结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用

目的观察结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10基因，构建酵母双杂交载体质粒pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10，经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后，采用醋酸锂法顺序转染酵母菌AH109。结果共转染pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10的酵母菌AH109可以在SD／-Ade／-His／-Leu／-Trp培养基上生长，β-半乳糖苷酶活性实验阳性。结论结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白可以相互作用。     

异位妊娠的阴道彩色多普勒超声诊断价值

目的：探讨经阴道彩色多普勒超声在早期异位妊娠中的诊断价值。方法分析经阴道彩色多普勒超声诊断的异位妊娠患者术前超声表现、超声诊断符合率。结果术前阴道彩色多普勒超声检查诊断93例异位妊娠,手术病理证实为异位妊娠91例,符合率97.8%。结论经阴道彩色多普勒超声检查对提高异位妊娠早期诊断有着重要的临床价值。     

超声弹性成像在乳腺疾病诊断中的应用价值

目的探讨超声弹性成像在诊断乳腺疾病中的临床应用价值。方法分析近年来本院收治60例乳腺患者的超声弹性成像检查资料,利用弹性成像5分评分法,对弹性成像诊断结果与手术病理对照进行分析。结果病理结果：良性43例（55个结节）,恶性17例（20个结节）。超声弹性成像的诊断恶性病变敏感性为85．0％,特异性为89．1％,准确性为88．0％。结论超声弹性成像对鉴别乳腺肿瘤的良、恶性有其独到的优势,可提高对乳腺恶性肿瘤的诊断,值得临床推广应用。     

氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜密度感应系统毒力因子及相关基因的影响

目的：探讨氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜（BF）密度感应（QS）系统所调控的毒力因子编码基因以及各自对应毒力因子表达的影响．方法：通过平板培养法培养铜绿假单胞菌建立成熟的BF体外模型．采用不同浓度氨溴索干预后,应用实时荧光定量PCR（rRT—PCR）检测其对Qs系统各毒力因子编码基因表达的影响;采用ELISA法检测外毒素A和弹性蛋白酶水平;采用地衣酚-硫酸法检测鼠李糖脂水平;采用Folin——酚比色法检测碱性蛋白酶活性．结果：经氨溴索3．750g／L作用后基因taxA,rtlA,lasB,aprA mRNA相对于培养基对照组的表达量均显著减少,由1．000分别变化为（3．03±0．08）,（2．70±0．09）,（2．10±0．10）,（2．20±0．10）（P〈0．05）．同时毒力因子外毒素A、弹性蛋白酶、鼠李糖脂、碱性蛋白酶的表达量也较培养基对照组明显减少,分别由（15220．16±988．89）,（81．38±5．44）,（289．73±6．72）,（5011±108．78）减少至（3481．59±599．64）,（29．76±3．84）,（101．74±3．32）,（1757±57．21）（P〈0．05）．经氨溴索1．875g／L干预后具有同样趋势,但效应不如高浓度明显（P〈0．05）．结论：氨溴索可以降低BFQS系统调控的毒力因子编码基因以及各自对应的毒力因子的表达．     

实时动态四维超声应用于产前诊断胎儿畸形的临床价值

目的 分析实时动态四维超声应用于产前诊断胎儿畸形的临床价值。方法 资料随机选自该院108例行产前超声常规检查的中晚期孕妇,随机分为研究组和对照组两组,每组54例,对照组采用二维超声仪对胎儿全身状况进行检查,研究组采用四维超声仪对胎儿全身状况进行检查,随访产后胎儿情况。结果 经两组研究对象随访结果 显示,108例行产前超声常规检查的中晚期孕妇共分娩出112例胎儿,46（41.07%）例胎儿畸形中41例为胎儿体表畸形;研究组四维超声的特异性及准确性检查出真阳性分别为64（96.67%）例和106（94.64%）例均明显优于对照组二维超声检查情况的53（80.30%）例及89（79.46%）例;体表畸形胎儿检查结果 中研究组敏感性中真阳性39（95.12%）例明显高于对照组34（82.93%）例,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 实时动态四维超声成像检查过程安全且无损伤情况,诊断准确率较高且操作简便,值得产科推广应用于临床检查及诊断过程。     

隐睾发生过程中DNA甲基化状态和甲基化转移酶表达的实验研究

目的研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯[Di—（2-ethylhexy）phthalate,DEHP]作用于孕鼠后,胎鼠睾丸组织基因组DNA甲基化水平的变化及3种DNA甲基化转移酶的表达情况;探讨DEHP所致表观遗传修饰改变在睾丸下降过程中的作用。方法妊娠昆明小鼠（KMmice）随机分为3组,即正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组,每组15只。玉米油对照组和DEHP实验组自妊娠第12．5天到妊娠第18．5天分别持续经口予以玉米油和DEHP,用量按每日500mg／kg,正常对照组不予灌药。采用高效液相色谱仪检测基因组DNA甲基化水平,实时荧光定量PCR检测3种DNA甲基化转移酶的表达量。结果正常对照组和玉米油对照组DNA甲基化水平和3种甲基化转移酶的表达均无统计学意义（P〉0．05）：DEHP实验组DNA甲基化水平比对照组增高约10％。与对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．05）;实验组3种甲基化转移酶的表达量均比对照组高,与对照组相比,差异有显著统计学意义（Dnmt1,P〈0．05;Dnmt3a,P〈0．01;Dnmt3b,P〈0．05）。结论环境内分泌干扰物DEHP通过影响3种甲基化转移酶的表达而导致基因组DNA甲基化水平升高,从而抑制睾丸下降过程中多种基因的表达,发生隐睾。DNA甲基化等表观遗传学修饰的改变可能是DEHP诱发隐睾的分子机制之一。     

肝祖细胞移植对四氯化碳诱导急性肝衰竭小鼠模型肝损伤的修复作用

目的:观察肝祖细胞(HPCs)移植后不同浓度四氯化碳(CCl₄)诱导的急性肝衰竭小鼠模型肝脏修复情况,评价HPCs对肝损伤的修复能力,为评估HPCs移植疗效建立理想的肝衰竭模型。方法:96只ICR小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组(0.1% CCl₄组、0.5% CCl₄组、2.0% CCl₄组、10.0% CCl₄组)和实验组(0.1% CCl₄+HPCs组、0.5% CCl₄+HPCs组、2.0% CCl₄+HPCs组和10.0% CCl₄+HPCs组)。空白对照组小鼠灌胃给予生理盐水,阴性对照组和实验组小鼠灌胃给予不同剂量CCl₄。CCl₄造模后1 d,将实验组和阴性对照组小鼠常规麻醉后切开腹腔,实验组小鼠经脾脏注射HPCs,阴性对照组小鼠注射等剂量无菌生理盐水。动态观察小鼠生命体征,监测其存活率;采血检测小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性;取肝脏计算肝脏指数;HE染色观察各组小鼠肝脏组织病理学变化;Hoechst33342标记外源性HPCs,激光共聚焦显微镜检测移植HPCs在肝脏中的分布情况及肝脏标志蛋白细胞角蛋白18(CK18)和白蛋白(ALB)的表达。结果:与空白对照组比较,0.1%和0.5% CCl₄组小鼠存活率、肝脏指数、AST和ALT活性无明显变化(P>0.05)。病理学检测,肝细胞有自我修复作用,HPCs移植治疗的效果不明显。与2.0 %CCl₄组比较,2.0%CCl₄+HPCs组小鼠AST和ALT活性及肝脏指数降低(P<0.01),存活率增加(P<0.01);病理学检测可见肝细胞再生和大量外源性肝细胞,CK18和ALB表达与内源性肝细胞相当,HPCs移植治疗有效。10.0%CCl₄组和10.0% CCl₄+HPCs组小鼠2 d内全部死亡,无法评估HPCs的治疗效果。结论:HPCs移植可提高急性肝衰竭模型小鼠存活率,改善AST和ALT活性,对肝损伤具有较强的修复能力;且2.0%CCl₄诱导的ICR小鼠急性肝衰竭模型能有效反映HPCs移植治疗的效果。     

表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的免疫功能研究

目的研究表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌在动物体内的免疫功能。方法用表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞增殖实验检测重组耻垢分枝杆菌的免疫原性,利用流式细胞术分析小鼠T淋巴细胞亚群比例的变化,通过病理学切片观察重组耻垢分枝杆菌在动物体内的毒力。结果重组耻垢分枝杆菌诱导的脾淋巴细胞增殖反应、CD4＋T细胞比例均明显高于对照组;重组耻垢分枝杆菌不会导致脏器的器质性病变。结论表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫原性显著增强,且毒力无明显改变,有望成为一种新型的结核病疫苗。     

AP2α在BMP9诱导C3H10成骨分化中的作用及机制探讨

目的：研究转录蛋白2（activator protein 2,AP2）α在骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）9诱导小鼠间充质干细胞C3H10成骨分化中的作用及可能的分子机制。方法：重组腺病毒 Ad-BMP9感染小鼠C3H10细胞,显性负性突变体AP2α-△bHLH和AP2α-△TAD抑制 AP2α转录活性,通过RT-PCR、real-time PCR检测AP2α、BMP9及成骨相关基因的表达水平,Western blot检测骨桥蛋白（osteopontin,OPN）表达,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性测定、茜红素染色实验观测C3H10成骨分化。结果：BMP9具有强促成骨分化的作用,对AP2α的表达水平无影响,AP2α显性负性突变体可抑制BMP9诱导的成骨基因骨钙蛋白（osteocalcin,OC）、OPN及骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的增高（OC：F=56.929,P=0.000;OPN：F=54.789,P=0.000;OPG：F=159.451,P=0.000）,ALP活性（F=69.776,P=0.000）及红色钙盐沉积减少。结论：BMP9可能通过影响AP2α的转录活性调控成骨分化进程。     

靶向大鼠gnas基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定

目的:构建并鉴定靶向大鼠gnas基因的小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体.方法:根据大鼠gnas基因mRNA序列设计并合成3条shRNA特异性寡核苷酸片段,退火形成双链后克隆进入线性化pGenesil-1.1载体,并进行酶切鉴定和测序,同时构建针对大鼠GAPDH基因的阳性对照质粒和不具有基因同源性的非特异性基因的质粒做阴性对照.结果:经酶切和测序鉴定分析,构建的shRNA已成功插入载体,并且与设计序列完全相符.结论:成功构建了靶向大鼠gnas基因的shRNA真核表达载体,为后续研究Gs a 蛋白在心力衰竭中作用的体内外实验奠定了基础.