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目的观察pmU6-sibclD重组体在细胞内表达的bcl-xL短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)能否特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖.方法将自行构建的表达短发夹状RNA的重组质粒转染到人鼻咽癌CNE-2Z细胞株、卵巢癌HO-8910细胞株和正常人类肝脏L-O2细胞株中,流式细胞仪检测转染率,MTT比色法检测细胞的生长抑制率.结果bcl-xLshRNA能特异地抑制CNE-2Z细胞株的生长增殖,而对正常人类肝脏细胞株的生长增殖和HO-8910细胞中的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的表达无抑制作用.结论pmU6-sibclD重组体在细胞内表达的短发夹状RNA能特异性抑制鼻咽癌细胞的生长增殖,为质粒介导的RNAi技术运用于肿瘤的基因治疗提供一定的理论依据. 相似文献
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半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用 总被引:16,自引:0,他引:16
目的:研究半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法:应用流式细胞光度术(FCM)测定细胞周期,应用噻唑蓝(MTT)法测定药物对细胞的抑制率。结果:不同浓度6F作用6小时即可使HL-60细胞S期及G2/M期比例升高,G1期比例下降,并呈一定的剂量效应关系,当作用到24小时后,S期比例进一步升高,但G2/M期比例稍有回落。低浓度6F分别与2-氯代脱氧腺苷(2-CLdAdo),顺铂(CDDP),长春新碱(VCR),氟尿嘧啶(5FU)合用可增强它们对HL-60细胞的杀伤作用,q值大于0.85,与各药有相加或协同作用,6F对2-CldAdo,CDDP,VCR,5FU的增效倍数分别为1.58,1.53,1.55,1.38。结论:6F可明显阻断HL-60细胞在S期及G2/M期;6F可增强上述药物对HL-60细胞的杀伤作用。已知,2-CldAdo阻断细胞在S期,CDDP和VCR阻断G2/M期,5FU阻断G1期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同,提示6F的体外增效作用可能与此有关。 相似文献
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半边旗提取物对HL—60细胞的细胞毒作用及对细胞周期的影响 总被引:6,自引:0,他引:6
目的:研究蕨类植物半边旗提取物对HL-60细胞的体外杀伤作用及对细胞周期的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)法测定细胞成活率;用流式细胞术测定细胞周期时相分布。结果:半边旗乙醇总提取物PSE及纯化合物5F、6F及A对HL-60细胞有强烈的杀伤作用,具明显的时间和剂量效应;PSE、5F、6F及A作用HL-60细胞24h后,G0/G1期细胞比例明显下降,S期细胞比例明显升高,G2/M期轻度升高(5F作用组例外)。结论:半边旗提取物对HL-60细胞有强烈的杀伤作用,明显影响细胞周期时相分布。 相似文献
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【目的】构建鼠IL 2Rα与β链基因的反义RNA真核表达质粒 ,为反义RNA基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠IL 2Rα与β链cDNA及鼠IL 2启动子 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3的多克隆位点上 ,用酶切或PCR法鉴定正反连接。【结果】得到 4个反向连接的重组质粒 :pcAnti mIL 2Rα ,pcAnti mIL 2Rβ,pcAnti mIL 2Rαβ及pciAnti mIL 2Rαβ。前三者由CMV强启动子指导鼠IL 2R基因反义RNA的表达 ,后者由CMV启动子与鼠IL 2靶向可诱导型启动子组成的融合启动子指导反义RNA的表达。【结论】成功构建了 4个不同类型的鼠IL 2R基因反义RNA真核表达质粒。 相似文献
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目的:以自行构建的真核表达质粒pmU6为基 础,针对bcl-xL基因构建在细胞内表达短发夹状RNA(shRNA)的质粒载体,并观察它们 对CN E-2Z、MCF-7和ECV-304细胞株增殖的影响。方法:将两条合成的bcl-xL 寡核苷酸链插入pmU6载体中产生pmU6-RNAi重组质粒,把重组质粒转染到细胞中,MTT比色法 检测细胞的生长抑制率。结果:bcl-xL shRNA 对CNE-2Z细胞株的生 长增 殖有明显的抑制作用,而对MCF-7和ECV-304细胞株的生长增殖无明显抑制作用。结 论:提示pmU6-RNAi重组体能在细胞内表达短发夹状RNA,产生了RNA干扰效应并抑 制靶细胞的生长增殖。 相似文献
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目的:研究蕨类植物半边旗提取物6F对HL-60细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)及Bcl-2蛋白表达的影响, Ca2+与6F细胞毒作用及诱导细胞DNA片段化的关系。方法:用荧光探针Fura-2/AM标记细胞内游离Ca2+, 在荧光分光光度计上测[Ca2+]i;流式细胞仪检测Bcl-2的表达;噻唑蓝(MTT)法测定细胞成活率;二苯胺法测DNA片段化形成率。结果:6F作用后, HL-60细胞内[Ca2+]i显著升高, 呈明显的时间剂量效应关系;6F降低Bcl-2的表达;于培养基中加2mmol/LCa2+、或加1mmol/LEDTA络合细胞外钙, 或加4μmol/L钙通道A23187升高细胞内钙浓度, 均可增强6F的细胞毒作用, 但均不影响6F诱导细胞DNA片段化程度。加入250μmol/LZn2+可显著降低6F所致DNA片段化率, 并可增强6F的细胞毒作用。结论:化合物6F可显著升高HL-60细胞[Ca2+]i, 推测与6F降低Bcl-2的表达有关;6F诱导HL-60细胞DNA片段化可能是通过Ca2+-非依赖性DNA酶的作用所致。 相似文献