HIF-1α基因转染对β-淀粉样蛋白25-35诱导原代培养海马神经细胞凋亡的影响

目的 构建人类缺氧诱导因子-1α(human hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因真核表达载体pSNAV-HIF-1α,并观察其对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导原代培养海马神经细胞凋亡及细胞内游离钙离子浓度的影响.方法 采用基因重组技术,将pBSKhHIF1αT7原核表达载体上HIF-1α基因序列克隆至真核表达载体pSNAV2.0,磷酸钙共沉淀法介导转染pSNAV-HIF-1α,Aβ25-35诱导原代培养海马神经细胞凋亡.Western blot检测HIF-1α蛋白表达,流式细胞术分析细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.结果 酶切、PCR及DNA测序结果均表明成功构建了重组质粒pSNAV-HIF-1α,磷酸钙共沉淀法介导的pSNAV-HIF-1α质粒转染显著增加了海马神经细胞HIF-1α蛋白表达(P＜0.05),同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率及细胞内游离钙离子浓度上调(P＜0.05).结论 缺氧诱导因子-1α基因转染可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度上调使海马神经细胞对Aβ25-35产生抗凋亡作用.     

结核特异性抗原的纯化及应用研究

采用凝胶过滤及免疫印迹方法,从结核分枝杆菌超声破碎物中,纯化分离特异性结核抗原.并以此为包被抗原,用SPA-ELISA方法对临床1320例血清标本进了检测,结果显示对急性结核诊断的敏感性为82%;特异性为91%.同时还将纯化的结核抗原与常用的精制蛋白衍生物(PPD)和聚合菌素(OT)抗原对50例阳性血清作了平行对比研究,P<0.05差异有显著性.提示纯化的结核抗原对急性结核病的诊断,优于目前血清学诊断的其它常用抗原.     

椎管脑脊液引流术后脑干和小脑功能障碍(病例报告)

脑脊液漏是脑或脊髓经硬膜手术或颅底骨折后的典型并发症。由于外科修补术患者需承受麻醉和手术的危险性，持续椎管脑脊液引流治疗和预防这样的漏已经得到广泛的接受。此方法简单、有效，然而有其危险性。为阐明与此椎管引流术有关的严重并发症，我们介绍了一例椎管引流术几天后由于脑脊液低容量导致脑干和小脑功能障碍的患者。我们讨论了脑脊液低容量的概念和治疗方法。     

中药方剂研究的现状及思考

中国药学做为中国传统文化的一部分,是我们祖先在长期与病魔斗争的实践中积累起来的遣产和宝库,为我国民族的繁衍和昌盛做出了历史性的贡献,受到了广大人民的信赖并得以广泛应用。中医用药经历了从简单到复杂,从低级到高级,从单方到复方的过程,中药方剂学奥妙无穷,几种具有类似作用的中药配伍在一起,疗效不一定优于其中的某一组成中药;几种     

博洛克治疗急性脑梗塞223例疗效观察

采用随机抽样双盲法应用博洛克治疗223例急性脑梗塞患者,总有效率为93.72%,显效率70.40%,治疗组纤维蛋白原、优球蛋白溶解时间、全血粘度、血浆粘度、血小板聚集功能均有下降,未发现任何毒副作用.     

脑损伤低温治疗窗

中度低温疗法可减轻卒中和脑创伤动物模型的行为障碍。其保护作用的机理仍是一个争论的问题。有脑创伤后低温的作用在于影响谷氨酸释放的争论报告和低温影响脑损伤的各种生化指标。这些脑细胞内的微观变化和机体宏观行为的改善很难联系在一起 ,然而 ,尽管如此 ,在实验研究中 ,进一步推测 ,他们和低温的作用机制是有关联的。在脑损伤的一些临床研究中 ,早期低温治疗已经用于改善患者的预后。在其他的一些临床研究中 ,低温已经用于控制脑损伤后迟发性高颅压。实验研究显示 ,亚低温减轻冷冻伤产生的皮层水肿和坏死是早期应用 ,而不是晚期应用。…     

大鼠血管外膜成纤维细胞亚群生长特性及功能研究

目的: 体外分离培养SD大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞亚群,并对其增殖特性和血管功能进行初步分析。方法: 克隆环法进行血管外膜成纤维细胞的单克隆培养,RT-PCR鉴定细胞亚群纯度,MTT检测血管外膜成纤维细胞亚群增殖能力。荧光定量PCR检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂氯沙坦(losartan)和PD-123319对前内皮素原-1(preproET-1)mRNA表达的影响。结果: 克隆环法获得血管外膜成纤维细胞2个亚群:圆形细胞亚群和纺锤形细胞亚群。以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,经RT-PCR检测,结果显示无von Willebrand因子、CD8、结蛋白和肌球蛋白重链的表达,是纯细胞系。2个细胞亚群的增殖情况有所不同,圆形细胞在第2~4 d进入指数分裂期;纺锤形细胞于第3~5 d进入指数分裂期。AngⅡ在0~1 000 nmol/L范围内对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无显著影响,而呈浓度依赖性地增加圆形细胞preproET-1 mRNA的表达(P<0.01);losartan阻断了AngⅡ诱导的圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,但对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无明显影响。结论: SD大鼠血管外膜成纤维细胞有2个细胞亚群:圆形细胞和纺锤形细胞,其生长特性略有不同。AngⅡ显著促进圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,提示这2个细胞亚群可能在血管重建和修复过程中发挥不同作用。     

鱼藤酮致PC12细胞线粒体功能及超微结构的影响

目的检测不同浓度鱼藤酮对体外培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(pheochromaffinoma,PC12)细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体跨膜电位(用△Ψm表示)及超微结构的作用,以探讨鱼藤酮损害线粒体的可能机制.方法应用流式细胞仪检测鱼藤酮对PC12细胞ROS的影响,激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测线粒体跨膜电位及透射电镜观察超微结构的变化.结果0.1、1.0、2.0和3.0μmol/L浓度的鱼藤酮可诱导细胞产生ROS分别为1.55±0.17、2.16±0.10、1.77±0.20和1.40±O.12,损坏△Ψm分别为93.86±10.12、119.43±7.09、102.71±9.36和83.14±10.70,与其对照组比较具有显著性差异(P＜0.01),实验组中以1.0 μmol/L鱼藤酮作用最显著(P＜0.01).当鱼藤酮浓度大于1.0μmol/L时,其作用呈现剂量依赖性递减.电镜下多数细胞线粒体形态异常,表现为:局部水肿、部分线粒体嵴排列紊乱、线粒体髓样变及空泡样变性等.结论鱼藤酮诱导ROS生成、损伤线粒体△Ψm及改变线粒体超微结构,可导致线粒体功能障碍.     

芪归健脑颗粒抑制老年性痴呆大鼠脑海马组织COX-2和iNOS基因表达

目的 观察芪归健脑颗粒对老年性痴呆(AD)大鼠学习记忆能力的保护作用,并探讨其作用机制.方法 SD大鼠海马内注射Aβ<,25-35>制备AD大鼠模型,在造模前3 d和造模后18 d予芪归健脑颗粒灌胃12 mg·kg<'-1>·d<'-1>,2次/d,共21d.用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力,Western blot测定大鼠海马COX-2和iNOS蛋白表达.结果 AD大鼠在定位航行实验中,逃避潜伏期延长,单位时间内跨越原平台次数减少,空间记忆力受损,与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05);实验第2,3,4天给药组的逃避潜伏期较模型组均显著缩短,与正常对照组接近(P>0.05).模型组海马COX-2和iNOS基因表达较正常对照组显著升高,给药组COX-2和iNOS基因表达较模型组显著下降(P<0.05).结论 芪归健脑颗粒对Aβ<,25-35>所致AD模型大鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用,其机制可能是芪归健脑颗粒通过COX-2,nNOS等信号转导途径,减轻Aβ<,25-35>毒性作用所致脑组织神经元损伤,从而改善学习记忆障碍,起到防治AD的作用.