血管生成素1增强骨髓间充质干细胞缺血环境下生存能力的研究

目的 研究血管生成素1（Ang1）对骨髓间充质干细胞（MSCs）在缺血清状态下的保护作用,探索一种改善MSCs生存能力的方法.方法 建立体外缺血清的凋亡模型,应用四甲基偶氮唑盐检测MSCs的生存能力,双苯并咪唑染色评估MSCs的凋亡,蛋白质印迹分析（Western-blot）检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）细胞生存通路的表达.结果 MSCs在缺血清处理24h后.生存能力降至（72.7±5.8）%,Ang1能够明显改善MSCs的生存能力,并呈剂量依赖性,在50μg/L时达到了高峰,生存能力提高至（92.3±1.5）%（P〈0.01）;Ang1能够降低MSCs的凋亡率,从（24.9±3.9）%降至（11.0±2.4）%（P〈0.01）;缺血清明显降低了MSCs的Akt磷酸化水平,但Ang1能够明显增加MSCs的Akt活化;应用P13K,Akt通路阻滞剂Wortman-nin后,Ang1的保护作用消失,MSCs的生存能力从（92.3±1.5）%降至（73.9±4.7）%（P〈0.01）,凋亡率从（11.0±2.4）%回升至（26.5±2.6）%（P〈0.01）. 结论 Ang1能够改善MSCs的生存能力.作用机制可能与激活P13K/Akt生存通路有关.     

黄芪对肺炎克雷伯菌肺炎大鼠胸腺细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：探讨黄芪注射液对肺炎克雷伯杆菌肺炎大鼠胸腺细胞凋亡及相关基因Caspase-3、Bcl-2表达的影响。方法：将大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄芪高剂量组、黄芪中剂量组和黄芪低剂量组。采用气管穿刺注入感染法制作大鼠肺炎克雷伯杆菌肺炎模型。分别采用原位标记法（TUNEL）及免疫组织化学方法检测各组大鼠的胸腺细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2表达。结果：与正常对照组比较,模型组和黄芪治疗各组胸腺细胞凋亡增加,凋亡相关基因Caspase-3表达增强,Bcl-2表达减弱（P均〈0.05）;与模型组比较,黄芪高剂量组胸腺细胞凋亡减轻,Caspase-3表达减弱,Bcl-2表达增强（P均〈0.05）。结论：黄芪注射液能抑制肺炎克雷伯杆菌肺炎大鼠胸腺细胞凋亡,其抗凋亡机制可能与上调Bcl-2基因表达相关。     

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染回顾性分析

目的：分析医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的高危因素、药物敏感率和临床转归,为临床诊治MRSA感染提供依据。方法对临床送检各类标本中分离出的110例次MRSA,按照科室分布、标本种类、药物耐药性及临床疗效等进行回顾性分析。结果医院获得性MRSA主要分布于ICU、神经内科、干部科,感染主要来源于痰液、手术切口分泌物、皮肤创面分泌物,分别占68.2%、11.8%和8.2%,对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类敏感率为0,对氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖甙类抗生素呈不同程度耐药,对替考拉宁、替加环素、万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因和喹奴/达福普汀敏感率为100%;在ICU 90%以上的MR-SA感染患者为年龄80岁以上、侵入性操作和长期使用广谱抗生素,在非ICU病房则以住院时间长和接受手术者居多。结论 MR-SA感染多发生于有多个基础疾病和高危因素者,临床表现复杂多样,临床上应加强对MRSA的防控,且应根据药敏合理使用抗生素,降低耐药菌株产生的概率。     

肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 48只Sprague-Dawley大鼠随机(随机数字法)分为对照组和感染组,每组24只.采用气管穿刺注入感染法制作大鼠肺炎克雷伯菌肺炎模型.分别于接种后的第2,4,6天分批处死动物,分别采用TUNEL法检测大鼠胸腺细胞凋亡及免疫组化法检测凋亡相关基因Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Fas的表达.结果 与同时间点对照组相比,感染组胸腺细胞凋亡增加,凋亡指数和胸腺细胞Cleaved Caspase-3和Fas表达水平升高,Bcl-2表达水平下降.感染组随着接种时间的延长凋亡指数和胸腺细胞Cleaved Caspase-3表达水平持续增加,胸腺细胞Fas表达水平在第4天达到高峰,胸腺细胞Bcl-2表达水平持续下降,而对照组上述各指标无明显动态变化.结论 肺炎克雷伯菌肺炎可诱导胸腺细胞凋亡增加,其机制可能与Bcl-2表达减少和Fas表达增多有关.不同凋亡调控途径在肺炎不同时期对凋亡的影响亦有所不同,Fas的作用在肺炎第4天后开始减弱而Bel-2的作用继续增强.

Abstract：

Objective To study the effects of pneumonia caused by Klebsiella pneumoniae on apoptosis of thymocytes in rats and its possible mechanism. Methods A total of 48 Sprague Dawley rats were randomly (random number) divided into 2 groups, namely the control group (n =24) and the infection group ( n = 24). The pneumonia models of rats were made with 0.3 mL Klebsiella pneumoniae suspension administered intratracheally per animal. On the 2nd, 4th, and 6th day after intratracheal instillation of bacteria, 1/ 3 of the rats in each group were sacrificed and TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUN EL) method was used to assess the apoptosis of thymocytes. The expressions of cleaved Caspase-3, Bcl-2 and Fas in thympcytes of rats were detected with immunohistochemical staining. Results On each interval, apoptosis index of thymocytes, and the expressions of Cleaved Caspase-3 and Fas in the infection group were all higher than those in the control group (P < 0.01) , while the expressions of Bcl-2 lower than those in the control group (P<0.01). As more time consumed, the apoptotic index of thymocytes and the expressions of cleaved Caspase-3 in the infection group increased significantly (P<0.05). The expressions of Bcl-2 declined gradually (P < 0.05), but the expressions of Fas reached their peak 4th day after infection. There were no significant dynamic changes in all above mentioned variables in control group. Conclusions Pneumonia caused by Klebsiella Pneumoniae can lead to the increase in thymocyte apoptosis in rats. The mechanism may be associated with the decreased expression of Bcl-2 and the increased expression of Fas in thymocytes of rats with pneumonia caused by Klebsiella pneumoniae. The different apoptosis regulation pathways have different effects on different phase of pneumonia, that the effects of Fas decrease 4th day after pneumonia, while the effects of Bcl-2 increase further.     

参附注射液对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的 观察参附注射液对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的影响及可能作用机制.方法 将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参附注射液组各16只.除假手术组外,其余大鼠采用盲肠结扎穿孔法复制大鼠脓毒症模型.造模成功后2h参附注射液组腹腔注射参附注射液20 ml/kg,假手术组和模型组腹腔注射等量生理盐水.术后12、24h分别处死8只大鼠,观察各组大鼠小肠黏膜病理改变并评分;ELISA方法检测小肠黏膜分泌型IgA水平,流式细胞术检测小肠黏膜CD3+、γδT细胞百分率的变化.结果 术后12、24h,模型组与假手术组比较,大鼠小肠黏膜损伤指数评分均显著增加,小肠黏膜分泌型IgA水平以及CD3+、γδT细胞百分率均显著降低(P＜0.05);参附注射液组与模型组比较,小肠黏膜损伤指数评分显著下降,小肠黏膜分泌型IgA水平以及CD3+、γδT细胞百分率显著上升(P＜0.05).结论 参附注射液可能通过促进小肠黏膜分泌型IgA分泌和上调CD3+、γδT细胞表达,保护脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能.     

姜黄素对脂多糖诱导人支气管上皮细胞 丝裂素活化蛋白激酶信号通路的影响

目的 探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导人支气管上皮细胞三磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、外调节蛋白激酶(ERK)、核转录因子-κB(NF-κB)、不规则趋化因子(CX3CL1)表达的影响.方法 体外培养人支气管上皮细胞24 h后,用计算机生成的随机分配法表分为空白组(CK)、LPS(10 mg/L)组、PD组 (LPS+ ERK抑制剂PD98059,25μmol/L)、LY组(LPS+ PI3K/Akt抑制剂LY294002,20μmol/L)、PDTC组 (LPS+ NF-κB抑制剂PDTC,100μmol/L)、cur组(LPS+姜黄素,10μmol/L)6组.各组阻断剂预处理30 min后给予LPS刺激,加药后作用4 h,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测各组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达,测定各条带吸光度(A)值.结果 与CK组比较,LPS组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达均显著升高〔PI3K(A值):0.68±0.05比0.49±0.09,Akt(A值):0.54±0.03比0.30±0.06,ERK(A值):1.09±0.09比0.74±0.05、NF-κB(A值):1.87±0.15比0.57±0.30,CX3CL1(A值):0.62±0.12比0.34±0.00,均P<0.05〕.与LPS组比较,PD组、PDTC组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达均明显下降〔PI3K(A值):0.37±0.06、0.38±0.16比0.68±0.05,Akt(A值):0.33±0.07、0.33±0.12比0.54±0.03,ERK(A值):0.67±0.05、0.82±0.26比1.09±0.09,NF-κB(A值):0.73±0.19、0.97±0.41比1.87±0.15,CX3CL1(A值):0.43±0.07、0.32±0.03比0.62±0.12,均P<0.05〕;cur组能明显抑制PI3K、Akt、ERK、NF-κB表达〔PI3K(A值):0.44±0.04比0.68±0.05, Akt(A 值):0.30±0.10 比 0.54±0.03,ERK(A 值):0.78±0.05 比 1.09±0.09,NF-κB(A 值):0.78±0.17 比1.87±0.15,均P<0.05〕.结论 人支气管上皮细胞存在LPS—ERK、NF-κB—CX3CL1信号通路,姜黄素可抑制LPS诱导人支气管上皮细胞后PI3K/Akt、ERK、NF-κB的表达.     

参附注射液对脓毒症大鼠心肌氧化应激和线粒体呼吸功能的影响

目的:观察参附注射液对脓毒症大鼠心肌氧化应激和线粒体呼吸功能的影响。方法:采用肓肠结扎穿孔法制备腹腔感染脓毒症动物模型。80只SD大鼠随机分为假手术组(Sham),脓毒症组(CLP),参附注射液低、高剂量治疗组(LSF,HSF)共4组。记录手术后6、18h各组的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心脏收缩功能指标(LVDP和+dP/dt)、心脏舒张功能指标(LVEDP和-dP/dt)、心肌细胞凋亡发生率(AI)、心脏组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、呼吸控制比(RCR)。结果:与Sham组比较,CLP组术后6h的HR显著升高(P0.05),但术后18h的HR显著降低(P0.01);术后6h和18h的MAP、LVDP、+dP/dt、LVEDP、-dP/dt、SOD、RCR均显著下降(均P0.01),AI、MDA均显著升高(P0.05或0.01)。而与CLP组比较,LSF组术后6h的MAP和HR、HSF组术后6h的HR均无显著差异(均P0.05),但HSF组术后6h的MAP及LSF组和HSF组术后18h的HR、MAP均显著升高(P0.05或0.01);LSF组和HSF组术后6h、18h的LVDP、+dP/dt、LVEDP、-dP/dt、SOD、RCR均显著升高(P0.05或0.01);LSF组和HSF组术后6h、18h的AI、MDA均显著降低(P0.05或0.01)。结论:参附注射液可不同程度地增高CLP大鼠的平均动脉压、改善其心功能、减少心肌细胞凋亡的发生和心肌组织MDA含量,增加SOD活性,保护线粒体功能;且高浓度参附注射液则以上结果更明显。参附注射液有助于脓毒症大鼠心肌氧化应激和线粒体呼吸功能异常的恢复,这些作用的强度与参附注射液的剂量成正比。     

参附注射液对重度脓毒症患者组织氧代谢的影响

目的:观察参附注射液对重度脓毒症患者氧输送的影响。方法:选择ICU收治的52例重度脓毒症患者作为研究对象,随机分为两组,分别给予常规治疗(对照组,25例)和常规+参附注射液治疗(治疗组,27例),观察比较0、6、24、48、72h时两组患者的氧供应(DO2)、氧消耗(VO2)、氧摄取率(ERO2)和乳酸清除率及28d病死率的情况。结果:两组的DO2、VO2、ERO2均较治疗前显著增高或降低(P<0.01),治疗组第6、24、48、72h的DO2、VO2和乳酸清除率均较对照组显著增高(P<0.01),两组的28d病死率则无显著性差异。结论:参附注射液可改善重度脓毒症患者的氧输送,是治疗重度脓毒症的临床有效药物。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12在糖尿病心肌病大鼠心肌中的表达及葛根素的干预研究

目的观察内质网应激（ERS）分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（Caspase 12）在糖尿病心肌病（DCM）大鼠的表达及葛根素的干预作用,探讨ERS在DCM中的作用和机制。方法采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。40只Wistar大鼠分为正常对照组（C组）、高脂高糖组（H组）、糖尿病模型组（M组）及葛根素组80mg·kg-^1·d^-1给药5周（T组）,每组10只,分批处死。15、20周龄大鼠取血测空腹血糖、胰岛素及计算胰岛素抵抗指数;取心肌组织检测肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平,并行苏木精-伊红染色观察形态学变化。琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形条带,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定Caspase 12 mRNA的表达。结果 H、M组的空腹血糖、胰岛素和胰岛素抵抗指数都显著高于C组（P均〈0.01）,且M组显著高于H组（P〈0.01）。在葛根素给药5周后,T组空腹血糖及胰岛素抵抗指数均呈显著下降（P均〈0.01）。M组心肌纤维肥大、走行较为紊乱,出现核固缩、裂解及丢失现象,心肌细胞变性、坏死,横纹肌消失;T组心肌纤维轻度肥大,微血管管壁、管腔均正常。M组和T组均出现了DNA梯形条带,T组较M组条带不明显。M组Caspase12mRNA表达较C组、T组均显著性升高（P均〈0.05）。结论 DCM可能通过ERS而活化Caspase12来触发心肌细胞凋亡。葛根素能通过减轻ERS抑制心肌细胞凋亡,对DCM心肌有保护作用。     

雷诺嗪与伊布利特联合应用对犬急性心房颤动的治疗作用

目的探讨雷诺嗪和伊布利特合用对犬心房颤动的作用及心电生理的影响。方法在24只犬中成功建立了迷走神经性心房颤动模型18只,9只给予伊布利特静脉推注,9只给予雷诺嗪+伊布利特静脉推注,观察并比较两组药物对心房颤动转复为窦性心律的效果,终止过程中出现的室性心律失常情况,以及用药前后心房有效不应期（AERP）、QT、QTc、Tp-e间期的变化。结果伊布利特组转复成功率为77.8（7/9）,雷诺嗪+伊布利特组转复成功率为88.9%（8/9）,两组差异无统计学意义（P＞0.05）;伊布利特+雷诺嗪组转复时间较伊布利特组明显缩短,差异有统计学意义（P＜0.05）;转复过程中室性期前收缩的发生次数伊布利特组明显较伊布利特+雷诺嗪组高,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组均未观察到发生尖端扭转型室性心动过速（Tdp）;静脉推注药物后两组的QT间期、QTc间期、AERP均较基础状态明显延长,差异有统计学意义（P＜0.05）;伊布利特组Tp-e间期与基础状态比较有明显延长,差异有统计学意义（P＜0.05）;雷诺嗪+伊布利特组Tp-e间期与基础状态比较无明显变化（P＞0.05）。结论（1）雷诺嗪和伊布利特合用可以减少室性心律失常的发生;（2）雷诺嗪联合伊布利特对心房颤动的转复时间明显缩短。