8株携带bla_(NDM-1)基因阴沟肠杆菌耐药性研究

目的对南昌大学第一附属医院发现的8株携带blaNDM-1基因的阴沟肠杆菌进行相关耐药性研究。方法 2016年1月-2017年6月该院分离的501株阴沟肠杆菌中筛选145株对碳青霉烯类抗生素不敏感的阴沟肠杆菌,对其进行blaNDM-1基因筛查;运用改良碳青霉烯灭活试验(m CIM)进行碳青霉烯酶表型筛查;采用VITEK 2-Compact全自动微生物分析系统进行菌株体外药物敏感性试验;采用肠杆菌基因重复一致序列(ERIC)-PCR技术对blaNDM-1基因阳性菌株进行同源性分析。结果 145株对碳青霉烯类抗生素不敏感的阴沟肠杆中检出8株携带blaNDM-1基因的阴沟肠杆菌,未发现其同时携带其他碳青霉烯酶基因;8株携带blaNDM-1基因的阴沟肠杆菌m CIM表型试验显示产碳青霉烯酶。药敏结果分析发现其对碳青霉烯类、头孢菌素类和青霉素类抗生素耐药率高。ERIC-PCR结果显示这8株blaNDM-1基因阳性的阴沟肠杆菌可以大致分为4个不同的基因指纹图谱型,且其在该院内存在部分克隆传播。结论该院对碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌主要是因携带blaNDM-1基因,由此产生NDM-1型碳青霉烯酶致该类细菌高度耐药,当引起重视。     

乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2原核表达载体的构建及诱导表达

目的体外构建乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2原核表达载体并观察其表达情况。方法以含有HBEBP2全长序列的质粒为模板，通过PCR扩增获得HBEBP2基因片段，将HBEBP2连接到pGEM-T载体，在测序证实正确后将其插入至原核表达载体pET-32a（＋）中，转化BL21大肠埃希菌，经IPTG诱导，并通过SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定融合蛋白的表达。结果扩增获得的HBEBP2基因片断被成功构建到大肠埃希菌原核表达载体中。经IPTG诱导，得到了融合蛋白的表达，经Westernblot分析证实其分子量为34kD，具有抗原性。结论体外成功表达HBEBP2蛋白，为进一步研究HBEBP2蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础。     

133例肝硬化并发糖尿病患者发病相关危险因素和预后分析

目的 分析肝硬化合并糖尿病患者的临床特征、转归及预后,并探讨其相关危险因素。方法 回顾性分析2011年1月至2011年12月间住院的133例肝硬化合并糖尿病患者,并随机抽取同期住院的137例肝硬化无糖尿病患者,从临床特点、生化检查、并发症、肝功能分级、转归等进行对比分析研究。结果 肝硬化合并糖尿病患者和肝硬化无糖尿病患者的平均年龄分别为（55.9±11.0）岁和（50.2±12.0）岁,平均住院天数为（15.6±11.3）天和（12.8±8.4）天,入院时空腹血糖为（9.8±5.5） mmol/L和（5.1±2.1） mmol/L,天门冬氨酸氨基转移酶为（83.2±98.6） u/L和（65.3±88.8） u/L,白蛋白为（29.1±4.7） g/L和（30.5±5.5）g/L,甘油三脂为（1.1±0.9） mmol/L和（0.7±0.4）mmol/L,血钠为（134.3±5.1） mmol/L和（135.8±5.7） mmol/L,差异均具有显著统计学意义 （P均<0.05）;合并糖尿病患者酒精性病因（11.3%）、Child-Pugh C级（26.3%）、腹水（36.8%）、自发性腹膜炎（33.8 %）、肝性脑病（18.0%）和高血压（21.1%）所占比例显著高于无糖尿病患者（3.7%、11.3%、29.9%、 22.6% 、9.0%和2.9%,P均<0.05）;合并糖尿尿病患者住院期间病死率为18.8%,显著高于无糖尿病患者（9.5%,P<0.05）;经Logistic分析显示,高龄、住院时间、高血压、高血糖、高甘油三酯 （OR 值分别1.054、1.052、16.182、1.503和1.503,P均<0.01）是肝硬化患者发生糖尿病的危险因素。结论 与肝硬化无糖尿病患者相比,合并糖尿病的肝硬化患者肝功能状况和预后差,糖尿病可能是肝硬化患者预后不佳的危险因素。     

结核分枝杆菌抗原ESAT-6和CFP-10及rCFP10-ESAT6融合基因在大肠埃希菌中的表达及比较

目的 构建结核早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)、培养滤液蛋白10(CFP-10)及重组CFP10-ESAT6(rCFP10-ESAT6)融合蛋白的原核表达载体,获得纯化蛋白并比较三者表达特点.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增ESAT-6、CFP-10基因片段,融合PCR技术扩增rCFP10-ESAT6片段,分别连接到pGEM-T载体,测序正确后插入原核表达载体pET-32a(+)或 pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化3种蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot分析验证目的蛋白的抗原特异性.结果 pET-32a(+)-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达,分子量为31 kD,目的蛋白约占菌体总蛋白的42%;pET-32a(+)-CFP10、pET-28a(+)-CFP10-ESAT6重组蛋白以可溶性形式表达,分子量分别为33 kD和28 kD,目的蛋白分别占菌体总蛋白的73%和48%;Western blot证实其均具有良好的抗原性.亲和层析法获得了纯度较高的重组蛋白.结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)成功表达了具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10融合蛋白及rCFP10-ESAT6重组蛋白,为深入研究其免疫原性和生物学特性奠定了基础.     

含CpG的不同寡脱氧核苷酸对慢性HBV感染者外周血单个核细胞刺激能力的研究

目的 探讨人工合成硫代修饰的含CpG 基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMC)免疫应答能力的影响. 方法 31例慢性HBV感染者分成两组,免疫耐受组(14例)和免疫清除组(17例),同时设置7例正常对照.用CpG1826、CpG1826m、CpGT7、HBsAg、M1(CpG1826+HBsAg)、M2(CpG1826m+HBsAg)、M3(CpGT7+HBsAg)分别与受试者的PBMC共同孵育,酶联免疫斑点法检测IFN-γ的分泌情况,以斑点数的多少评价细胞分泌IFN-γ的能力.结果 CpG1826、CpG1826m、CpGT7、HBsAg、M1、M2、M3与PBMC孵育后,IFN-γ斑点数分别为16±10、17±9、17±10、201±51、215±63、 218±63、216±59.其中,免疫清除组分别为21±10、22±9、23±10、226±49、261±51、264±47、 254±54;免疫耐受组分别为8±4、10±3、8±4、164±42、155±36、157±41、167±27;正常对照组分别为17±6、17±7、18±9、209±17、217±24、221±17、217±46.在3种不同免疫状态组,单用HBsAg与CpG ODN联合HBsAg比较均无显著性差异,但不同免疫状态组间均有显著性差异(P＜0.05).结论 不同CpG ODN均不能显著增加HBsAg刺激PBMC分泌IFN-γ的能力,且3种 CpG ODN联合HBsAg刺激PBMC分泌IFN-γ的能力间无显著性差异.     

HBV相关慢加急性肝衰竭短期预后模型的建立及评价

目的建立一个新型的HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)短期预后预测模型:MACLF,并评价MACLF评分对HBV-ACLF患者短期预后的预测价值。方法采用回顾性队列研究分析2015年1月-2018年11月南昌大学第一附属医院收治的270例HBV-ACLF患者的临床资料,根据3个月的病情随访情况分为生存组(n=153)和死亡组(n=117),对影响HBV-ACLF患者短期预后的相关因素进行分析。计数资料2组间比较采用卡方检验,计量资料2组间比较分别采用Mann-Whitney U检验,采用二元logistic回归分析进行多因素分析,多因素分析有意义的指标再次进行二元logistic回归分析并建立模型。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价MACLF评分对HBV-ACLF患者短期预后的预测价值。结果单因素分析结果显示:游离三碘甲状腺原氨酸(FT_3)、促甲状腺激素(TSH)、国际标准化比值(INR)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、PLT、ALT、AST/ALT、TBil、Alb、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、钠(Na)、AFP、血清铁蛋白(SF)、Child-Tuncotte-Pugh(CTP)评分、MELD评分及并发症(肝性脑病、肝肾综合征、自发性腹膜炎、消化道出血、肺部感染)在生存组与死亡组之间差异均有统计学意义(P值均0. 05)。多因素分析的结果显示:TBil(OR=1. 007,P=0. 001)、INR(OR=5. 750,P 0. 001)、FT_3(OR=0. 084,P=0. 003)、PLT(OR=0. 987,P=0. 022)、肝肾综合征(OR=7. 146,P=0. 045)及肺部感染(OR=3. 816,P=0. 023)均是影响HBV-ACLF患者短期预后的独立因素;由此为HBV-ACLF患者的短期预后创建新模型(MACLF):Logit(P)=0. 007×[TBil(umol/L)]+2. 181×INR-2. 762×[FT_3(pg/ml)]-0. 014×[PLT(×10~9/L)]+1. 797×[肝肾综合征(有:1;无:0)]+1. 339×[肺部感染(有:1;无:0)]-2. 291。ROC曲线分析结果显示,MACLF评分的ROC曲线下面积(0. 934)、Youden指数(0. 774)均明显高于CTP、MELD、MELD-Na评分(ROC曲线下面积分别为0. 791、0. 884、0. 893,Youden指数分别为0. 433、0. 654、0. 715)。结论创建的MACLF新模型对HBV-ACLF患者3个月的短期预后具有良好的预测价值。     

ALT正常和低水平的慢性HBV感染者的肝穿刺病理特点分析

目的评估丙氨酸氨基转移酶(ALT)反复波动在(1～2)×ULN和ALT持续正常的慢性乙型肝炎患者的肝脏炎症及纤维化情况,为临床指导抗病毒治疗提供依据。方法对符合研究标准的42例慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者,包括22例ALT反复波动在(1～2)×ULN的慢性HBV感染者和20例ALT持续正常的慢     

重组结核杆菌rCFP10-ESAT6融合抗原基因在HIV感染者中的特异性T细胞反应

目的检测人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者的结核(TB)特异性T细胞反应,为艾滋病合并结核杆菌感染诊断方法的建立提供理论依据。方法应用融合PCR和基因重组技术,重组并表达结核杆菌蛋白rCFP10-ESAT6抗原蛋白,按照HIV感染和是否伴发结核病将实验对象分为健康对照组(14例)、TB组(7例)、HIV(+)/TB组(14例)及HIV(+)组(72例),以合成的rCFP10-ESAT6蛋白作为抗原,通过酶联免疫斑点技术(ELISPOT)分别检测四组患者外周血的特异性T细胞反应,并对HIV(+)患者相关检测结果及其CD4+计数进行相关性分析。结果重组合成28kD的rCFP10-ESAT6融合蛋白,以此蛋白作为抗原通过ELIS-POT方法检测,在TB组和HIV(+)/TB组中阳性率达到100%,在健康对照组中为7.1%(1/14),在HIV(+)组为20.8%(15/72)。TB组阳性率明显高于HIV(+)组以及健康对照组(P<0.05),HIV(+)组阳性率亦明显高于健康对照组(P<0.05)。HIV感染者可能存在较高比例的潜在结核杆菌感染。相关性分析结果表明ELISPOT检测结果与HIV感染者的CD4+计数之...     

大肠埃希菌质粒介导的bla_(NDM-1)基因耐药及传播性研究

目的探讨某院携带bla_(NDM-1)基因大肠埃希菌的流行现况及传播机制。方法收集2016年1—12月南昌大学某附属医院对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌92株,对其进行bla_(NDM-1)基因筛查,并对bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌进行其他常见碳青霉烯酶基因检测。将bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌(供体菌)与大肠埃希菌J53(受体菌)进行接合试验,采用药敏试验及mCIM试验对接合子进行表型验证,提取供体菌及接合子的质粒采用Southern blot技术对bla_(NDM-1)基因进行基因定位,并验证其水平转移的能力。结果在对碳青霉类抗生素不敏感的92株大肠埃希菌中发现2株携带bla_(NDM-1)基因,携带率2.2%。此2株大肠埃希菌未发现同时携带其他常见碳青霉烯酶基因。接合试验及Southern blot发现此2株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因均位于菌株的质粒上,且有1株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因可以通过质粒向大肠埃希菌J53转移。药敏试验结果显示,此2株大肠埃希菌对临床使用的多种抗菌药物耐药,且接合子获得了与供体菌相似的药敏结果。mCIM试验表明,此2株大肠埃希菌及接合子均产NDM-1型碳青霉烯酶。结论该院存在携带bla_(NDM-1)基因而产NDM-1型碳青霉烯酶的大肠埃希菌,携带bla_(NDM-1)基因的大肠埃希菌对临床使用的大多数抗菌药物耐药,质粒可介导bla_(NDM-1)基因的水平传播。     

巢式PCR—RFLP法对江西省乙型肝炎病毒Bj和Ba基因亚型的初步鉴定

随着HBV基因型研究的深入,研究表明,HBV基因亚型和基因型一样,也具有明显的地域分布,如日本以Bj亚型为主,中国以Ba基因亚型为主[1].那么,在以B基因型HBV感染为主的江西省[2]是否也以Ba基因亚型为主呢?本研究采用Sugauchi等[3] 的巢式PCR-RFLP法检测江西省HBV基因亚型的分布情况, 以期进一步了解HBV基因亚型与临床相关性.