大鼠旋转,观察各组大鼠行为学变化.[结果]经双酶切鉴定,pIRESneo-EGFP-BDNF构建成功.侧脑室注射细胞干预PD大鼠模型后2、4、8周,大鼠旋转次数D组＜C组＜B组(P均＜0.05);D组大鼠旋转次数明显减少,但仍较A组多.[结论]侧脑室注射转染plRESneo-EGFP-BDNF的MSCs能明显改善PD大鼠的行为能力.     

移植BDNF修饰骨髓间充质干细胞对帕金森病模型大鼠TH表达的影响

目的:观察移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)对帕金森病模型大鼠TH表达的影响。方法:采用电穿孔法将pIRESneo-EGFP-BDNF转染至骨髓MSCs;通过脑内注射6-OHDA制备PD大鼠模型,随机分为Sham组,PD组,MSCs组,BDNF组,经侧脑室移植MSCs或pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓MSCs,术后2、4、8周,腹腔注射阿朴吗啡诱导PD大鼠旋转行为,移植BDNF修饰骨髓MSCs在大鼠脑组织内的迁移,采用免疫组化及Western blot方法测定各组大鼠中脑黑质TH蛋白表达的变化。结果:移植术后2、4、8周MSCs组和BDNF组大鼠与PD组比较旋转次数明显减少(P<0.05),以BDNF组较MSCs组比较改善更为明显(P<0.05),移植细胞干预PD模型大鼠8周后中脑黑质TH表达,BDNF组较MSCs组、PD组明显增高(P<0.05),移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓MSCs可以在PD大鼠脑内存活,并迁移至远处。结论:经侧脑室移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰的骨髓MSCs通过提高中脑黑质TH的活性,能够明显改善PD模型大鼠的行为能力。     

移植脑源性神经生长因子修饰骨髓间充质干细胞对帕金森病大鼠模型治疗作用的实验研究

目的：观察移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）大鼠的研究。方法：将pEGFP（N1）-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结,构建高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF,采用电穿孔法转染骨髓MSCs;制备PD大鼠模型,随机分为假手术组、PD组、MSCs组、脑源性神经生长因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）组,经侧脑室移植MSCs或pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓MSCs术后2、4、8周,腹腔注射阿朴吗啡诱导PD大鼠旋转行为;采用Western blot方法测定中脑黑质BDNF、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）蛋白的含量。结果：双酶切鉴定pIRESneo-EGFP-BDNF构建成功;移植术后2、4、8周MSCs组和BDNF组大鼠与PD组比较旋转次数明显减少（P<0.05）,以BDNF组较MSCs比较改善更为明显（P<0.05）;移植细胞干预PD模型8周后中脑黑质BDNF、TH蛋白的含量,BDNF组较MSCs组、PD组明显增高（P<0.05）。结论：经侧脑室移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰的骨髓MSCs能明显改善PD大鼠的行为能力,显著提高中脑黑质BDNF、TH蛋白的含量。     

BDNF基因修饰骨髓间充质干细胞对AD大鼠认知障碍的改善

目的:研究经侧脑室移植脑源性神经生长因子(BDNF)修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)对AD大鼠认知功能的改善作用。方法:采用双侧海马注射Aβ25-35制备AD大鼠模型,筛选40只雄性SD大鼠随机分为5组,假手术组(Sham组),AD模型组(AD组),移植骨髓MSCs治疗组(MSCs组),移植pIRESneo转染的骨髓MSCs治疗组(CON组)和移植pIRESneo-EGFP-BDNF转染的骨髓MSCs组(BDNF组),每组各8只。采用Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力。结果:AD组与Sham组大鼠比较平均逃避潜伏期(AEL)延长、跨越平台次数明显减少(P<0.01),搜索策略明显差(P<0.01);MSCs组、CON组、BDNF组与AD组大鼠比较AEL明显缩短、跨越平台次数显著增加(P<0.05或P<0.01),搜索策略显著好转(P<0.01),且BDNF组与CON组、MSCs组大鼠比较改善更显著(P<0.05或P<0.01)。结论:经侧脑室移植BDNF修饰的骨髓MSCs可以显著改善AD大鼠的学习认知能力。