IL-2和IL-4联合诱导B细胞死亡受体CCR3的表达及其功能研究

目的　研究在IL 2和IL 4作用下 ,趋化性细胞因子受体CCR3在人生发中心 (germinalcenter,GC)B细胞上的表达及其功能特性。方法　采用流式细胞术检测人GCB细胞上CCR3表达和在CCR3配体eotaxin作用下B细胞的凋亡 ,实时定量RT PCR和Northernblot法检测GCB细胞内CCR3mRNA的表达 ,淋巴细胞趋化和黏附试验检测B细胞的趋化和黏附能力。结果　人GCB细胞极低表达趋化性细胞因子受体CCR3,经IL 2和IL 4作用后 ,GCB细胞高表达CCR3,但此时CCR3不能在其配体作用下诱导GCB细胞的趋化和黏附功能 ,而是诱导GCB细胞凋亡。结论　IL 2和IL 4联合诱导人GCB细胞CCR3表达 ,CCR3可能具有死亡受体的功能。     

熊果酸对活化T细胞功能的影响

目的 研究熊果酸在体外对活化的人T细胞功能的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性和提供相关实验数据.方法 无菌采集和分离正常人外周血淋巴细胞,以不同浓度的熊果酸和PHA/PMA刺激T细胞,用MTT法检测细胞的增殖反应,ELISA法检测细胞因子IFN-γ、IL-2、GM-CSF、IL-4的峰值浓度.结果 熊果酸对淋巴细胞的活化和增殖无显著影响(P＞0.05);熊果酸抑制IFN-γ、IL-2、GM-CSF的分泌,并呈剂量依赖性(P＜0.05),而对IL-4的分泌影响较小,无统计学意义(P＞0.05).结论 熊果酸抑制活化的T细胞分泌Th1型细胞因子,抑制T细胞的功能,熊果酸有可能作为治疗某些自身免疫性疾病天然药物成分.     

熊果酸促进K562细胞凋亡

本研究旨在探讨熊果酸在体外对人红白血病K562细胞系的作和机制。采用MTT法和流式细胞术检测熊果酸对K562细胞的增殖抑制和杀伤效应;用慧星电泳分析熊果酸对K562细胞DNA的损伤;Hoechst33258荧光染色观察DNA片段化：细胞免疫化学染色检测Bcl-2和Bax的表达;Western blotting检测K562细胞内Caspase-3和磷酸化酪氨酸的表达和活性。结果显示熊果酸存在体外对K562细胞具有中度增殖抑制效应,并呈浓度和时间依赖性。在熊果酸作用下K562细胞呈现凋亡征象,同时细胞内Bcl-2表达下降,Bax表达升高,Caspase-3被激活,磷酸化酪氨酸表达下降,说明熊果酸存体外对K562细胞有诱导凋亡作用,而提高Bax的表达、诱导Caspase-3活化及降低BCR／ABL的酪氨酸激酶活性可能足其作用机制之一。     

T淋巴细胞性白血病病人CCR9的功能改变

目的：探讨趋化性细胞因子受体9(CCR9)在白血病病人中的功能改变。方法：对38例T淋巴细胞性自血病病人的血液标本进行分析。采用趋化试验和黏附试验检测胸腺表达的趋化性细胞因子TECK／CCL25(CCR9的配体)对病人CD4 T细胞的趋化功能和黏附功能的改变。结果：TECK／CCL25可以诱导几乎所有的急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)患者的CD4 T细胞产生强趋化移动，也可介导其发生较强的黏附作用，而对慢性T淋巴细胞性白血病(T-CLL)患者的CD4 T细胞仅显示出中度的趋化和黏附作用。结论：CCR9及其配体TECK可能与促进T-ALL CD4 T细胞的迁移和浸润有关。     

半枝莲提取物诱导白血病K562细胞凋亡

目的 :探讨中药半枝莲诱导人类慢性髓性白血病K5 6 2细胞株的凋亡作用。方法 :采用MTT法检测半枝莲乙醇提取物对K5 6 2细胞的增殖抑制作用 ;HT荧光染色观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞DNA的片段化 ;caspase 3单克隆抗体检测半枝莲提取物作用后K5 6 2细胞内caspase 3的表达。结果 :半枝莲提取物能明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,使K5 6 2细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征 ,同时对K5 6 2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有一定的浓度依赖性 ,经半枝莲提取物作用后的K5 6 2细胞内caspase 3表达增加。结论 :中药半枝莲提取物能诱导K5 6 2细胞凋亡 ,抑制肿瘤细胞增殖呈一定的浓度依赖关系 ,其作用机制可能与caspase 3的表达升高和活化有关。     

熊果酸对正常人外周血淋巴细胞Th1型细胞因子的影响

本实验旨在研究熊果酸对正常人外周血淋巴细胞Th1型细胞因子的影响,并对机制作初步探讨。采用半定量RT-PCR和夹心法ELISA分别检测不同浓度熊果酸对PHA和PMA活化的外周血淋巴细胞的Th1型细胞因子(IFN-γ和IL-2)mRNA的表达及分泌的影响。结果显示Th1型细胞因子mRNA和蛋白的表达水平均随熊果酸浓度的增加而下降(P<0.05),表明熊果酸可能对IFN-γ和IL-2在转录和(或)转录后水平发挥抑制作用,有可能用于自身免疫性疾病和超敏反应性疾病的防治。而熊果酸和地塞米松分子结构相似,可能通过类似机制下调糖皮质激素受体发挥作用。     

CXCL13和CCL19联合诱导的B淋巴细胞白血病细胞抗凋亡作用

目的探讨CXCL13和CCL19在急、慢性B淋巴细胞白血病发病机制中的作用。方法采用趋化试验分别检测CXCL13和CCL19对B-ALL和B-CLL中CDl9~+CDB4~+B细胞的趋化效应,流式细胞术检测VCVL13和CCL19联合作用时TNF-α诱导B-ALL和B-CLL患者CD19~+CD34~+和CD19~+CD3~-B细胞的凋亡情况。结果在B-ALL和B-CLL中,CXCL13和CCL19联合作用能明显抗TNF-α诱导的CD19~+CD34~+B细胞凋亡,而PKC途径抑制剂百日咳毒素(PT)可明显抑制该效应。结论CXCL13和CCL19联合作用,经PKC途径抑制剂TNF-α诱导的B-ALL、B-CLL中的CD19~+CD34~+B细胞凋亡,为探讨B淋巴细胞白血病的发病机制提供一条新思路。     

IL-2和IL-4联合作用对T-ALL CD4~+T细胞CCR9的调节作用

为了观察IL 2和IL 4对白血病细胞CCR9分布和功能的调节作用 ,我们对 2 1例T ALL患者的血液标本进行分析。流式细胞仪检测发现T ALLCD4 + T细胞高表达CCR9(83 0 %± 7 0 % ) ,IL 2和IL 4联合作用后CCR9的表达显著降低 (16 0 %± 4 0 % ) ;RT PCR、Northernblot和Westernblot及免疫荧光数字共聚焦显微镜检测发现 ,IL 2和IL 4联合作用后T ALLCD4 +T细胞上CCR9的mRNA和蛋白质的表达水平没有改变 ,只是位置发生变化 ,即CCR9发生了内置 ;功能检测发现IL 2和IL 4联合作用亦可相应抑制这些细胞上CCR9的黏附功能和趋化功能。实验结果可能为白血病细胞因子的治疗提供一定的线索     

活动性系统性红斑狼疮患者CD8~+T细胞CCR7异常高表达

目的　探讨系统性红斑狼疮患者T细胞是否存在CCR7表达异常及功能改变。方法　应用流式细胞仪、实 时定量RT PCR和Northern印记分别检测正常机体和SLE患者CD4+T细胞和CD8+T细胞CCR3、CCR4、 CCR5、CCR7和CCR9的表达情况;利用趋化实验检测其功能。结果　活动性SLE患者CD8+T细胞异     

系统性红斑狼疮患者CCR7+CD8+CD45RO+T细胞诱导CD4＋T细胞向Th2分化

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CCR7 CD8 CD45RO 记忆性T细胞对CD4 T细胞的诱导分化作用及其与SLE发病的关系。方法流式细胞仪、实时定量RT-PCR和RNA印迹检测同系CCR7 CD8 CD45RO T细胞和树突细胞协同刺激CD4 T细胞分泌细胞因子。结果活动期SLE患者CCR7 CD8 CD45RO 记忆性T细胞诱导CD4 T细胞表达Th2类细胞因子:白介素4的表达效率显著高于正常人对照组和非活动期SLE患者组(P<0.01),1型调节性T细胞(Tr1)源性细胞因子:白介素10和转化生长因子β的表达效率均低于正常对照组和非活动期SLE患者组(P<0.01);而活动期和非活动期SLE患者干扰素γ的表达效率显著低于正常人对照组(P<0.01)。结论活动期SLE患者外周血CCR7 中央型记忆性T细胞可与树突细胞相互作用,诱导同系CD4 T细胞向Th2分化,发挥CCR7-CD45RO 效应性记忆性T细胞的功能。