猪苓多糖对S180细胞培养上清免疫抑制作用影响的研究

目的 :研究猪苓多糖对肿瘤细胞系S180培养上清免疫抑制作用的影响。方法 :用MTT比色法检测有或无猪苓多糖作用的肿瘤细胞S180培养上清 (简称肿瘤上清 ) ,对ConA诱导的小鼠脾细胞增殖和IL 2产生 ,对小鼠脾细胞的杀伤活性 ,以及对CTLL 2细胞对IL 2反应性的影响。用流式细胞仪检测该培养上清对小鼠脾细胞表面IL 2Rα表达的影响。结果 :无猪苓多糖作用的肿瘤上清可强烈抑制上述 5项指标 ;而猪苓多糖作用的肿瘤上清则可明显上调上述方法中所测 5项指标。若先用含猪苓多糖培养液培养肿瘤细胞 2 4h或 48h ,而后洗去或不洗去猪苓多糖 ,再培养肿瘤细胞 2 4h ,所获肿瘤上清也可明显上调上述 5项指标。结论 :猪苓多糖可抵消肿瘤上清的免疫抑制作用 ,下调肿瘤细胞S180合成和 /或分泌免疫抑制物质     

重组卡介苗及猪苓多糖对荷瘤小鼠巨噬细胞NO释放量的影响

目的 观察重组卡介苗（rBCG)和中药猪苓多糖（PPS），对荷瘤小鼠空巨噬细胞释放NO的影响。方法 将黑色素瘤细胞株B16接种于小鼠左大腿外侧皮下，建立荷瘤小鼠模型，分别用rBCG－IL-2,rBCG-IL-2 PPSPPS进行局部治疗。于给药后第1，2，3和5wk处死小鼠，用NO酶法测定小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平，并观察不同实验组瘤体的变化。结果 rBCG－IL－2组小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平最高。与对照组相比较，PPS组小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平在第1wk与第2wk增高，第3wk起与对照组释放的NO水平没有差异。rBCG－IL－2组小鼠随给药时间的延长，皮下瘤体逐渐缩小。PPS组小鼠瘤体在给药后第1wk和第2wk生长缓慢，第3wk起瘤体生长速度明显增加。结论 rBCG－IL－2与PPS能提高小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平，rBCG－IL－2能明显抑制肿瘤生长。     

正交试验优选猪苓多糖长循环脂质体制备工艺的研究

目的研究猪苓多糖长循环脂质体的处方和制备工艺。方法采用逆相蒸发法制备脂质体。以紫外分光光度-Sephadex法测定脂质体中猪苓多糖的包封率和载药量,采用单因素和正交试验法优化猪苓多糖长循环脂质体的处方和制备工艺。结果优化后的脂质体平均包封率为98.24%,平均载药量为27.20%。结论脂质体制备工艺合理,紫外分光光度-Sephadex法测定猪苓多糖长循环脂质体包封率准确性高,重现性好,简便易行。     

猪苓菌酯酶同工酶及过氧化物同工酶的研究

 目的：研究不同来源猪苓菌株的酯酶同工酶及过氧化物同工酶图谱的变化规律。方法：采用聚丙烯酰胺圆盘电泳法。结果：同一猪苓菌株在不同培养天数同工酶谱带及活性不相同,但是具有一定数量迁移率（Rf）相同的谱带贯穿于整个培养时间,不同菌株之间具有特征性谱带。结论：同工酶谱带的多少及活性与菌丝的生长速度即代谢的强弱成正相关。     

中药猪苓的生药学研究

报道了猪苓的植物来源、性状、显微组织特征、理化鉴别反应,多糖、总灰分、酸不溶性灰分及水溶性浸出物的含量测定,为猪苓的质量控制及药典标准规格的修订提供了参考依据。     

猪苓及猪苓多糖对膀胱癌模型大鼠腹腔巨噬细胞吞噬和表面免疫相关分子表达的影响

目的:观察猪苓及猪苓多糖(PPS)对BBN加糖精诱导的膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能、体外NO释放及共刺激分子和表面分子表达的影响。方法:实验分为空白对照组、模型组、PPS组和猪苓高中低剂量共6组。用流式细胞术检测膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的荧光微球吞噬率、TLR4/CD14、CD86、CD40的表达。Griess试剂盒检测并分析猪苓及PPS对腹腔巨噬细胞体外NO释放的影响。结果:PPS组与模型组比较,PPS显著促进巨噬细胞吞噬率的增加、NO释放的比值均降低、巨噬细胞表面分子TLR4/CD14、CD86、CD40的表达均显著升高(P<0.05)。不同浓度猪苓组与模型组比较巨噬细胞吞噬率增加、NO释放的比值均降低(P<0.05),巨噬细胞表面分子CD86表达增加。低浓度猪苓组巨噬细胞CD40表达百分率显著升高(P<0.05);但TLR4/CD14的表达无明显变化;中、高剂量猪苓组TLR4/CD14的表达百分率与模型组比较则降低(P<0.05),CD40的表达无统计学差异。结论:PPS可显著促进膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和表面免疫相关分子的表达,但猪苓组对巨噬细胞功能的影响因剂量不同而表现出不同结果,可能与猪苓诸多成分同时作用或各成分作用的靶点不同有关。     

假单胞杆菌、灵芝等几种菌的发酵液对猪苓菌生长的影响

 目的：证明在猪苓菌发酵过程中加入假单胞杆菌、灵芝、金针菇等几种菌的发酵液对猪苓多糖产生是否具有促进作用。方法：采用平板培养法、发酵培养法。平板培养法直接测定生长量；发酵培养所得的发酵液采用3，5-二硝基水杨酸法测定多糖含量。结果：在猪苓菌发酵培养过程中加入假单胞杆菌、灵芝、金针菇等几种菌的发酵液可使猪苓菌球数量增多、重量大、多糖含量高。以假单胞杆菌发酵液的处理效果最佳；在平板培养时，培养25d菌落直径达72．25mm，在发酵培养过程中，在最佳产糖期发酵液中粗多糖含量达7．800mg·ml^－1，而对照分别为48．63mm和5．200mg·ml^－1。结论：在猪苓菌丝体培养过程中加入假单胞杆菌、灵芝、金针菇等几种菌的发酵液均对其菌丝的生长及发酵过程中多糖的产生具有促进作用。     

中心组合设计——响应面法优化猪苓多糖提取工艺

目的：优化猪苓多糖提取工艺。方法：以猪苓中多糖得率为响应值,采用中心组合设计（CCD）-响应面法（RSM）对其提取工艺进行研究。结果：最优工艺参数为液固比11：1,醇沉浓度77%,提取温度95℃,提取时间2.73 h,提取2次。结论：中心组合设计-响应面法可在连续范围内进行分析,具有实验周期短、精密度高的优点。优化结果可为制剂生产提供参考依据。     

三种不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化的研究

目的:研究猪苓多糖的纯化方法。方法：采用三种不同型号大孔吸附树脂，以猪苓多糖含量为考察指标，研究不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化的影响。结果：三种不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖均有显著纯化作用，以AB－8型大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化效果最好。结论：选用AB－8型大孔吸附树脂对猪苓多糖进行纯化。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的　观察猪苓多糖对人T2 4膀胱癌细胞内钙离子 (Ca2 )浓度的影响 ,探讨猪苓多糖抗癌机理。方法　体外培养人T2 4细胞经钙荧光指示剂 (calciumcrimson AM )负载后 ,用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca2 随时间的变化。结果　猪苓多糖低剂量 (0 .2mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 降低 ,高剂量 (>1mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 升高 ,最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca2 升高 ,细胞浆Ca2 无明显改变。结论　猪苓多糖可引起T2 4细胞内Ca2 水平的显著变化 ,而且这种变化主要表现在细胞核内 ,提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用