ELABELA通过调控AKT信号通路影响滋养细胞侵袭的研究

目的 探讨ELABELA(ELA)对妊娠滋养细胞(Bewo细胞)侵袭行为的影响及其可能的作用机制。方法 用siRNA-ELA转染处于对数生长期的Bewo细胞,分为siRNA-ELA转染组,阴性对照组(细胞转染无意义序列)及空白组,细胞转染后于倒置显微镜下观察转染效率,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染后各组细胞中ELA mRNA表达并明确沉默效率。划痕实验测定各组细胞迁移能力,Transwell实验测定各组细胞的迁移、侵袭能力。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞p-AKT、MMP9蛋白表达水平。结果 si-ELA组的ELA表达量明显低于si-NC组及空白组(P<0.001),且si-NC组与空白组差异无统计学意义(P>0.05);siRNA-ELA组细胞的迁移及侵袭能力均明显低于空白组(P<0.01;P<0.01);siRNA-ELA组p-AKT蛋白及MMP9蛋白表达水平明显低于空白组(p-AKT P<0.01;MMP9 P<0.001)。结论 敲低ELA可抑制滋养细胞的侵袭及迁移能力,其机制可能与AKT信号通路有关。     

磷酸化丝氨酶/苏氨酸蛋白激酶B与吲哚美辛诱导胃黏膜损伤的关系探讨

目的 探讨抗凋亡信号蛋白磷酸化丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶B(AKT)表达水平与吲哚美辛诱导胃黏膜损伤的关系.方法 采用免疫印迹法检测吲哚美辛处理后的C57BL/6小鼠胃黏膜组织和大鼠胃黏膜细胞(RGM-1)中抗凋亡信号蛋白磷酸化AKT表达水平的变化.结果 吲哚美辛处理后的小鼠胃黏膜组织呈现典型的胃溃疡病理形态变化;和对照组相比,经吲哚美辛处理后的小鼠胃黏膜组织和大鼠胃黏膜细胞RGM-1中抗凋亡信号蛋白磷酸化AKT表达水平均明显降低.结论 抗凋亡信号蛋白磷酸化AKT表达水平降低可能是吲哚美辛诱导的胃黏膜损伤的一种新的机制.     

胰岛素通过PI3K/AKT/GSK3通路促多囊卵巢综合征患者子宫内膜病变机制的研究

目的 研究多囊卵巢综合征(PCOS)胰岛素抵抗(IR)与非抵抗患者子宫内膜的PI3 K/AKT/GSK3信号通路蛋白表达情况;探讨胰岛素在PCOS患者子宫内膜病变的作用机制.方法 以2006年3月至2010年5月北京天坛医院妇产科门诊治疗的34例PCOS患者为实验组,以同期因输卵管因素不孕行诊刮术的非PCOS患者30例为对照组.实验组患者行OGTT、INS实验及性腺6项测定,根据是否存在IR将PCOS患者分为Ⅰ组(IR组)和Ⅱ组(非IR组).对实验组和对照组患者子宫内膜石蜡标本应用免疫组化方法测定PI3K(磷脂酰肌醇-3激酶)、p-AKT(PPKB,磷酸化蛋白激酶B)、GSK3(糖原合成酶激3)的表达.结果 PCOS患者的PDK表达水平要明显高于对照组(P=0.000,0.003),其中PCOS Ⅰ组最高(P=0.022).在p-AKT表达上,PCOS患者要明显高于对照组(P=0.011,0.000),其中以PCOS Ⅰ组最高(P =0.002),而在GSK3表达上,PCOS Ⅰ组,Ⅱ组和对照组三组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论胰岛素信号通路PI3K、p-AKT可能是IR PCOS患者子宫内膜病变的信号转导通路.     

小鼠蛛网膜下腔出血后胰岛素与PI-3 K／AKT信号通路的关系

观察胰岛素在小鼠蛛网膜下腔出血后神经元凋亡作用的影响,并进一步探讨其引起该作用的分子机制。健康雄性昆明小鼠,体质量28～32 g,清洁级（SPF）,70只,随机分为三组：假手术组（Sham组）,蛛网膜下腔出血＋生理盐水组（SAH组）,蛛网膜下腔出血＋胰岛素组（Ins组）,蛛网膜下腔出血＋胰岛素＋PD98059抑制剂组（PD组）。检测方法：（1）神经功能学检测,观察记录小鼠的精神状态、部分感觉和运动能力;（2）HE染色观察小鼠顶叶皮质神经元的形态学改变;（3）RT-PCR检测p-AKT、p-ERK的mRNA水平表达情况;（4）Western blot检测p-AKT、p-ERK的蛋白水平表达情况。结果表明：（1）神经功能学检测：与对照组比较,小鼠SAH后感觉和运动能力呈现不同程度障碍,综合得分明显下降;与SAH组比较,Ins组感觉和运动能力相对较好,综合得分有所上升。（2）HE 染色观察：Sham组小鼠神经元排列相对整齐,形态较完整,核质均匀,核仁清晰;SAH组小鼠神经元损伤较重,部分细胞肿胀,排列紊乱,细胞周间隙增宽,部分细胞核固缩深染。（3）RT-PCR结果显示：与Sham组比较,SAH后6h p-AKT 有所增加,同时p-ERK增加,与SAH组比较,Ins组p-AKT增加更显著,且p-AKT相对增加,与Ins组比较,PD组p-AKT明显减少,p-ERK明显减少,且与SAH组比较亦有统计学意义。（4）Western Blot结果显示p-AKT、p-ERK蛋白水平变化与mRNA水平一致。胰岛素可通过PI3 K-Akt信号转导途径明显抑制小鼠蛛网膜下腔出血后神经元的凋亡,其中Akt激活以及ERK的增加是胰岛素上述抗凋亡效应的关键环节。     

榄香烯对肝细胞癌的治疗作用及机制研究

目的探讨榄香烯对肝细胞癌的抗癌作用及其机制。方法体外观察榄香烯处理后的小鼠肝癌细胞系H22细胞的凋亡及增殖影响,检测AKT相关基因的表达。建立小鼠肝癌原位移植模型,随机分A、B、C组,每组10只,A组生理盐水0.3ml/次/天,B组榄香烯3mg/0.3ml/次/日,C组替吉奥生理盐水0.2mg/0.3ml/次/日,连续灌胃两周,观察小鼠生活状态、体重变化及小鼠肝脏肿瘤大小。结果随着榄香烯浓度增大,H22细胞受抑制增殖的作用增强,半数抑制浓度约为30ug/ml,榄香烯处理后肝癌细胞AKT mRNA表达量没有明显的变化,AKT蛋白无明显变化,但是p-AKT蛋白明显降低。B组小鼠生活状态以及体重与A组无差别,肿瘤直径小于A组,B组小鼠生活状态及体重明显优于C组,肿瘤大小与C组无明显差别。结论体内外实验均提示榄香烯有抑制肝癌细胞生长的作用,其毒副作用不明显,其机制可能是通过PI3K/AKT途径,降低AKT的磷酸化抑制H22肝癌细胞增殖。     

“黄芪-莪术”药对通过PTEN与p-AKT对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的：探讨“黄芪-莪术”药对通过PTEN与p-AKT对人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）增殖的作用机制。方法：将MDA-MB-231细胞进行“黄芪-莪术”药对（药对组）、顺铂（顺铂组）、“黄芪-莪术”药对联合顺铂（药对+顺铂组）治疗,并设置空白对照组。MTT法检测细胞增殖,RT-qPCR检测PTEN与p-AKT的mRNA表达水平,Western Blotting检测p-AKT蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,药对组PTEN mRNA表达水平上升,OD值与p-AKT蛋白表达水平下降（P<0.05）,p-AKT mRNA蛋白表达水平变化差异无统计学意义（P>0.05）;顺铂组OD值与PTEN mRNA表达水平下降（P<0.05）,p-AKT mRNA与蛋白表达水平变化差异无统计学意义（P>0.05）;而药对+顺铂组在药对治疗的基础上能进一步抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进PTEN mRNA的表达,抑制p-AKT mRNA与蛋白表达水平。结论：“黄芪-莪术”药对抑制MDA-MB-231细胞增殖的机制可能通过上调PTEN基因而直接抑制AKT蛋白水平。     

鱼藤素阻断HL-60细胞生存信号通路调控作用的初步研究

目的：研究鱼藤素对人类白血病细胞株HL-60细胞系体外抗肿瘤作用,探讨AKT的功能活化状态p-AKT及抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2在白血病HL-60细胞中的表达及相关性。方法：采用WST-1细胞增殖实验观察细胞的生长抑制作用,原位末端标记（TUNEL）法观察细胞凋亡指数,应用AnnexinV／PI双染和流式细胞仪计数,观察细胞是否发生凋亡,利用透射电镜观察细胞形态学变化。Western blot检测鱼藤素对HL-60细胞内p-AKT、Survivin、Bcl-2蛋白表达的影响,并进行分析。结果：WST1实验结果显示,经过10～80nmol／L鱼藤素处理48h后,HL-60细胞的生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为（10．13±3．16）％、（13．84±2．02）％、（30．72±3．82）％和（47．05±1．36）％,并呈现出比较明显的浓度依赖关系。鱼藤素诱导HL-60细胞发生了早期凋亡,40nmol／L鱼藤素处理HL-60细胞48h和72h,AnnexinV-PI^-标记的早期凋亡细胞所占的比例分别为相应对照组的2．06倍和5．33倍,透射电镜、荧光显微镜下能观察到胞核浓缩、碎裂以及凋亡小体的形成。细胞内P—AKT、Bcl-2及Survivin均发生不同程度的降解,细胞内重要的生存信号通道P13K／AKT被阻断,细胞发生凋亡。结论：鱼藤素可以通过清除细胞内重要信号蛋白、阻断细胞生存信号通路来诱导HL-60细胞发生凋亡。     

金雀异黄素对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡及其机制的研究

目的研究金雀异黄素(Genistein,Gen)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、凋亡及其PI3K/AKT信号转导通路的影响。方法采用0、50、100、200μmol.L-1的Gen处理FLS 24、48、72 h,采用MTT法检测Gen对FLS增殖的影响;免疫印迹(Western blot)法检测Gen对CIA大鼠FLS凋亡蛋白bcl-2、bax表达的影响;West-ern blot法检测不同浓度的Gen处理后的CIA大鼠FLS中AKT和p-AKT表达情况。结果 50、100、200μmol.L-1的Gen均能抑制CIA大鼠FLS的增殖,且能够调节CIA大鼠FLS凋亡蛋白的表达,呈剂量依赖性关系;Gen对细胞中AKT蛋白表达无影响,不同浓度的Gen作用于FLS 72 h后p-AKT表达均有降低(P<0.05)且随Gen浓度的增加p-AKT表达逐渐降低。结论 Gen能够调节CIA大鼠FLS增殖与凋亡的平衡,其作用机制可能与下调PI3K/AKT信号传导通路的酪氨酸激酶,抑制AKT的磷酸化有关。     

非小细胞肺癌组织中磷酸化AKT的表达及意义

目地探讨磷酸化AKT（p-AKT）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及意义。方法应用免疫组织化学方法检测52例NSCLC组织和18例正常肺组织中p-AKT的表达。结果p-AKT在NSCLC组织中的表达阳性率为53.8%,高于正常肺组织中表达0.0（P〈0.05）。NSCLC组织中p-AKT的表达与患者年龄、性别、吸烟、组织学类型、肿瘤组织分化程度及有无淋巴结转移、临床分期无关（P〉0.05）。结论NSCLC组织中p-AKT高表达,PI3K/AKT信号传导通路参与了NSCLC的发生发展。     

血管能抑素诱导甲状腺癌细胞SW579凋亡和衰老及其机制

目的：检测血管能抑素（ canstatin）对甲状腺癌SW579细胞的增殖抑制、诱导凋亡与衰老作用及其机制。方法：利用软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖。分别利用Annexin V-FITC/PI双染和β-半乳糖苷酶染色检测细胞凋亡和衰老。Western blot技术检测可能的机制。结果：Canstatin可以明显抑制SW579细胞增殖,诱导其凋亡和衰老。处理后细胞的p-AKT蛋白水平明显下降。而caspase 3和9蛋白水平升高。结论：Can-statin通过抑制p-AKT导致SW579细胞凋亡和衰老。