人乳头状瘤病毒感染妇女的年龄及其亚型分析

目的分析广州地区人乳头状瘤病毒(HPV)感染阳性妇女的年龄及其亚型分布,为预防HPV感染及宫颈癌的发生提供依据。方法采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术进行HPV分型检测,根据芯片上HPV基因亚型分布图进行阳性或阴性及单重或多重感染判断。结果 4 210例HPV阳性病例中,HPV感染年龄段分布前5位依次为26³0、2130、21²5、3125、31³5、3635、36⁴0、4140、41⁴5岁,分别占25.89%、20.07%、17.91%、13.63%、8.08%;感染率排在前10位的HPV亚型依次为HPV52、16、58、6、11、CP8304、53、68、18、33,分别占阳性病例数的25.44%、17.86%、13.14%、12.71%、9.86%、9.17%、9.05%、6.53%、5.99%、5.82%;其中,单一和多重感染率分别为70.14%、29.86%;随年龄的增长,HPV52、16、58感染率逐渐增加,HPV6、11亚型感染率逐渐下降。结论 HPV感染阳性妇女主要集中在2145岁,分别占25.89%、20.07%、17.91%、13.63%、8.08%;感染率排在前10位的HPV亚型依次为HPV52、16、58、6、11、CP8304、53、68、18、33,分别占阳性病例数的25.44%、17.86%、13.14%、12.71%、9.86%、9.17%、9.05%、6.53%、5.99%、5.82%;其中,单一和多重感染率分别为70.14%、29.86%;随年龄的增长,HPV52、16、58感染率逐渐增加,HPV6、11亚型感染率逐渐下降。结论 HPV感染阳性妇女主要集中在21⁴0岁年龄段,HPV52、16、58、6是最主要的感染亚型,HPV感染以单一亚型感染为主,不同年龄段HPV感染的优势亚型有所不同。     

反向点杂交法监测β-地中海贫血异基因造血干细胞移植后植入状态

目的初步评价反向点杂交技术在β-地中海贫血异基因造血干细胞移植后植入状态监测中的应用价值。方法用反向点杂交技术检测异基因造血干细胞移植后的β-地中海贫血基因状态,分析植入情况和嵌合状态,并与多重荧光标记短串联重复序列扩增技术的检测结果进行比较。结果与多重荧光标记STR-PCR技术相比,反向点杂交技术的检测灵敏度较高,可以检测到受者比例仅为1.56%的微嵌合状态。结论反向点杂交技术灵敏、快速、价廉,适用于β-地中海贫血异基因造血干细胞移植后植入状态的长期动态监测。     

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率，但操作过程复杂，仅适于大样本的HLA分型。PCR－SSP基因分型方法分辨率较低，但操作过程简单，适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取63份已知HLA－DRB型的脐血标本，经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交（RDB）基因分型，同时采用SSOP和PCR－SSP方法进行比较。结果表明，所有样本用RDB方法基因分型均获得成功，可准确地分辨60个HLA－DRB等位基因，且结果与用SSOP和PCR－SSP方法的结果完全一致。结论提示，RDB方法可准确地分辨HLA－DRB等位基因，分辨率高，操作简单，适用于各种情况的HLA分型。     

20例无关供者脐血移植的临床结果

随着各地脐血库的建立 ,无关供者脐血越来越多地被用于移植以重建受者骨髓功能、支持造血重建。 1998年 12月 ,广州脐血库提供第 1份库存脐血用于无关供者脐血移植治疗成人重型再生障碍性贫血 (再障 ) ,并获得成功[1 ] 。至 2 0 0 1年 7月 ,已提供库存脐血移植治疗白血病、重型 β 地中海贫血 (β 地贫 )、再障等疾病患者 30例。我们报道自 1998年 12月～ 2 0 0 1年 3月全部 2 0例无关供者脐血移植结果 ,以总结经验 ,评价相关因素。材料和方法1　脐血的采集、分离和冷冻保存　采用二联采血袋 (ＣＰＤ Ａ抗凝 ) ,封闭式收集第 3产程采集足月…     

改良原代培养方法提高人胎盘绒毛膜间充质干细胞的产量

目的 建立获得大量P0代人胎盘绒毛膜间充质于细胞(hpcMSCs)培养方法.方法 从胎盘绒毛膜分离出hpcMSCs,经初次培养和再次培养7d后,将原培养瓶中培养基、未贴壁组织和冲洗生理盐水离心后分别进行再次培养和第3次培养.用倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8测定细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面标记,成脂、成骨诱导分化试剂盒鉴定细胞的分化潜能.结果 获得的hpcMSCs均为成纤维细胞样贴壁细胞,每例胎盘获得(25.54±3.38)×106个P0代细胞,初次培养、再次培养和第3次培养获得的细胞数分别为(11.73±2.09)×106、(11.12±1.42)×106和(2.69±0.71)×106,培养时间分别为(12.00±0.64)d、(8.87±0.63)d和(12.33±0.80)d.再次培养时间和获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义(均P＜0.05),初次培养和第3次培养的时间差异无统计学意义(P＞0.05),但第3次培养有时间延迟的趋势.3次培养的每培养瓶获得细胞数分别为(1.12±0.15)×106、(2.10±0.16)×106和(1.04±0.16)×106,再次培养获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义(均P＜0.05),初次培养和第3次培养获得细胞数差异无统计学意义(P＞0.05),但第3次培养有细胞数量减少的趋势.3次培养的细胞生长曲线和表面标记的表达率无差异,成骨、成脂诱导分化检测均呈阳性.结论 一份绒毛膜标本,通过3次培养,获得的P0代hpcMSCs细胞数量比初次培养翻倍,本方法可为再生医学提供足够的种子细胞.     

自身抗体阳性妊娠期糖尿病与HLA-DRB1基因型相关分析

目的:评估胰岛自身抗体阳性的妊娠期糖尿病(GDM)孕妇人类白细胞抗原DRB1位点(HLA-DRB1)基因频率分布及HLA-DRB1基因与其妊娠结局的相关性。方法:对2004年在我院产检无糖尿病史的广东省籍汉族GDM孕妇116例,测定谷氨酸脱羧酶抗体(GADA),胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛素自身抗体(IAA),以及用序列特异性引物杂交技术(PCR-SSOPH)进行HLA-DRB1基因分型。抗体阳性的42例纳入研究组,抗体阴性的74例为对照组。比较两组GDM孕妇的妊娠结局和产后6周血糖情况。结果:研究组的孕妇比对照组孕前BMI较低,妊娠失败可能性较高。1型糖尿病相关的HLA-DRB1基因频率分布在两GDM组间差异无显著性,但两组HLA-DRB1*04-频率均高于正常人群(P<0.01)。结论:自身抗体阳性的GDM孕妇可能有1型糖尿病遗传背景和免疫反应,应严密监护,加强随访。     

产前诊断致死性侏儒三例报告

目的探讨致死性侏儒Ⅰ型（thanatophoric dysplasia type 1,TD 1）的基因突变情况。方法经产前超声诊断的3例TD 1胎儿,用DNA测序法分析成纤维细胞生长因子受体3（fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3）基因突变。结果3例TD 1胎儿均为FGFR3基因第7外显子742 C→T（R248C）杂合突变。结论对于临床怀疑TD1的病例,建议行R248C突变检查确诊。     

脐血干细胞库的建立及其临床应用

目的建立无关供者脐血干细胞库,用于治疗骨髓衰竭、恶性及非恶性血液病、某些遗传病、重型免疫缺陷等疾病的干细胞移植.方法采集足月顺产或剖宫产的新生儿脐血,以羟乙基淀粉分离红细胞,DMSO/LMD冷冻保存.每份脐血常规检测细胞活率、有核细胞计数、祖细胞体外培养、CD34+细胞检测、HLA配型及病原学检测等.结果共采集2318份脐血,合格1240份,合格率为53.5%,合格脐血采集的平均体积(98.3±27.0)ml,分离后脐血有核细胞为(1.2±0.5)×109,回收率为(88.90±9.65)%.脐血细胞存活率为(97.00±2.61)%.CFU-GM数为(5.18±14.35)×105,BFU-E数为(10.35±11.55)×105,CFU-Mix数为(1.03±1.47)×105.脐血分离后CD34+细胞百分率为(0.5±0.32)%,细菌培养阳性4例,4例脐血CMV-IgM阳性.在广州脐血库的172例脐血移植登记患者中,HLA匹配4个位点以上的占91.12%.至2000年5月共提供9份应用于无关供者脐血移植,其中6例植入,植入成功率66.7%.结论脐血库的建立可使脐血能够较好地应用于造血干细胞移植治疗,建立脐血库有良好的应用前景.     

116例脐血PCR-SSP和PCR-SSOP的HLA-DR分型结果分析

脐血中富含造血干细胞。造血干细胞移植是治疗多种危重病患者的有效手段。移植前的ＨＬＡ分型是决定其移植成功的重要环节之一。器官移植供受者间ＨＬＡ ＤＲ不相容可引起急性移植物抗宿主反应 (ＧＶＨＤ)。因此 ,脐血移植中需有精确的ＨＬＡ ＤＲ基因分型。本研究从 1999年 1月至 7月对脐血库的 116例标本分别用ＰＣＲ ＳＳＰ和ＰＣＲ ＳＳＯＰ法检测 ,分析结果如下。材料和方法标本来源 :116例标本来自本院脐血库中的脐血标本。标本的ＤＮＡ提取 :脐血标本为ＡＣＤ Ｂ抗凝血 ,取 2 0 0 μｌ作盐酸胍法抽提ＤＮＡ〔1〕。ＰＣＲ ＳＳＰ方法 …     

发现一种中国人少见的β地中海贫血基因突变

目的报道1例中国人少见的β地中海贫血基因突变及其产前诊断结果。方法采用PCR产物直接DNA序列分析法对一例表型阳性病例和胎血标本进行检测。结果父亲和胎儿均携带一种中国人少见的β地贫基因突变IVS-I-2(T→C)。结论β地贫基因IVS-I-2(T→C)突变的报道,丰富了中国人β地贫突变谱,对于指导人群筛查、临床诊断和遗传咨询具有重要价值。