临床实验室自动化流水线的建立和应用体会

临床实验室自动化流水线技术日益成熟,是目前临床实验室自动化的发展趋势。该科通过建立自动化流水线,实现了临床标本自动化检测,对TAT时间等数据进行对比发现,建立自动化流水线优化了实验室工作流程,提高了工作效率。     

肺炎链球菌dnaJ基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究

目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)dnaJ基因缺陷菌株,并对其毒力作初步研究.方法采用长臂同源多聚酶链式反应( long flanking homology polymerase chain reaction,LFH-PCR)技术将dnaJ基因替换为红霉素耐药基因(erm...     

罗氏MODULAR E170全自动电化学发光免疫分析仪性能验证

目的 按ISO15189要求验证新检测系统--罗氏电化学分析系统的分析性能.方法 对甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),总前列腺特异性抗原(TPSA),游离前列腺特异性抗原(FPSA),铁蛋白(FERR)5个检测系统的精密度、正确度、分析测量范围和参考区间,TPSA和FPSA功能灵敏度进行验证,并对2个测量池分别选取1个指标进行携带污染实验.结果 部分项目批内或批间变异系数(CV)大于厂家说明书提供的精密度参数,但满足肿瘤标志物临床应用的指导原则中对精密度的基本要求;对配套定值血清测定值与靶值之间的差异无统计学意义,分析测量范围与厂家提供范围一致;携带污染小.结论 检测系统的基本性能与厂家提供的资料一致,也符合肿瘤标志物临床应用指导原则的要求,可将经过评价的检测系统用于常规工作.     

IL-35通过诱导T细胞分化促进肺癌肿瘤进展

目的探究肺癌中IL-35对T细胞表型及对癌症进展的影响。方法建立小鼠肺癌移植瘤模型,施用IL-35中和抗体,监测肿瘤生长情况。并通过检测肿瘤中T细胞的浸润情况及其表型和细胞因子分泌情况,进一步探究对抗肿瘤免疫反应的影响。最后通过对肿瘤浸润T细胞的体外刺激实验,检测浸润T细胞的抗肿瘤活性。结果瘤体积及瘤重的检测结果表明IL-35中和后可以抑制肺部肿瘤的生长(P<0.05)。同时,中和IL-35还可以导致更少的调节性T细胞浸润(P<0.01),细胞毒性T细胞的比例增加(P<0.001),T细胞表面抑制性受体的表达量降低(P<0.001),肿瘤组织中IFN-γ及TNF-α的含量升高(P<0.01)。此外,中和IL-35的肿瘤浸润T细胞的体外激活能力也显著增强(P<0.001)。结论 IL-35的中和可以抑制肺部肿瘤的生长,这在一定程度上是由于肿瘤浸润的调节性T细胞减少,效应T细胞的耗竭被逆转,从而增强了抗肿瘤免疫反应。     

肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径

目的 探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制.方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制.瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响.AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡.琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DN...     

肺炎链球菌假想蛋白SPD0414亚细胞定位及对细菌黏附侵袭的影响

目的 为研究肺炎链球菌假想蛋白SPD0414在肺炎链球菌(S.pn)的亚细胞定位,并初步研究其在S.pn黏附和定植中的作用.方法 通过分别在SPD0414的N端和C端融合绿色荧光蛋白(GFP),共聚焦荧光显微镜观察定位情况.用203野生菌和203△spd0414缺陷菌对鼻咽癌细胞CNE和肺腺癌细胞A549细胞的黏附侵...     

肺炎链球菌溶血素的体外表达及活性鉴定

目的 体外扩增肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)的溶血素(pneumolysin,ply)基因,在大肠杆菌中高效表达,并验证其生物活性.方法 分离培养D39型肺炎链球菌并提取其基因组DNA,采用PCR技术体外扩增ply基因,体外重组将ply序列克隆到原核表达载体pET28(a)内,测序鉴定后将重组子转化到E.coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导大量表达融合6个组氨酸标签的Ply重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后,获得的重组蛋白经SDS-PAGE鉴定后检测其溶血活性和细胞毒性.结果 克隆的ply序列与GenBank中的数据相符,并实现了Ply蛋白的可溶表达.所获重组蛋白纯度达到95%.溶血实验显示 Ply对人红细胞具有极高的溶血活性,与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量依赖.细胞毒实验显示Ply对脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞具有明显抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量与时间依赖性,IC50(24h)为1.525 μg/ml.结论 经测序鉴定ply基因正确扩增,并成功表达、纯化出具有高溶血活性和细胞毒性的Ply蛋白.     

MICRO LAB Plus前处理加样仪携带污染评价

目的 通过对 MICRO LAB Plus前处理加样仪的加样针在加样过程中的携带污染情况评价,在保证检测质量的同时提高对加样针的有效使用.方法 进行加样针洗涤后连续重复加样的携带污染试验和洗涤干燥后重复使用次数与携带污染试验,分析试验结果选择最佳的加样模式和重复使用加样针的次数.结果 加样针洗涤10次后检测结果未发现有携带污染影响;加样针洗涤干燥后反复使用3次为宜.结论 通过严格执行检测结果的复检程序,加样针洗涤干燥后重复使用3次,其检测结果基本无携带污染的影响.