CPNE1蛋白在肺腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨CPNE1在人肺腺癌组织中的表达,探讨该基因在肺腺癌中的临床意义。方法收集128例肺腺癌组织和30例肺癌旁肺组织,采用免疫组化法检测CPNE1蛋白表达,并分析其与肺腺癌临床病理特征间的关系。结果CPNE1蛋白表达在肺腺癌组织中显著高于癌旁组织(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ期肺腺癌中CPNE1阳性表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌(P<0.05);CPNE1表达在有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论CPNE1在肺腺癌组织中表达增高,并与肺癌的分期、淋巴结转移相关;CPNE1可作为评估肺癌患者病变范围和预后的标志物。     

重组人源化ING4基因的构建及其对肺癌NCI-H460细胞生长抑制作用

目的:构建重组人源化hING4基因并探究其对肺癌细胞的生长抑制效应.方法:以pcDNA3.0-mING4重组质粒为模板.通过定点突变技术构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-hING4基因.用荧光显微镜和RT-PCR法检测hING4在肺癌细胞中的表达;Westem印迹法检测hING4对肺癌细胞中Bax、Bcl-2表达的影响;集落形成试验和FCM法检测hING4对肺癌细胞增殖和凋亡影响.结果:基因测序和PCR结果提示成功构建人源化Ad-hING4基因;并能在肺癌细胞中表达,对肺癌细胞有细胞毒作用;Westem印迹法检测结果提示基因在上调Bax表达同时下调Bel-2的表达;集落形成试验、FCM检测结果提示hING4基因可抑制肺癌细胞增殖并诱导凋亡.结论:成功构建了Ad-hING4基因,并能在体外抑制肺癌细胞生长.     

人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达

目的构建表达人脑源性神经营养因子hBDNF的基因工程菌。方法人工合成1对含EcoRI和BamHI限制性酶切位点的特异引物，以人血白细胞基因组DNA为模板。应用PCR技术扩增hBDNF成熟肽基因。用A-T克隆法与pUCm-T载体连接后，再定向插入原核表达载体pBV220，将重组体pBV220．hBDNF转化大肠杆菌DH5a，经42℃热诱导表达。结果经限制性酶切和DNA测序证明重组入载体中的DNA片段确为hBDNF，并成功表达出hBDNF蛋白。结论该研究成功地克隆出hBDNF基因编码序列并在大肠杆菌中获得稳定表达，表达效率达25％，为今后生物学活性的研究和神经系统疾病的基因治疗奠定了基础。     

rhIL-18在不同原核表达系统中的表达和活性比较

目的研究rhIL-18包涵体、可溶性（His融合型）两种形式蛋白的生物学活性。方法从已构建的pBV220-IL-18重组质粒中双酶切获取IL-18基因，回收后重组至pLHis质粒构建重组载体。42℃热诱导pBV220-IL-18表达，产生rhIL-18包涵体，IPTG诱导pLHis-IL-18表达，产生可溶性rhIL-18蛋白。两者分别刺激人外周血单个核细胞，ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。结果两种重组表达载体均表达产生了rhIL-18，且均可刺激人PMBC上清产生IFN-γ，可溶性rhIL-18刺激人外周血产生IFN-γ的能力高于包涵体形式的rhIL-18。结论可溶性rhIL-18具有比包涵体形式的rhIL-18更强的活性．这为IL-18原核表达基因工程药物的开发提供了新思路。     

社区卫生服务中心团队模式服务对社区高血压患者的的管理研究进展

社区医疗卫生服务是社区建设中不可或缺的重要组成部分,是各级相关部门积极响应号召,集预防、保健、医疗、康复、健康教育及计划生育技术指导六位于一体的社区医疗卫生服务网络体系。随着人们生活质量的改善,以高血压为首的慢性疾病发病逐年递增。高血压病的管理工作是社区医疗卫生服务的重点内容,如何有效增强社区高血压病的管理力度,是每一位社区医疗工作者均应认真思考的一个问题。本文将结合个人在社区卫生服务中心以站的工作经验,对团队模式规范管理高血压病进行深入探讨。     

mING基因的腺病毒载体的构建与表达

目的构建鼠ING4（肿瘤生长抑制因子4）的腺病毒载体，获得鼠ING4（mING4）重组腺病毒子，为ING4进行肿瘤的基因治疗奠定基础。方法以pcDNA3．0-mING4重组质粒为模板，PCR扩增miNG4，酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV质粒上，PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-mING4，与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌，获得重组腺病毒表达载体pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-mING4，经PacI线性化后转染293细胞，收获腺病毒重组病毒子，RT-PCR鉴定，并用MTT法检测mING4对肝癌细胞SMMC7721的作用。结果成功构建mlNG4的重组腺病毒表达载体pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-mING4，获得了mING4重组病毒子。结论mING4的重组腺病毒表达载体可抑制SMMC7721细胞的生长。     

ING4的原核表达及多克隆抗体的制备

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白，制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a（＋）-ING4，转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a（＋）-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750bp左右的条带，测序结果正确，用IPTG诱导转化菌有30KD大小的目的条带，表达的目的蛋白占菌体总蛋白10％以上，以包涵体形式存在，纯化后其纯度可达70％以上。用纯化的ING4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。     

ING4基因的克隆及其诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

 目的：分离小鼠ING4基因并构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4, 观察ING4基因转染人宫颈癌HeLa细胞后对细胞凋亡的影响。方法:应用RT-PCR技术从小鼠肝组织中扩增得到ING4cDNA。利用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4并用双酶切、PCR、基因测序进行鉴定,然后利用阳离子脂质体lipofectamine将其转染HeLa细胞，用RT-PCR检测ING4基因的表达情况，应用荧光显微镜（Hoechst33258染色）、激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果:RT-PCR产物为约 750 bp 的条带,构建的真核表达载体pcDNA3.0-ING4经双酶切、PCR鉴定均出现 750 bp 大小的条带，基因测序正确, Hoechst33258染色发现pcDNA3.0-ING4转染HeLa细胞的凋亡率（21.25%）明显高于对照组pcDNA3.0转染HeLa细胞的凋亡率（8.91%,P<0.01）。共聚焦显微镜也观察到了典型的细胞凋亡。细胞周期检测显示S期细胞所占百分数pcDNA3.0-ING4转染组高于pcDNA3.0转染组。结论:分离得到了小鼠ING4基因并成功构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4, 初步研究发现该基因转染HeLa细胞后可促使细胞凋亡。     

ING4基因真核表达载体的构建及其功能

目的：构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4,观察ING4基因对人肝癌SMMC7721细胞周期及凋亡的影响。方法：小鼠肝组织经RT-PCR扩增,构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4,分别用双酶切、PCR、基因测序进行鉴定,将其转导进入人肝癌SMMC7721细胞,检测ING4基因的表达情况及其对细胞周期的影响,应用荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况。结果：RT-PCR产物为约750bp的条带,基因测序正确,转导进入人肝癌细胞株SMMC7721后可延长G2期,其凋亡率（23.66％）明显高于对照组（13.75％）。结论：成功分离得到了小鼠ING4基因并成功构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4,该质粒转染人肝癌SMMC7721细胞后可延长G2期并可促使细胞凋亡。     

左氧氟沙星致跟腱炎并高热

患者男,42岁,因发热胸闷4d,于2003年3月6日来院治疗,既往无药物过敏史。查体:T38.3℃,P106次·min-1,R22次·min-1,BP130/75mmHg(1mmHg=0.133kPa),右肺第七肋下叩诊实音,呼吸音消失,心律规整,无杂音,腹软,肝脾未触及,双下肢无浮肿,四肢肌张力正常,各种生理反射正常,病理征未引出。化验:WBC7.6×109·L-1,N0.71,胸片显示:右肺胸腔积液。经临床诊断为右侧结核性渗出性胸膜炎。给予口服异烟肼0.3gqd,利福平0.6gqd,吡嗪酰胺0.5gtid;肌注链霉素0.75gqd及对症支持等治疗。并间断抽胸水3次共2730ml。2003年4月9日经专科医院会诊后加用左氧氟…