慢性乙型与丙型肝炎患者重叠HGV感染情况的调查

采用逆转录－－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对深圳地区６１便慢性乙型肝炎与３３例慢性丙型肝炎患者血清ＨＧＶＲＮＡ进行检测。结果两且患者ＨＧＶＲＮＡ的一率分别为８．２％和２１．２％，两组间的差异有显著性（Ｐ〈０．０１），生丙型肝炎患者ＨＧＶ感染较乙型肝炎常见。３３例慢性丙型肝炎中，１５这血粮食或血制品的患者ＨＧＶＲＮＡ阳性率为４０．０％。明显高于１８例无血制品接触史患者的１．３％（Ｐ〈０．０５）。     

肝星状细胞活化与肝纤维化分期和血清学指标的关系

目的 :了解肝星状细胞 (HSC)活化与肝维纤化分期的关系 ,初步探讨肝组织中HSC活化强度的临床意义。方法 :对 5 6例慢性乙型肝炎患者肝穿组织进行纤维化分期 ,采用EnVision免疫组织化学法检测肝组织中α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达水平 ,放射免疫分析测定血清透明质酸 (HA)、层粘连蛋白 (LN)和IV型胶原 (IV C)含量。结果 :α SMA的表达与纤维化分期为正相关 (r =0 41,P <0 0 1)。α SMA表达的不同强度间患者血清HA、LN及IV C水平差异均无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :HSC活化强度可用于反映肝纤维化的强度 ,而与血清HA、LN及IV C的含量无对应关系     

广州地区新生儿输血传播病毒感染状况

目的 探讨广州地区新生儿输血传播病毒（TTV）感染率及基因型。用PCR对835例正常新生儿脐血标本进行TTVDNA扩增，对9例TTVDNA阳性PCR扩增产物进行克隆和测序。结果 18例新生儿脐血检出TTVDNA，阳性率2．2％。9例被测序的TTVDNA阳性标本核苷酸序列与日本分离株的同源性为86．8％－96．7％。结论 新生儿存在先天性TTV感染。TTV广州株与日本株具有相似的基因型。     

葡萄内脂对PC12神经细胞损伤的保护作用研究

目的探讨葡萄内脂对过氧化氢(H2O2)诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立PC12细胞过氧化氢损伤模型。将处于对数生长期的PC12细胞分为正常对照组、模型组、阳性对照组、5μmol/L葡萄内脂组、25μmol/L葡萄内脂组、50μmol/L葡萄内脂组。采用不同浓度(5μm/L,25μm/L和50μm/L)葡萄内脂对PC12细胞进行干预,通过测定细胞存活率、细胞上清液中乳酸脱氢酶水平和细胞内氧化活性物质(ROS)水平评价干预效果。结果模型组PC12细胞存活率显著低于正常对照组及阳性对照组; 25μmol/L、和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞存活率(与阳性对照组相当)显著高于模型组,随着葡萄内脂浓度的增加,H2O2诱导损伤的PC12细胞的存活率呈升高趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞上清液乳酸脱氢酶水平明显高于正常组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组细胞上清液乳酸脱氢酶水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,乳酸脱氢酶水平呈降低趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞ROS水平显著高于正常对照组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞ROS水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,ROS水平呈降低趋势,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论葡萄内脂对H2O2诱导损伤的PC12神经细胞具有明显的保护作用,可能与其能维持细胞膜的完整性、发挥抗氧化作用有关。     

苦参碱立方液晶纳米粒的制备及质量控制的研究

目的采用改良的高压均质法制备苦参碱立方液晶纳米粒,并建立其质量控制方法。方法以单油酸甘油酯(GMO)为载体材料,洛泊沙姆(F127)为稳定剂,通过高速剪切和超声粉碎制备立方液晶纳米粒。采用高效液相色谱法测定苦参碱的含量。结果苦参碱检测浓度在11.125~178μg/m L范围内,浓度和峰面积线性关系良好。苦参碱立方液晶纳米粒在3个浓度水平下测得的平均回收率分别为102.1%、102.6%、100.5%,RSD分别为1.9%、1.9%、2.1%(n=3);包封率为68%,RSD为2%;实验方法精密度良好。结论该制备工艺简单易行,质量控制方法简单、准确。     

丁型肝炎病毒载体携带核酶在小鼠体内抑制乙型肝炎病毒复制

目的：研究用丁型肝炎病毒（HDV）作为载体携带乙型肝炎病毒（HBV）特异性的锤头状核酶所构建的重组体，在细胞体系及转染动物模型中对HBV基因表达和复制的影响。方法：将HDV-核酶重组体和HBV的共表达质粒转染Huh-7细胞以分析HDV-核酶重组体对HBV基因表达的影响；用小鼠尾静脉快速注射法将共表达质粒转染到小鼠体内，检测重组体在动物体内对HBV基因表达和复制的抑制作用。结果：转染细胞中，重组体对HBsAg的抑制与HDV重组位点和核酶靶位都有关；水压法注射的质粒在小鼠肝内得到表达，与对照相比重组HDV-核酶可有效抑制在肝和血清中HBV的基因表达以及复制。与细胞中的结果一致。结论：此项体内实验为进一步构建治疗性重组HDV病毒，发现靶向性抗病毒基因治疗手段奠定基础。     

三种乙型肝炎病毒DNA定量聚合酶链反应试剂比较及其假阴性原因分析

乙型肝炎e抗原（HBeAg）是乙型肝炎病毒（HBV）复制的一个标志，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阳性的患者体内HBV DNA亦较高。有报道所有该类标本均可检测到HBV DNA，且绝大部分（83．33％）的HBV DNA滴度高于10^6拷贝／ml。然而，我们在对临床标本进行HBV DNA定量检测中发现，相当一部分该类血清标本不能检测到HBV DNA或检测结果低于试剂盒检测下限。为了排除所用试剂盒缺陷造成的可能，我们对目前国内医疗机构常用的三种HBV DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）试剂进行了比较与分析。     

DC-SIGNR基因多态性与丙型肝炎病毒载量的相关性研究

目的了鹪丙型肝炎患者DC-SIGN／DC-SIGNR基因颈区重复序列的遗传多态性分布，探讨DC-SIGNR基因多态性与丙型肝炎病毒（HCV）载量的关系。方法采用PCR结合DNA测序对300例丙型肝炎患者DC—SIGNR重复序列多态性进行基因分型和测序分析；同时检测了患者的HCV病毒载量。结果该研究发现携带7等位基因（中等的）的患者、其HCV病毒载量水平低于携带9等位基因（较长的）的患者（P〈0.05），此外7／7基因型的患者组其HCV病毒载量水平低于9／7基因型的患者组，两组的差异有统计学意义（P〈0．05）、提示HCV病毒更易与携带较长DC—SINGR等位基因的患者结合。结论DC-SIGNR遗传多态性可能与HCV病毒在个体内的复制有关。     

ECLIA定量检测HBsAg及HBeAg与HBV-DNA相关分析

目的探讨电化学免疫发光法(ECLIA)定量检测HBeAg和HBsAg,并分析与DNA(HBV-DNA)含量之间的相关性,为临床提供诊断治疗依据。方法筛选乙肝病人标本500份,以荧光定量PCR法检测HBV-DNA(以HBV-DNA>500 copies/ml为阳性),按DNA含量不同分9组,同步以ECLIA检测HBeAb、HBeAg、HBsAg。结果HBeAg的含量(IU/ml)与HBV-DNA的含量(copies/ml)成正相关(r=0.99),在HBV-DNA 5×102~1×106copies/ml时,HBV-DNA的阳性率比HBeAg高(P<0.05),在HBV-DNA大于1×106copies/ml时,HBV-DNA的阳性率与HBeAg相比差异无显著性(P>0.05);HBV-DNA在500~1×106copies/ml之间,HBeAb有较高的阳性率,并随着HBV-DNA含量增加而逐渐下降。HBsAg的含量COI(cut off index)与HBV-DNA含量呈负相关(r=-0.94)。结论ECLIA的HBeAg定量检查可指示病人的传染性强弱,但尚不是最可靠的指标;HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标;HBsAg的定量检测意义不大。     

PreS_1和HBV-DNA与HBV-M相关性分析

目的:探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1Ag)在诊断慢性乙型病毒性肝炎病毒复制中的作用。方法:收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV-DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBV-DNA阴性对照100例。检测乙肝血清标志物(HBsAg、HBeAg、HBeAb)与PreS1Ag。结果:(1)HBV-DNA<1×106/ml,PreS1Ag的阳性率比HBeAg高,两者比较差异有显著性(P<0.05);HBV-DNA1×106/ml以上,PreS1Ag与HBeAg相比差异无显著性(P>0.05)。(2)HBV-DNA<1×105/ml,PreS1Ag阳性率随着HBV-DNA含量增加而增加,不同组间的PreS1Ag阳性率相比差异有显著性(P<0.05)。(3)HBV-DNA<1×107/ml,HBeAg的阳性率随着HBV-DNA含量增加而增加,不同组间的HBeAg阳性率相比差异有显著性(P<0.05)。(4)HBV-DNA<1×106/ml,HBeAb有较高的阳性率,并随着HBV-DNA含量的增加而逐渐下降,不同组间的HBeAb阳性率相比差异有显著性(P<0.05)。(5)以HBV-DNA检测结果为金标准,HBeAg的灵敏度为68.5%(274/400),阴性预示值为43.2%(96/222),检测有效率为64.8%(324/500);均低于PreS1Ag的灵敏度90.0%(360/400),阴性预示值55.6%(50/90),检测有效率82.0%(410/500)。结论:PreS1Ag比HBeAg较准确的反映乙肝病毒的复制情况,是“乙肝五项”有益的必要补充。