564例抗磷脂抗体检测的临床意义

目的总结抗心磷脂抗体(ACA)、狼疮抗凝物(LA)、活化蛋白C抵抗性(APCR)检测与脑梗死、习惯性流产、系统性红斑狼疮(SLE)、深静脉血栓等血栓相关性疾病之间的关系及其临床意义。方法采用APIT-LA法筛选LA;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ACA—IgG、IgM、IgA;活化蛋白C抑制比值法检测APCR。结果在检测的564例患者中,ACA—IgG、IgM、IgA的阳性率分别为30％、24％和11％,LA的阳性率为6．5％,APCR阳性率为7．9％。其中脑梗死64例,ACA—IgG、IgM、IgA的阳性率为14％,APCR的阳性率为7．8％,未发现LA阳性的病例。265例习惯性流产的患者中,ACA—IgG、IgM、IgA阳性率分别为19％、18％和3％,LA阳性率2．7％,APCR阳性率5．8％。171例的SLE患者中,ACA—IgG、IgM、IgA的阳性率分别为35％、25％和18％,LA阳性率8．8％,APCR阳性率为6％。其他原因不明的血栓性疾病患者64例,ACA—IgG、IgG、IgA的阳性率分别为78％、55％、22％,LA阳性率为30％,APCR的阳性率为23％。结论ACA、LA、APCR的检测对SLE、脑梗死、习惯性流产,尤其是原因不明的血栓性疾病患者的诊断和发病机制研究有重要价值。     

新的双重杂合性FV基因突变导致的重型遗传性FV缺陷症

目的对一个遗传性凝血因子V(FV)缺陷症家系进行FV基因突变的检测。方法用活化部分凝血活酶时间(Am)，凝血酶原时间(PT)及FV促凝活性(FV：C)和FV抗原(FV：Ag)测定进行表型诊断；用PCR法对先证者FV基因25个外显子及其侧翼序列进行扩增，PCR产物纯化后直接测序，检测其基因突变。突变位点经限制性内切酶分析证实：结果先证者APTT 249．2s．PT46．6s。TT17．9s，Fg3．42g/L，FV：C0．1％，FV：Ag 1．5％，FⅡ：C99％，FⅦ：C110％、FⅧ：C95％、FⅨ：C88％、FX：C120％、vWF121％；FV外显子区共发现4个与基因文库Z99572序列不同的位点，其中位于exon13区的杂合性2238～2239de1AG导致移码突变和终止密码子的提前m现(Asp689stop)，位于exon23区的杂合性G6410T错义突变导致Gly2079 Val.家系分析表明前者遗传于母亲，后者遗传于父亲。结论2238～2239delAG导致的移码突变和G6410T导致的错义突变．是导致先证者FV缺陷的原因。这是2个导致遗传性FV缺陷症的新的FV基冈突变位点。     

调节性T细胞亚群变化与五种自身免疫性疾病的关系

机体通过调控活化自身反应性T细胞，可保护机体免受持续有害免疫反应的损害。最近研究表明，调节性T细胞（简称Treg）可主动抑制逃逸出被动耐受机制的自身反应性T细胞。目前已发现的Treg亚群有多种，CD4^＋CD25＋T细胞是研究较为深入的一类，大量动物实验证明，其数量缺乏和功能紊乱将导致严重或致命的自身免疫性疾病。但对其在人自身免疫性疾病发生中的作用目前还不明确，故本研究分析与探讨其与5种自身免疫性疾病的发病关系。     

一种新的FⅩⅢ基因突变导致的遗传性FⅩⅢ缺陷症

目的 对1例遗传性凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）缺陷症患者及其家系成员FⅩⅢ基因[F（13）A]进行分析，探讨其分子致病机制。方法 尿素溶解法定性检测FⅩⅢ活性，抽提外周血基因组DNA．PCR扩增FⅩⅢA基因的15个外显子及其侧翼序列，PCR产物纯化后直接基因测序，并对家系成员F（13）基因相应的突变序列进行检测。结果 先证者FⅩⅢ定性试验阳性。基因测序发现先证者F（13）A存在纯合缺失，外显子10自127067位起缺失33个核苷酸（127067del33，GI：AF418272），导致阅读框内缺失11个氨基酸（406Met-416Ala），产生了由720个氨基酸残基组成的截短型FⅩⅢA蛋白。其父母FⅩⅢ定性试验为阴性，均显示为该序列的杂合缺失突变。结论 先证者为遗传性FⅩⅢ缺陷症患者，由F（13）A外显子10缺失突变所致。该突变为国际首次报道。     

肺癌患者外周血循环内皮细胞和VEGF检测临床意义的探讨

目的:探讨肺癌患者外周血循环内皮细胞(CECs)包括活性循环内皮细胞(aCECs)与VEGF之间的关系及其在肺癌中的临床意义。方法:用流式细胞仪对70例肺癌患者(NSCLC64例)化疗前后及30例健康人外周血CECs及aCECs进行检测,同时采用ELISA方法检测肺癌患者化疗前后VEGF水平。结果:NSCLC患者外周血CECs及aCECs的数量明显高于健康人群(P=0.000)。不同病理类型肺癌之间CECs及aCECs的数量差异无统计学意义(NSCLC与SCLC,P=0.878、0.936;鳞癌与腺癌,P=0.786、0.658)。CECs及aCECs的数量与VEGF之间无明显相关性(P=0.697、0.631)。治疗后不同疗效间肺癌患者VEGF水平比较,PD均高于CR+PR及SD(P=0.009、0.031)。NSCLC及SCLC化疗后aCECs的数量高于化疗前(P=0.031、0.029);SD及PD患者CECs、aCECs的数量高于化疗前(P=0.024、0.014;P=0.036、0.028);对治疗后不同疗效肺癌患者CECs及aCECs水平比较,aCECs数量PD、SD均高于CR+PR(P=0.022、0.009)。结论:VEGF联合CECs及aCECs检测可以作为很好的预测性指标评估肺癌的血管生成状况及判断预后。     

一种新的抗凝血酶基因突变导致遗传性抗凝血酶缺陷症

目的对1例遗传性抗凝血酶（AT）缺陷症患者及其家系成员AT活性（AT：A）、AT抗原含量（AT：Ag）进行检测及基因分析，探讨该遗传性AT缺陷症发病的分子机制。方法采用发色底物法和免疫比浊法分别检测先证者及其家系成员血浆AT：A和AT：Ag，提取外周血基因组DNA，PCR法扩增AT基因的全部7个外显子及侧翼序列，DNA序列分析AT的基因异常。结果先证者AT：A和AT：Ag分别为45％和97mg／L，为Ⅰ型AT缺陷症。AT基因外显子5区第9833位核苷酸发生杂合性T→A突变，引起Tyr363Stop（Y363X）无义突变。其他家系成员基因测序结果显示有4人（Ⅱ2、Ⅱ6、Ⅲ7、Ⅲ14）存在该突变。结论该家系为I型遗传性AT缺陷症。AT基因外显子5区杂合性9833T—A无义突变引起AT缺陷，导致静脉血栓是该遗传性AT缺陷症的分子致病机制。该突变在国际上尚未见报道。     

选择性环氧化酶-2抑制剂对肝癌细胞侵袭力的影响

目的:研究选择性环氧化酶-2抑制剂尼美舒利 (Nimesuli,Nim)对肝癌细胞SMMC-7721增殖和侵袭力的影响并探讨其作用机制．方法:应用Nim作用于SMMC-7721细胞,并设对照组和实验组(Nim 25,50,100,200, 400 μmol/L),MTT法检测Nim作用24、 48、72 h后,对SMMC-7721细胞增殖的影响;用Transwell小室检测Nim作用24 h后对 SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、明胶酶谱法分析 Nim对SMMC-7721细胞分泌的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA和酶活性的影响．结果:Nim对SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;Nim 25,50, 100,200,400 μmol/L作用后,与对照组比较 Nim能降低SMMC-7721细胞分泌的MMP mRNA和酶的活性(MMP-2 mRNA:0．968, 0．545,0．330,0．158,0．083 vs 1．063,P<0．05或 P<0．01;MMP-9 mRNA:1．005,0．758,0．465, 0．208,0．103 vs 1．075,除25 μmol/L作用外,其余P<0．01);Nim作用后SMMC-7721细胞穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(SMMC-7721 细胞穿透聚碳酸酯膜抑制率为7．8％,28．0％, 35．6％,53．6％,61．4％),与对照组比较有显著差异(P<0．05)．结论:选择性环氧化酶-2抑制剂Nim可以抑制肝癌细胞的生长和其侵袭力,Nim抑制肝癌细胞侵袭力的作用机制与通过降低MMP水平有关．     

血小板无力症的临床和实验特点(附3例分析)

目的分析总结血小板无力症(GT)患儿的临床特征和实验室资料。方法1990年1月~2006年1月经我院确诊的3例血小板无力症回顾总结分析。结果3例患儿男女发病率无明显差异,自幼即发生出血倾向,临床表现主要为出血时间延长、血快收缩异常,血小板功能异常。结论血小板无力症是Ⅱb/Ⅲa表达量减少或结构异常引起的一种罕见的遗传性出血疾病。     

成人急性髓细胞白血病DNMT3A基因突变的检测和临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中DNA甲基转移酶3A基因(DNA methyltransferase 3 alpha,DNMT3A)突变的检出率和临床意义。方法收集70例恶性血液病病人骨髓标本,采用聚合酶链式反应技术(polymerase chainreaction,PCR)扩增目的片段,然后进行直接测序检测DNMT3A突变情况。结果 70例患者中有6例突变,全部为初发AML患者,54例初发AML患者的DNMT3A突变率为6例(突变率11.1%),其中1例为R882C突变,5例为R882H突变,在正常核型AML患者中的突变率为19.2%,在急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AML-M5)中突变率高达21.7%。DNMT3A突变组患者的年龄、性别、骨髓原始细胞数、初发时白细胞数、首次化疗缓解率等临床指标与DNMT3A野生型组相比均无统计学意义。结论 DNMT3A基因突变在AML中发生率较高,多见于正常染色体核型和AML-M5患者中,其与预后的关系有待进一步研究。