β连环蛋白与T细胞抑制物过表达对子宫内膜癌细胞活性的影响

目的探讨β连环蛋白(β-catenin)与T细胞抑制物(ICAT)过表达对人子宫内膜癌细胞系HEC-1A活性的影响,为临床诊治提供参考依据。方法重组腺病毒载体ICAT转染HEC-1A细胞为ICAT过表达组,空白腺病毒载体转染HEC-1A细胞为空载腺病毒组,同时设置空白对照组,转染48 h后通过RT-PCR和Western blot法鉴定各组细胞ICAT表达情况;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期,并进行Transwell细胞迁移和侵袭试验。结果转染48 h后,ICAT过表达组细胞ICAT mRNA和蛋白相对表达量明显高于空载腺病毒组与空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.05),空载腺病毒组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。转染后第3天、第4天ICAT过表达组细胞增殖速度明显高于空载腺病毒组与空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.01)。转染后第3天,ICAT过表达组G0/G1期细胞比例明显低于空载腺病毒组与空白对照组,S期细胞比例明显高于空载腺病毒组与空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.01);G2/M期细胞比例在3组细胞间差异无统计学意义(均P>0.05)。Transwell细胞迁移和侵袭试验显示,ICAT过表达组迁移和侵袭细胞数明显多于空载腺病毒组和空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论HEC-1A细胞过表达ICAT后,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强,可能与ICAT过表达影响细胞周期及上皮细胞间充质转化有关。     

Wnt信号通路在ALDH1A1影响胃癌细胞生物学行为中作用

目的探讨乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)基因表达对胃癌细胞的生物学行为影响及机制。方法通过脂质体将shRNA-ALDH1A1载体转染到胃癌MKN-45细胞,48 h后,采用RT-PCR及蛋白印迹(WB)法检测转染后MKN-45细胞中ALDH1A1蛋白及mRNA表达;四唑盐(MTT)法检测细胞活力;Transwell法检测胃癌细胞迁移及侵袭能力;WB检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9及Wnt/β-catenin信号通路表达情况。结果shRNA-ALDH1A1转染组M KN-45细胞中ALDH1A1蛋白及mRNA表达量[分别为(0.09±0.01)、(0.08±0.01)]明显低于对照组[分别为(0.89±0.09)、(0.48±0.05)];shRNA-ALDH1A1组M KN-45细胞活力(0.40±0.04)低于对照组(0.73±0.07),细胞迁移、侵袭数目[分别为(39.78±3.24)、(42.53±4.25)个/视野]少于对照组[分别为(98.86±9.03)、(90.52±9.14)个/视野];shRNA-ALDH1A1组MKN-45细胞中MMP2、MMP9、Wnt1、Wnt5a及β-catenin表达水平[分别为(0.10±0.01)、(0.10±0.01)、(0.28±0.03)、(0.12±0.01)、(0.19±0.02)]明显低于对照组[分别为(0.49±0.04)、(0.95±0.09)、(1.29±0.12)、(0.52±0.04)、(0.56±0.05)],差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 ALDH1A1基因沉默可明显降低胃癌细胞MKN-45活力、抑制细胞迁移、侵袭能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Survivin基因调节人脑胶质瘤细胞侵袭与迁移机制的探讨

目的:检测并研究Survivin基因对U251及U87神经胶质瘤细胞侵袭及迁移的影响,为胶质瘤的基因治疗提供理论和实验依据.方法:(1)通过划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞在干扰及过表达Survivin胶质瘤细胞迁移的变化;(2)通过Transwell侵袭实验检测细胞在干扰及过表达Survivin胶质瘤细胞侵袭能力的变化;(3)通过Westernblot和免疫荧光实验检测细胞在干扰Survivin 48h后N-cadherin表达及定位的变化;(4)通过明胶酶谱实验检测在干扰及过表达Survivin 48h后细胞分泌MMP的变化.结果:(1)针对Survivin特异性的三条siRNAoligo,干扰效率达70％-80％;过表达后转染率在80％左右;(2)划痕实验Transwell实验(不铺胶)证实转染siRNAoligo和过表达Survivin后细胞迁移数目明显低于对照组(P＜0.01),Transwell迁移实验证实转染siRNAoligo和过表达Survivin后穿过滤膜的细胞数目明显低于对照组(P＜0.01);(3) Transwell侵袭实验证实转染siRNAoligo和过表达Survivin后细胞侵袭数目明显低于对照组(P＜0.01);(4)明胶酶谱证实转染siRNAoligo后细胞分泌基质金属酶低于对照组,而过表达Survivin后高于对照组;明胶酶谱实验显示:与对照组相比,siRNAoligo组MMP2的活性明显降低(P＜0.05).结论:(1) Survivin基因调节神经胶质瘤细胞的迁移能力;(2) Survivin基因通过调节MMP2的分泌来影响神经胶质瘤细胞的侵袭能力.     

Stathmin对卵巢癌C13K细胞侵袭迁移能力的影响

目的探讨微管调节蛋白Stathmin对卵巢癌C13K细胞侵袭和迁移性的影响及机制研究。方法选择C13K细胞为实验对象,应用siRNA靶向沉默Stathmin,利用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测转染48 h后转染效果,transwell法和细胞划痕实验测定细胞侵袭和迁移能力变化,qRT-PCR检测侵袭相关基因MMP2和MMP9的变化。结果与空白对照组和阴性对照组相比较,Stathmin siRNA明显降低了C13K细胞中Stathmin mRNA的表达量,StathminsiRNA组侵袭的细胞数和细胞损伤愈合的速度明显降低,Stathmin-siRNA组MMP2和MMP9表达量明显降低。结论沉默Stathmin表达能有效抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移能力,其机制可能与抑制MMP2和MMP9的表达有关,为卵巢癌的治疗前景增加新的希望。     

微小RNA-195靶向趋化因子5抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭及其机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-195通过靶向调控趋化因子(CCL)5对胎盘滋养细胞增殖、侵袭的影响及其分子机制。 方法采用随机数字表法,选取2018年8月至2019年8月在徐州市中心医院定期产前检查的70例孕妇,按照是否合并子痫前期(PE),将其分为PE组(n＝40)和对照组(n＝30)。选取2组受试者分娩时自胎盘母-胎界面组织中分离的滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞为研究对象,针对PE组胎盘滋养层细胞分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。根据转染结果,将PE组胎盘滋养层细胞分为miR-195 mimics亚组、miR-NC亚组、miR-195+pcDNA亚组、miR-195+pcDNA-CCL5亚组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测研究组与对照组胎盘组织中miR-195、CCL5 mRNA相对表达水平;MTT实验检测各亚组滋养细胞增殖能力,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察各亚组滋养细胞迁移能力,Western blotting法检测CCL5、PI3K及AKT蛋白相对表达水平;Pearson相关性分析对miR-195及CCL5表达相关性进行分析;荧光素酶实验验证miR-195与CCL5的靶向关系。本研究遵循的程序符合徐州市中心医院伦理委员会规定,通过该伦理委员会审查,并获得批准(审批文号：XZXY-LI-20181215-031)。所有受试者均签署临床研究知情同意书。 结果①PE组和对照组孕妇年龄、孕龄等一般临床资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2组孕妇血压及尿蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②PE组患者胎盘组织中miR-195 mRNA相对表达水平高于对照组(t＝10.932,P<0.001);PE组患者胎盘组织中CCL5 mRNA、蛋白相对表达水平低于对照组(t＝11.125、13.253,P<0.001)。③miR-195 mimics亚组滋养细胞中miR-195相对表达水平高于miR-NC亚组(P<0.001),miR-195 mimics亚组第1、2、3、4天细胞活力低于miR-NC亚组,并且差异均有统计学意义(P<0.05)。④细胞培养72 h后,miR-195 mimics亚组侵袭细胞数、细胞迁移率均低于miR-NC亚组,并且差异均有统计学意义(t＝11.327,18.357,P<0.001)。⑤miR-195 mimics亚组细胞CCL5蛋白相对表达水平低于miR-NC亚组(P<0.001);miR-195 mRNA水平与CCL5蛋白相对表达水平呈负相关关系(r＝-0.326,P<0.001)。⑥miR-195 mimics亚组细胞中PI3K和AKT蛋白相对表达水平低于miR-NC亚组;miR-195+pcDNA-CCL5亚组细胞中PI3K和AKT蛋白相对表达水平均高于miR-195+pcDNA亚组,并且差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论miR-195可能通过抑制CCL5的表达,进而抑制其下游PI3K/AKT信号通路的活化,最终影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,从而导致PE的发生。     

血管生成素-1对人绒毛膜外滋养细胞基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9表达的调控作用

目的分析血管生成素-1(Ang-1)对人绒毛膜外滋养细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的调控作用。方法将体外培养的人绒毛膜外滋养细胞株HTR8/SVneo分为空白对照组(未转染)、NC-siRNA组(转染阴性对照siRNA)及Ang-1-siRNA组(转染Ang-1 siRNA)。采用实时定量PCR法检测3组细胞中Ang-1 mRNA的表达,采用Western blot法检测Ang-1、MMP-2及MMP-9蛋白的表达,采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果转染48 h后,空白对照组Ang-1 mRNA表达水平为(1.36±0.04),NC-siRNA组Ang-1 mRNA表达水平为(0.98±0.07),Ang-1-siRNA组Ang-1 mRNA表达水平为(0.24±0.02),3组比较差异有统计学意义(F=257.128,P<0.001)。空白对照组Ang-1蛋白水平为(0.54±0.03),NC-siRNA组Ang-1蛋白水平为(0.49±0.07),Ang-1-siRNA组Ang-1蛋白水平为(0.12±0.06),3组比较差异有统计学意义(F=84.326,P<0.001)。转染48 h后,空白对照组MMP-2蛋白表达水平为(0.78±0.03),NC-siRNA组MMP-2蛋白表达水平为(0.71±0.04),Ang-1-siRNA组MMP-2蛋白表达水平为(0.39±0.02),3组比较差异有统计学意义(F=89.532,P<0.001)。空白对照组MMP-9蛋白表达水平为(0.86±0.06),NC-siRNA组MMP-9蛋白表达水平为(0.83±0.04),Ang-1-siRNA组MMP-9蛋白表达水平为(0.41±0.02),3组比较差异有统计学意义(F=121.327,P<0.001)。空白对照组、NC-siRNA组及Ang-1-siRNA组穿膜细胞数分别为(69.43±5.67)个、(65.83±5.78)个及(25.89±5.38)个,3组比较差异有统计学意义(F=85.609,P<0.001)。结论Ang-1在子宫螺旋动脉重铸过程中发挥着重要作用,Ang-1可能通过上调MMP-2和MMP-9的表达,促进绒毛膜外滋养细胞的侵袭。     

RNA干扰STIM1基因表达抑制宫颈癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的机制研究

目的探讨抑制宫颈癌基质相互作用蛋白分子1(STIM1)基因表达对癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人宫颈鳞癌siha细胞分为空白对照组、阴性对照组和STIM1-siRNA组,通过RT-PCR及WesteRnbloting检测STIM1的siRNA转染细胞48h的效果;CCK8法于转染的24h、48h和72h检测各组细胞的活力;TRanswell小室检测转染48h的各组细胞的侵袭能力;WesteRnbloting检测增殖蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、侵袭蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及Wnt/β-catenin信号通路的β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc的蛋白表达。结果TIM1-siRNA组STIM1的mRNA及蛋白相对表达量均显著低于空白对照组(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组间STIM1的mRNA及蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);STIM1-siRNA转染细胞24h的细胞活力无明显变化,转染48h和72h后的细胞活力均显著低于空白对照组(P<0.05);与空白对照组比较,STIM1-siRNA组细胞侵袭能力显著降低,PCNA、MMP-2、β-catenin、c-myc的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论抑制宫颈癌细胞STIM1基因表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低癌细胞的增殖及侵袭能力。     

三重基序-44蛋白联合超声检查预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移研究

目的:探讨三重基序-44(TRIM44)蛋白联合超声检查对乳头状甲状腺癌(PTC)中淋巴结转移(LNM)促进癌细胞的迁移和侵袭的鉴别诊断价值,评估TRIM44蛋白在PTC细胞中的生物学功能。方法:选择在医院就诊且行甲状腺手术的72例PTC患者,将发生LNM的患者纳入LNM组(37例),未发生LNM的患者纳入非LNM组(35例)。应用免疫组织化学方法检测PTC样本中TRIM44蛋白的表达。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析TRIM44蛋白联合超声检查PTC患者LNM的诊断效能。另采用甲状腺癌细胞(KTC-1)通过小干扰RNA(siRNA)技术来敲低TRIM44蛋白表达。KTC-1细胞分为阴性对照(si-NC)组及针对TRIM44蛋白的小干扰RNA组(si-TRIM44),用Lipofectamine2000转染试剂进行转染,将si-NC和si-TRIM44分别转染入相应组中,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)计算细胞的存活率,采用流式细胞术分析细胞周期和Transwell侵袭实验法进行KTC-1细胞迁移和侵袭测定。采用单因素回归分析PTC患者LNM的诊断因素。结果:LNM组TRIM44蛋白高表达率(83.8%,31/37)与非LNM组(17.1%,6/35)相比,显著增加(χ²=10.930,P<0.05)。LNM组和非LNM组的TRIM44蛋白染色评分分别为(5.50±3.26)分和(2.43±1.64)分,差异有统计学意义(t=4.012,P<0.05)。单因素Logistic回归分析中,TRIM44蛋白高表达是PTC患者LNM的一个独立的诊断因素(OR=1.042,P<0.001)。超声联合TRIM44蛋白对LNM的诊断价值最高,ROC曲线下面积(AUC)为0.874,95%CI为0.671~0.907,灵敏度为91.89%,特异度为82.85%,准确率为87.50%。TRIM44的小干扰RNA(si-TRIM44)表达下调与阴性空白对照(si-NC)相比,显著降低了KTC-1细胞增值能力以及迁移和侵袭细胞的数量,差异有统计学意义(t=1.561,t=0.447,t=0.896;P<0.05)。在细胞周期分析中si-TRIM44的G1期的细胞比例高于si-NC,而S和G2/M期则较低,差异有统计学意义(t=0.994,t=2.339,t=1.774;P<0.05)。结论:当超声联合检测TRIM44蛋白时,超声检查对区分有无LNM的PTC的诊断价值极大提高。TRIM44蛋白可促进PTC的迁移和侵袭,是有价值的辅助诊断生物标志物,并可联合超声检查用于预测PTC中的LNM。     

siRNA靶向干扰PTPRO对结直肠癌HCT116细胞增殖与侵袭影响

目的结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,近年来结直肠癌发病率上升趋势,已仅次于肺癌。本研究通过应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术,靶向干扰膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(protein tyrosine phosphatase-receptor-type O,PTPRO),观察其对结直肠癌HCT116细胞增殖、侵袭的影响。方法培养结直肠癌HCT116细胞,随机分为实验组、阴性对照组、空白组,利用脂质体2000将PTPRO-siRNA体外转染至实验组细胞内、将无关序列NC-siRNA体外转染至阴性对照组细胞内,空白组不予转染。转染48h后,利用荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测各组PTPRO的mRNA和蛋白表达情况;另取细胞,同法分组、转染,采用CCK-8法、Transwell小室细胞侵袭实验检测细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果实验组、阴性对照组和空白组PTPRO mRNA的相对表达量分别为(0.112±0.031)、(0.776±0.077)和(0.972±0.074),差异有统计学意义,F=247.344,P0.001。实验组、阴性对照组和空白组PTPRO的相对表达量分别为(0.150±0.045)、(0.366±0.050)和(0.434±0.049),差异有统计学意义,F=47.391,P0.001。各组细胞增殖能力随着转染时间的延长逐渐提高,且实验组转染细胞增殖能力均高于同期阴性对照组及空白组,均P0.05。实验组穿膜细胞数(104.400±9.978)显著高于阴性对照组的(63.300±6.513)及空白组的(62.100±7.317),差异有统计学意义,F=266.970,P0.001。结论 siRNA靶向干扰PTPRO对结直肠癌HCT116细胞增殖及侵袭有促进作用,PTPRO可能是结直肠癌的抑癌因子之一,具有抑制肿瘤生长、侵袭的作用。     

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的：探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法：在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果：与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细...     

polyI:C诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染的体外研究

目的:探讨体外polyI:C对人胎盘滋养层细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用。方法:将2μg或8μg HBV重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染人胎盘滋养层细胞Bewo,12 h后以Toll样受体3(TLR3)配体polyI:C处理3天,同时设对照组。采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测细胞上清液HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,并以荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN-β水平。结果:与对照组比较,polyI:C均可显著抑制Bewo细胞HBV复制(P<0.01或0.05),但与2μg HBV重组质粒转染组比较,转染8μg HBV重组质粒组polyI:C对HBV复制的抑制率显著下降(P<0.01),且polyI:C诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达及IFN-β水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:polyI:C可诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染,但随着HBV感染量的增大,通过下调细胞TLR3 mR-NA表达及IFN-β产生,其抗HBV感染的作用被显著削弱。     

shRNA-聚束蛋白基因对人结肠癌细胞SW-480侵袭和凋亡影响的实验研究

目的探究shRNA-Fascin基因对人结肠癌细胞SW-480侵袭和凋亡影响。方法利用慢病毒转染技术,构建Fascin的shRNA干扰表达载体,RT-qPCR和Western blot等方法检测Fascin基因和凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。Transwell试剂盒检测人结肠癌细胞的侵袭,以及AV-PI试剂盒检测人结肠癌细胞的凋亡。结果shRNA-Fascin载体慢病毒转染效率为95%以上。实验组SW-480中Caspase-3和Caspase-9的mRNA的相对表达量明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组SW-480中Caspase-3和Caspase-9的蛋白相对表达水平明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组SW-480细胞侵袭能力明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组SW-480细胞的凋亡率明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论shRNA-Fascin可以明显的抑制人结肠癌细胞SW-480的侵袭,促进人结肠癌细胞SW-480的凋亡。     

RNA干扰对卵巢癌细胞mTOR表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人卵巢癌细胞SKOV3中mTOR的表达及对细胞增殖与凋亡的影响。方法:培养SKOV3细胞系,设计合成mTOR siRNA实验分4组:正常培养组:未转染的正常培养SKOV3细胞;空白对照组:转染空脂质体的SKOV3细胞;转染组:转染mTOR siRNA的SKOV3细胞;无义对照组:转染无义siRNA的SKOV3细胞。采用Western blot法检测各组细胞中的mTOR蛋白表达水平;应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:mTOR siRNA转染组SK-OV3细胞mTOR蛋白的表达显著低于各对照组(P<0.05);mTOR siRNA转染组SKOV3细胞增殖低于各对照组(P<0.05);mTOR siRNA转染组细胞凋亡率高于各对照组(P<0.05)。结论:mTOR siRNA对SKOV3细胞中mTOR蛋白的表达有明显的抑制作用,特异性阻断mTOR基因表达可显著抑制SKOV3细胞的增殖并促进其凋亡。     

THSD7A在宫颈癌细胞侵袭、迁移等恶性生物学行为中的研究

目的 为了探索THSD7A对宫颈癌细胞的侵袭、转移以及凋亡等生物学行为的影响。方法 对宫颈癌C33a细胞和SiHa细胞培养及转染siTHSD7A基因,采用Western blotting和RT-qPCR方法在蛋白和基因水平对其验证。后应用Transwell小室实验、流式细胞术检测THSD7A沉默后对两种宫颈癌细胞的侵袭、转移、细胞周期及凋亡的改变。结果 与空白组和阴性对照组相比,沉默THSD7A的表达后,宫颈癌C33a细胞和SiHa细胞的侵袭、迁移能力明显下降（P＜0.01）;进入S期和G2/M期细胞数目减少,凋亡比例增高（P＜0.05）。结论 提示THSD7A可能作为一种致癌基因,在宫颈癌恶性生物学行为的发展过程中起到推进作用。     

脂多糖经MyD88/NF-κB信号途径抑制Bewo细胞中乙型肝炎病毒复制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)配体脂多糖(LPS)抑制人滋养层细胞Bewo中乙型肝炎病毒( HBV)复制的作用机制,为防治HBV宫内感染提供依据.方法 首先将2μg 1.3倍HBV全基因重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染Bewo细胞12h后,以TLR4配体LPS处理3d.尔后用LPS处理Bewo细胞,观察IFN-β、TNF-α表达的动力学、NF-κB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷( PDTC)对LPS诱导Bewo细胞产生细胞因子的作用.采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测HBsAg、HBeAg和HBV DNA水平,并以ELISA和RT-PCR分别检测IFN-β、TNF-α水平及TIR结构域的转接蛋白(TRIF)、髓样分化蛋白(MyD88)表达.结果 与对照组比较,LPS可显著抑制Bewo细胞中HBV复制(P＜0.01),且LPS可显著诱导Bewo细胞产生TNF-α(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性.PDTC可抑制LPS诱导细胞产生TNF-α,显著低于对照组(P＜0.01),但对IFN-β无显著作用(P＞0.05).与对照组比较,LPS可诱导HBV重组质粒转染的Bewo细胞表达MyD88(P＜0.01).结论 通过MyD88/NF-κB信号途径诱导Bewo细胞产生TNF-α,TLR4配体LPS可显著抑制HBV复制.     

PM2.5对人绒毛膜外滋养层细胞HTR8-SVneo迁移与侵袭力的影响及机制研究

目的：探讨PM2.5对人绒毛膜外滋养细胞HTR8-SVneo存活率以及迁移与侵袭能力的影响,寻找PM2.5致不良妊娠结局可能的机制。方法：不同浓度PM2.5染毒HTR8-SVneo细胞建立实验模型,CCK8（Cell Counting Kit-8）法分析细胞增殖情况,最终选取0、30、60、120和200 μg/mL 5个浓度进行后续实验,其中以0 μg/mL染毒组为对照组。激光全息细胞分析及成像系统分析细胞迁移力;Transwell侵袭实验分析细胞侵袭力;qPCR和Western Blot分别检测基质金属蛋白酶2（MMP2）、MMP9及其组织抑制剂TIMP1、TIMP2的mRNA和蛋白表达水平;明胶酶谱法检测细胞分泌的明胶酶MMP2和MMP9活性。结果：PM2.5对HTR8-SVneo细胞增殖有显著抑制作用（P＜0.05）;PM2.5使HTR8-SVneo细胞迁移距离和穿膜细胞数均减少（P＜0.05）;qPCR和Western Blot结果显示,PM2.5使HTR8-SVneo细胞MMP2、MMP9、TIMP1及TIMP2的mRNA及蛋白表达水平升高（Ｐ＜0.0５）, 且MMPs升高程度低于TIMPs;明胶酶谱结果显示,HTR8-SVneo细胞MMP9活性在30、60、120和200 μg/mL染毒组均升高（P＜0.05）。结论：PM2.5在造成HTR8-SVneo细胞损伤的同时,可能通过打破MMPs/TIMPs的动态平衡影响人绒毛膜外滋养细胞HTR8-SVneo的迁移与侵袭力,从而造成不良妊娠结局,而具体信号机制有待深入研究。     

桦褐孔菌水提物通过caspase 3介导细胞凋亡对口腔鳞癌抑制作用的研究

目的 探讨桦褐孔菌水提物对口腔鳞癌SCC - 25细胞的抑制作用及其相关机制。方法 使用水提醇沉方法获得桦褐孔菌水提物,并以不同浓度加至SCC - 25细胞,根据对细胞增殖和凋亡的作用选择合适剂量用于后续实验。将SCC - 25细胞分为空白组、caspase 3抑制剂组、si - NC组和si - caspase 3组,分别加入caspase 3抑制剂或通过脂质体转染法将siRNA转染入细胞。采用CCK8法和集落形成实验检测桦褐孔菌水提物对SCC - 25细胞增殖能力的影响,通过流式细胞术和彗星实验检测细胞凋亡和DNA损伤情况,使用Western blot检测细胞caspase 3、caspase 7、B细胞淋巴瘤/白血病 - 2（B - cell lymphoma / leukemia 2,bcl - 2）蛋白表达情况。实验结果按t检验和one - way ANOVA统计分析。结果 桦褐孔菌水提物呈剂量依赖性提高caspase 3蛋白表达,诱导细胞DNA损伤,促进细胞凋亡并抑制SCC - 25细胞增殖（P＜0.05）。在基因水平沉默caspase 3或使用caspase 3抑制剂能够拮抗桦褐孔菌水对SCC - 25细胞的促凋亡和抑制增殖作用（P＜0.05）。结论 桦褐孔菌水提物通过caspase 3介导SCC - 25细胞DNA损伤和细胞凋亡,抑制口腔鳞癌细胞的增殖。     

Smac对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 研究Smac高表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 选择Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-A细胞(低分化腺癌细胞、雌激素受体阴性),应用脂质体法将Smac的过表达质粒pcDNA3.1-Smac转染HEC-1-A细胞,实验分为Smac过表达组、空载体组和空白对照组。应用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Smac mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测过表达Smac对细胞增殖能力的影响。Transwell小室侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移能力的变化。结果 Smac过表达组Smac mRNA及蛋白表达比空载体组和空白对照组明显增加(F=172.065,P=0.001;F=697.953,P=0.001)。过表达Smac后,HEC-1-A细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。侵袭及迁移实验结果显示,与空载体组比较,Smac过表达组穿膜细胞数均明显减少(t=9.082,P=0.016;t=6.241,P=0.013)。结论 过表达Smac可明显抑制HEC-1-A细胞的增殖,并显著减弱细胞的侵袭及迁移能力,Smac可为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。