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目的探讨分子佐剂IL-17、IL-2对铜绿假单胞菌(Pa)外膜蛋白OprI免疫效果的影响。方法分别以IL-17、IL-2作为分子佐剂用Pa外膜蛋白OprI于第0、2、4周免疫雌性C57BL/6小鼠,同时设立单独的佐剂与蛋白对照组。末次免疫2周后,ELISA检测各组小鼠血清IgG、IgA以及IgG亚类水平;ELISA法检测小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17以及Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平;MTT法检测IL-17、IL-2分子佐剂对小鼠脾细胞增殖情况的影响,并以ConA作为阳性对照;末次免疫2周后Pa鼻内感染小鼠,感染后10 d计算各组小鼠死亡率并取小鼠肺组织检测菌体载量。结果 ELISA结果显示,OprI-IL-17、OprI-IL-2组小鼠血清中IgG、Ig A以及IgG亚类水平均显著高于各对照组(P0.05),且其中各实验组IgG2a/IgG1的比值均大于1;IL-17、IL-2佐剂能够显著提高小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17水平(P0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平则无显著差异(P0.05);此外,OprI-IL-17、OprI-IL-2组的淋巴细胞增殖最为显著(P0.05);相较于各对照组,OprI-IL-17、OprI-IL-2组能够显著降低小鼠肺组织菌体载量以及小鼠死亡率(P0.05),保护效果显著提高。结论 IL-17、IL-2佐剂均能有效增强Pa外膜蛋白OprI的体液、细胞免疫水平以及抗感染保护作用。 相似文献
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目的研究铜绿假单胞菌(Pa)重组外膜脂蛋白A(OmlA)抗原的免疫功能,并初步探讨不同佐剂对其免疫效果的影响。方法将OmlA抗原分别与佐剂IL-17和氢氧化铝进行混合吸附。然后将OmlA抗原以及吸附好佐剂的OmlA抗原分别在0、2、4周时注射到4~5周龄C57BL/6小鼠的腹腔进行免疫,同时设立IL-17、氢氧化铝和PBS免疫组为对照。检测免疫小鼠血清中IgA、IgM、IgG、IgG1以及IgG2a的水平。采用ELISA检测免疫小鼠脾组织上清中Th1/Th17型细胞因子IFN-γ、IL-2以及Th2型细胞因子IL-4、IL-6的含量。采用MTT法检测不同组小鼠脾细胞增殖的情况。最后一次免疫2周后使用致死量Pa鼻内感染小鼠,10 d后检测小鼠肺组织中Pa载量和统计小鼠死亡数量并计算各组小鼠的死亡率。结果 ELISA结果证明OmlA、OmlA-AH和OmlA-IL-17组免疫小鼠血清中IgA、IgM、IgG以及IgG亚类(IgG1和IgG2a)的含量明显比各对照组高。OmlA-AH组中IgG2a/IgG1的比值小于1,且AH能提高脾组织中IL-4和IL-6的量,但IFN-γ和IL-2水平不变。OmlA-IL-17组中IgG2a/IgG1的比值大于1,且IL-17能提高小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-2的量,但不影响IL-4、IL-6的表达。AH和IL-17能增强OlmA刺激导致的淋巴细胞增值。与对照组相比OmlA、OmlA-AH和OmlA-IL-17组能够减少小鼠肺组织中Pa载量和小鼠死亡率。结论 Pa OmlA蛋白具有良好的免疫保护作用,且AH和IL-17能够增强其免疫效果。 相似文献
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目的 调查分析湖南邵阳地区医院2012~2013年临床分离肺克雷伯菌(KPN)的药物敏感性,探讨氨基糖苷乙酰转移酶基因(AAC)在耐氨基糖苷类药KPN菌株中的携带情况.方法 收集邵阳地区新邵县人民医院,洞口县人民医院,邵阳医专附属医院三家医院2012年8月~2013年12月临床连续分离非重复KPN 259株,梅里埃药敏条和KB纸片法检测其药物敏感性.采用PCR法对氨基糖苷类修饰酶(AMEs) AAC(3)-Ⅰ,AAC(6')-Ⅰb,AAC(3")-Ⅰ,AAC(3')Ⅵa基因进行检测.基因测序确定其基因型,探讨耐药基因与耐药表型的关系.结果 259株KPN中213株对氨基糖苷类抗生素耐药,其中对庆大霉素、妥布霉素、奈替米星和阿米卡星的耐药率分别为83.1%,68.5%,56.3%和44.1%.213耐药菌株中12株携带AAC(3)-Ⅰ基因,阳性率为5.6%;28株携带AAC(3')Ⅵa基因,阳性率为13.1%;103株携带AAC(6')-Ⅰb基因,阳性率48.4%;30株携带AAC(3")-Ⅰ基因,阳性率为14.1%;5株同时携带AAC(3)-Ⅰ和AAC(6')-Ⅰb基因.结论 湖南邵阳地区临床分离肺炎克雷伯菌氨基糖苷类抗生素耐药率高,其耐药基因以AAC(6')-Ⅰb基因为主. 相似文献
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目的:分析预测幽门螺杆菌(Hp)外膜蛋白Omp18 的免疫优势表位,并进一步验证确定其免疫优势片段的免疫原性。方法:通过生物信息学软件DNAStar 分析预测幽门螺杆菌外膜蛋白Omp18 的潜在优势表位,并由北京赛百盛基因技术有限公司合成相应的优势片段;片段通过口服免疫的方式免疫接种雌性BALB/ c 小鼠,每周1 次共免疫4 次。末次免疫10 d后处死小鼠,取血清检测IgG、IgA 水平,取肠道灌洗液检测sIgA 水平;取小鼠脾细胞ELISA 法检测细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6 水平,并通过MTT 比色法检测脾细胞增殖情况;末次免疫10 d 后Hp 标准株攻击小鼠2 次,4 周后处死小鼠,取胃组织进行快速尿素酶实验,并计算每组的感染率。结果:ELISA 法检测各片段免疫小鼠血清IgG、IgA 以及肠道sIgA 水平均高于对照组,且差异有显著统计学意义(P<0.05);各免疫组脾细胞上清INF-γ、IL-2 水平均显著高于对照组(P<0.05),而IL-4、IL-6水平较对照组则差异无显著统计学意义(P>0.05);MTT 比色法结果显示各片段刺激后小鼠淋巴细胞均有显著增殖(P<0.05);快速尿素酶实验结果提示各片段免疫后均能显著减少小鼠胃组织中Hp 的感染(P<0.05)。结论:通过生物信息学软件分析预测的外膜蛋白Omp18 优势片段均具有较好的免疫原性,且对Hp 感染有一定的保护作用。 相似文献
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目的探讨磷酸铝(AP)和氢氧化铝(AH)佐剂对布鲁菌外膜蛋白31(Omp31)诱导产生体液、细胞免疫反应以及免疫保护作用的影响。方法制备AP佐剂以及AH佐剂,并与纯化的布鲁菌Omp31进行混合吸附,检测吸附率;将AP、AH吸附完成的Omp31蛋白分别于0、2、4周腹腔注射免疫BLAB/c小鼠,同时设立未吸附佐剂的Omp31蛋白免疫组与PBS免疫组作为对照。分别于0、2、4、6周ELISA检测小鼠血清Ig G、Ig G1、Ig G2a水平以及生殖道分泌物分泌型Ig A(s Ig A)水平;于第6周取小鼠脾细胞体外培养,Omp31刺激细胞48 h后,ELISA检测培养细胞上清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)水平,CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖情况;小鼠于第6周用布鲁菌强毒株进行攻击,并分别于攻击后1周、2周检测小鼠脾脏组织菌体含量。结果 AP、AH佐剂对于不同浓度Omp31吸附率分别可达到70%与85%以上;ELISA结果显示AP组与AH组诱导产生的血清Ig G、Ig G1、Ig G2a以及生殖道s Ig A水平均在末次免疫2周后到峰值,其中AH组高于AP组,且均显著高于对照组;CCK-8实验结果显示AH组诱导的淋巴细胞增殖显著高于AP组,且均高于对照组,AH组脾细胞上清中的IFN-γ水平显著高于AP组,而IL-10水平无显著差异;强毒株16M攻击后2周,AH组小鼠脾脏菌体载量显著低于AP组。结论 AP佐剂以及AH佐剂均能有效增强布鲁菌Omp31的免疫原性及其抗感染保护作用,且AH佐剂效果好于AP佐剂。 相似文献