病毒基因组耦联报告基因用于筛选适宜丙型肝炎病毒培养的亚细胞克隆株

目的 快捷筛选到适合丙型肝炎病毒(HCV)培养的细胞系.方法 将荧光素酶报告基因耦联到JFHlHCV基因组中,检测了多个人肝细胞系对HCV的易感性,进一步利用耦联荧光素酶的HCV复制子模型筛选并经过IFN-α处理更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株.结果 实验结果显示BEL7402、BEL7404、QSG7701、SMMC7721、QGY7701、QGY7703和HepG等肝细胞均不易感染HCV,仅限于Huh7细胞能被HCV感染.同时实验获得了更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株——Huh7G3.结论 在利用IFN-α处理细胞的过程中,通过检测荧光素酶活性,显示IFN-α对HCV亚基因组的复制抑制效果具有剂量依赖效应,研究同时显示:HCV复制子细胞能否抵抗HCV的超感染依赖于细胞内是否存在HCV RNA复制而不是其复制水平的高低.     

抗体药物治疗黑色素瘤的现状及进展

黑色素瘤的抗体药物治疗方兴未艾,其中抗CTLA-4抗体(ipilimumab和tremelimumab)及抗PD-1抗体(nivolumab 和lambrolizumab)均已完成或正在进行治疗黑色素瘤的Ⅲ期临床试验,针对其他靶点的多个抗体也处于临床试验或临床前研究阶段。本文就抗体药物治疗黑色素瘤的现状及进展做一综述,为黑色素瘤的新药开发和临床治疗提供参考。     

树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测

目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a(+)-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1(OH)3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)的比较结果为:弗氏佐剂组(GMT:97 420)＞Al(OH)3佐剂组(GMT:67 202)＞MF59佐剂组(GMT:55 128);其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组(P＜0.001);Al(OH)3组显著高于原蛋白组(P＜0.01);而MF59组显著高于原蛋白组(P＜0.05).结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.     

新型冠状病毒非结构蛋白14的表达及酶活性分析

目的 获得纯度较高和有酶活性的新型冠状(新冠)病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白14(Nsp14)。方法 根据大肠埃希氏菌(E.coli)的密码子偏好性，分析新冠病毒原始株基因nsp14的稀有密码子，并对其进行优化。将nsp14克隆至4个不同的表达载体并进行表达；通过对表达量和可溶性的比较分析，选择一个表达效果最好的重组表达质粒并优化表达条件；目的蛋白经谷胱甘肽亲和柱纯化后，用半胱氨酸家族蛋白酶(3C)切除融合标签，再分别利用谷胱甘肽亲和柱和分子筛柱纯化蛋白质。最后通过尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对其活性进行鉴定。结果 Nsp14的基因在大肠杆菌中表达存在较多的稀有密码子，其中部分稀有密码子呈现近距离分布和串联分布。pGEX6P1-GST-OPTI-Nsp14重组质粒在大肠杆菌中表达的可溶性效果最好，其最佳表达温度为30℃。经纯化后获得了较纯的不含标签的Nsp14,该蛋白具有核酸酶活性。结论 本研究成功地表达和纯化出具有核酸酶活性的新冠病毒Nsp14,为进一步推进对新冠病毒Nsp14的结构和功能研究奠定了基础，为筛选靶向Nsp14的抗病毒治疗药物提供了有利的条件。     

自我损耗对冲动购买的影响：解释水平的作用

目的：探讨解释水平是否为自我损耗影响冲动购买的具体心理机制，为整合自我损耗的有限资源模型和过程模型提供启示。方法：实验1检验自我损耗对冲动购买的影响。实验2通过因果链设计分段考察了自我损耗对解释水平的影响(实验2a)，以及解释水平对冲动购买的影响(实验2b)。实验3探讨了解释水平在损耗影响冲动购买中的中介作用。结果：(1)自我损耗会诱发个体低解释水平；(2)低解释水平会导致个体更高的冲动购买水平；(3)解释水平是自我损耗影响冲动购买的中介机制。结论：自我损耗以解释水平为中介，促进冲动购买。