人卵巢颗粒细胞分离培养的优化及生物学特性

目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性。方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基∶卵泡液=1∶1)进行培养。比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况。利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4、Sox2的表达,应用流式细胞术检测CD44、CD73、CD45的表达。结果:hGCs培养24 h贴壁良好,细胞间伸出伪足。对照组和实验组分别在培养14 d和21 d后出现凋亡。实验组雌激素的分泌显著增加,第9天出现高峰,第21天显著下降。培养第7天实验组Oct4和Nanog mRNA表达显著增加。培养7 d后,CD44、CD73表达阳性, CD45表达阴性。结论:该方法简单、有效,可获得大量hGCs。培养基中添加卵泡液有益于hGCs的生长,增加培养天数。同时hGCs可分泌雌激素并具有一定的干细胞特性。     

白藜芦醇干预缺血后处理对受损H9C2心肌细胞修复的研究

目的近年来研究发现白藜芦醇（Resveratrol,RSV）具有抗氧化、清除自由基、减轻缺血再灌注损伤等作用。将其与减轻缺血再灌注损伤的主要手段——缺血后处理（Ischemic Postconditioning,IPO）相结合,共同作用于体外培养的H9C2心肌细胞受损模型。方法采用免疫细胞化学、western blot以及RT-PCR等方法,观察这种共同作用对体外培养的H9C2心肌细胞受损模型细胞增殖的影响。结果 p38表达量随着RSV＋IPO的干预和时间的延长而增加;通过直观和检测cyclinA2发现H9C2细胞数量因加入干预手段有所增加,cyclinA2的表达量也有相同趋势。结论研究结果表明,该方法不仅可以抑制细胞凋亡,更具有促进细胞增殖的作用。     

原花青素联合缺血后处理对H9C2心肌细胞的保护作用

目的观察原花青素(procyanidine,PC)与缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)联合干预H9C2心肌细胞,对其凋亡率及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)的作用。方法将培养的H9C2心肌细胞分为正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、原花青素+缺血后处理组(PC+IPO组)。利用AO-EB染色法检测H9C2心肌细胞的凋亡率;利用Western blotting方法检测H9C2心肌细胞P-p38MAPK蛋白表达情况。结果对细胞凋亡率的影响:IPO单独和联合PC干预H9C2心肌细胞0、12h、24h后,各时间点IPO组和PC+IPO组细胞凋亡率均低于I/R组(P<0.01)。12h时,PC+IPO组细胞凋亡率低于IPO组(P<0.05)。对P-p38MAPK表达的影响:12h时,I/R组表达高于C组(P<0.01);PC+IPO组和IPO组表达低于I/R组(P<0.01),同时PC+IPO组低于IPO组(P<0.05)。结论 IPO单独和联合PC干预均可通过减少心肌细胞凋亡起到心肌保护作用,并且PC联合IPO更有效。该保护作用机制可能与抑制p38MAPK有关。     

NIMA相关蛋白激酶7、Nod样受体蛋白3与多囊卵巢综合征炎症指标相关性研究

目的探讨卵巢颗粒细胞中NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)和Nod样受体蛋白3(NLRP3) mRNA表达量与多囊卵巢综合征(PCOS)患者炎症指标的相关性及其预测价值。方法选取2018年8月至2019年3月来山西省儿童医院/山西省妇幼保健院生殖中心就诊的30例PCOS患者为研究组和同期由于男方因素或输卵管因素就诊的34例非PCOS不孕症患者为对照组。取卵日收集行IVF/ICSI-ET患者的卵泡液和颗粒细胞,检测卵泡液中炎症因子白介素(IL)-1β、IL-18的表达以及颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达,并将NEK7、NLRP3的mRNA表达量与各指标进行相关性分析。最后应用受试者工作特征曲线(ROC)分析NEK7、NLRP3 mRNA对PCOS的预测价值。结果研究组体重指数(BMI)和获卵数显著高于对照组,且LH、LH/FSH、睾酮(T)水平亦显著高于对照组(P均<0.05)。研究组卵泡液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达显著高于对照组,卵巢颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达亦显著高于对照组(P均<0.05)。相关性分析结果显示,研究组患者卵巢颗粒细胞中NEK7和NLRP3 mRNA水平与血清基础LH、LH/FSH、炎症因子IL-1β、IL-18均呈显著正相关(P均<0.05)。ROC分析结果显示,NEK7是PCOS的有效预测因子,预测炎症的曲线下面积为0.741,临界值为1.154。结论 NEK7、NLRP3可能通过促进IL-1β、IL-18的释放影响PCOS炎症的发生及发展,且NEK7是PCOS的有效预测因子,可能为PCOS的临床治疗提供新思路。     

原花青素联合缺血后处理对H9C2心肌细胞的保护作用

目的观察原花青素（procyanidine,PC）与缺血后处理（ischemic postconditioning,IPO）联合干预H9C2心肌细胞,对其凋亡率及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（P－p38MAPK）的作用。方法将培养的H9C2心肌细胞分为正常对照组（c组）、缺血再灌注组（I／R组）、缺血后处理组（IPO组）、原花青素＋缺血后处理组（Pc＋IP0组）。利用A0－EB染色法检测H9c2心肌细胞的凋亡率;利用Westernb lotting方法检测H9C2心肌细胞P－p38MAPK蛋白表达情况。结果对细胞凋亡率的影响：IPO单独和联合PC干预H9C2心肌细胞0、12h、24h后,各时间点IPO组和PC＋IP0组细胞凋亡率均低于I／R组（P〈0．01）。12h时,PC＋IPO组细胞凋亡率低于IP0组（P〈O．05）。对P—p38MAPK表达的影响：12h时,I／R组表达高于C组（P〈0．01）;PC＋IPO组和IPO组表达低于I／R组（P〈0．01）,同时PC＋IPO组低于IP0组（P〈0．05）。结论IPO单独和联合PC干预均可通过减少心肌细胞凋亡起到心肌保护作用,并且PC联合IP0更有效。该保护作用机制可能与抑制p38MAPK有关。     

按不同肥胖标准诊断的肥胖多囊卵巢综合征患者内分泌和代谢特征的比较

目的:比较按不同肥胖标准诊断的肥胖多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者的内分泌和脂代谢情况,为PCOS患者的个性化诊治提供依据。方法:选择2012年1月—2013年1月诊治的98例PCOS患者,以体质量指数(BMI)≥24 kg/m2为肥胖标准,将PCOS患者分为肥胖A组(n=72)和非肥胖组A组(n=26);以腰臀比(WHR)≥0.8为肥胖标准,将PCOS患者分为肥胖B组(n=84)和非肥胖B组(n=14);以BMI≥24 kg/m2且WHR≥0.8为肥胖标准,将PCOS患者分为肥胖C组(n=64)和非肥胖C组(n=6,BMI24kg/m~2且WHR0.8)。记录各组PCOS患者的临床指标,并检测空腹血糖(FBS)、空腹胰岛素(FIN),测定基础性激素促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)以及脂代谢相关指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。结果:肥胖A组的LH/FSH、FIN、HOMA-IR、TG显著高于非肥胖A组,并且肥胖A组月经初潮年龄提前(P0.05);肥胖B组FIN、HOMA-IR、TG、LDL-C显著高于非肥胖B组,但肥胖B组的HDL-C水平较低(P0.05);肥胖C组FIN、HOMA-IR显著高于非肥胖C组,且肥胖C组月经初潮年龄提前、HDL-C水平降低(P0.05)。多重线性相关性分析结果显示,WHR、BMI均与FBS相关。结论:按同肥胖标准诊断的肥胖PCOS患者的内分泌和脂代谢水平有差异,肥胖会加重患者的内分泌紊乱和脂代谢异常,从而增加远期并发症的风险。     

多囊卵巢综合征患者BMP15及其受体BMPRⅡ异常表达对颗粒细胞增殖的影响

目的 探讨PCOS患者卵泡液中BMP15及其受体BMPRⅡ的异常表达对颗粒细胞增殖的影响及对IVF结局的影响. 方法 将216例行体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)或卵胞质内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的患者分为PCOS组(138例)与正常排卵组(78例),分析两组的临床及IVF指标,检测并比较两组卵泡液BMP15及颗粒细胞的BMPRⅡ、Bcl-2及Caspase-3的表达水平,采用流式细胞仪对患者颗粒细胞的凋亡率进行检测分析. 结果 两组MⅡ卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率比较,差异无统计学意义;PCOS组年龄、BMI指数、基础性激素E2、LH、获卵数及T水平高于对照组,可移植胚胎率、PRL、基础FSH水平及Gn用量低于对照组,差异均有统计学意义.PCOS组颗粒细胞凋亡细胞的DNA含量高于对照组,卵丘颗粒细胞内Bcl-2转录水平低于对照组,而Caspase-3及BMPRⅡmRNA转录水平高于对照组,差异均有统计学意义.PCOS组卵泡液中BMP15低于对照组,差异有统计学意义. 结论 PCOS患者体内卵源性因子BMP15及其受体BMPRⅡ的异常表达可能是影响颗粒细胞增殖能力的原因之一.     

富硒平菇对老年大鼠脾淋巴细胞凋亡及血清sIL-2R的影响

[目的]研究富硒平菇对老年大鼠脾淋巴细胞的凋亡和血清sIL-2R分泌的影响。[方法]健康18月龄Wistar大鼠66只,雌雄各半,随机分为对照组,富硒平菇A、B组,亚硒酸钠A、B组,普通平菇A、B组。与基础饲料同时给予:含0.4mg/kg或0.6mg/kg含硒量的富硒平菇或亚硒酸钠或等重量普通平菇。123d末处死,测定全血硒含量,血浆sIL-2R含量。流式细胞术检测脾脏淋巴细胞的凋亡情况。[结果](1)饲料添加0.4mg/kg和0.6mg/kg富硒平菇能升高全血硒含量;抑制脾淋巴细胞凋亡,并有剂量依赖关系。两组抑制率分别为31.62%和40.70%;(2)0.4mg/kg富硒平菇使血清sIL-2R含量降低,0.6mg/kg富硒平菇使其升高;(3)与同剂量亚硒酸钠组比较,富硒平菇A、B组脾淋巴细胞凋亡抑制率更高、sIL-2R含量更低。[结论]富硒平菇可抑制老年大鼠脾淋巴细胞凋亡,适量补充可降低sIL-2R分泌,并调节老年大鼠免疫功能。     

吡格列酮对高脂血症大鼠缺血/再灌注心肌细胞膜流动性的影响

目的 建立食源性高脂血症大鼠心肌缺血/再灌注模型,观察吡格列酮对高脂血症并发缺血/再灌注大鼠心肌细胞膜流动性的影响.方法 Wistar大鼠随机分为对照组(基础饲料喂养)、高脂组(高脂饲料喂养).4周后,高脂组大鼠再随机分为高脂组和高脂+吡格列酮干预组,8周末实施心肌缺血/再灌注,通过Langendorff灌流装置酶液灌流分离单个心肌细胞,利用荧光标记物DPH插入其细胞膜脂质双层,测定荧光偏振值(p),并计算膜脂微黏度(η).4周和8周(实验期末)末分别采血,检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)含量.实验期末测定谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量.结果 与对照组比较,高脂组血清中TG、TC、HDLC含量显著升高(P＜0.05);吡格列酮组与高脂组比较可显著降低血清中TG、TC含量(P＜0.01);吡格列酮使血清中MDA含量下降(P＜0.05),GPX和SOD活性上升(P＜0.05);吡格列酮组荧光偏振度p值和膜脂微黏度η值均小于高脂组(P＜0.05).结论 吡格列酮保护心肌细胞膜的正常流动性,可能与其降脂、抗氧化保护细胞膜的结构相关.