血人参总黄酮纯化工艺的优化及其对酪氨酸酶的抑制作用研究＊

目的 优化大孔吸附树脂分离纯化血人参总黄酮的工艺条件，研究血人参总黄酮对酪氨酸酶的抑制作用。方法 以吸附率、解吸率等为考察指标，采用静态吸附-解吸试验对6种不同型号的大孔吸附树脂进行筛选，优选最佳的树脂型号。采用单因素试验考察上样液pH、上样液浓度、上样体积、上样体积流量、洗脱溶剂、洗脱液体积流量、洗脱剂体积对血人参总黄酮纯化的影响，确定最佳纯化工艺；以L-酪氨酸、L-多巴为底物，测定血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶的抑制作用，并对其抑制机理和抑制类型进行分析。结果 AB-8型大孔吸附树脂对血人参总黄酮的分离纯化效果最好。最佳纯化工艺参数为：上样液pH为4、上样体积为70 mL（4.7 BV）、上样体积流量为1 mL·min^-1、上样液浓度为5.38 mg·mL^-1、洗脱溶剂为70%乙醇、洗脱剂体积流量为3 mL·min^-1、洗脱剂体积为120 mL（8 BV），血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶均有抑制作用，其最大半数抑制浓度分别为88.78 mg·L^-1和36.46 mg·L^-1，对二酚酶的抑制类型为可逆非竞争性抑制。结论 AB-8型大孔吸附树脂可用于纯化血人参总黄酮，纯化后血人参总黄酮的纯度为46.01%，建立的工艺条件稳定可靠。纯化后的血人参总黄酮对酪氨酸酶有抑制作用，抑制类型为可逆非竞争性抑制。     

葡萄籽原花青素抑制小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的影响

目的:研究葡萄籽原花青素对小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的抑制作用,并对其机理进行初步探究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测小鼠B16黑色素瘤细胞增值率;左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活;Na OH裂解法测定黑色素合成;分别采用RT-PCR法和Western-blotting法检测B16-F0细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达水平。结果:葡萄籽原花青素显著抑制B16黑色素瘤细胞的增殖,且与浓度和作用时间相关;12.5~200μg/ml浓度范围的葡萄籽原花青素显著抑制细胞酪氨酸酶活性及黑色素生成。当葡萄籽原花青素浓度为200μg/ml作用时间为48 h时,对B16-F0细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制效果最佳。此外,与对照组相比,经浓度为100μg/ml和200μg/ml,作用时间为48 h的葡萄籽原花青素处理,B16-F0细胞内TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论:葡萄籽原花青素抑制B16黑色素瘤细胞的增殖及黑色素的合成,其机制可能是通过抑制TYR、TRP-1、TRP-2的表达,进而抑制酪氨酸酶活性实现的。     

驱白艾力勒思亚散对酪氨酸酶激活作用的实验研究

目的:观察驱白艾力勒思亚散提取物对酪氨酸酶活性的作用,并进行其动力学研究,探讨其治疗白癜风的作用机理。方法:分别测定驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶的激活率,Matsuda法测定多巴色素自动氧化生成的黑素量,计算黑素生成上调率,并对酪氨酸酶激活作用进行动力学观察。结果:驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶均有明显的激活作用,其激活作用随着药量的增加而增强,黑素生成的上调率也呈剂量依赖性;动力学研究证实此激活作用显著,且醇提液效果优于水提液。结论:驱白艾力勒思亚散是治疗白癜风的有效药物,激活酪氨酸酶是其作用机制之一。     

四种含药血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响

目的研究传统医学文献中专治白癜风的常用药物诃子、余甘子、柴胡及药群组合(含木香、胡椒、干姜等)的药物血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用"通法"制备上述药物高、低不同剂量的大鼠含药血清及不含药物的空白血清,以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,采用MTT法测定各组受试血清对B16细胞增殖活性的影响;NaOH细胞裂解法测定黑素合成量,L-DOPA氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响。结果与正常对照组(含10%小牛血清)相比,除组合低剂量组外,其他受试血清均不影响小鼠B16细胞的增殖活性(P>0.05);与空白血清组相比,柴胡和药群组的高、低剂量组含药血清均对B16黑素瘤细胞黑素合成有促进作用(P<0.05,P<0.01),而诃子低剂量、牛柑子高剂量组含药血清具有促进黑素合成的作用(P<0.05,P<0.01);与空白血清组相比,四种受试药物的高低剂量组含药血清对小鼠B16细胞酪氨酸酶活性均有激活作用(P<0.05,P<0.01)。结论四种受试药物含药血清除组合低剂量组外,均在不影响小鼠B16细胞增殖活性的基础上,表现出不同程度的促进其黑素合成的作用,此作用与提高酪氨酸酶活性有一定关系。     

调Q1064nm 激光联合皮肤原位再生复原技术治疗小鼠黄褐斑模型的实验研究

目的　探讨调Q1064nm 激光联合皮肤原位再生复原技术对小鼠黄褐斑模型黑素细胞及酪氨酸酶表达的影响。方法　采用紫外线照射联合雌激素注射建立小鼠黄褐斑动物实验模型, 选择调Q1064nm 激光联合皮肤原位再生复原技术治疗, 修复其创面, 利用免疫组化方法分别检测调Q1064nm 激光联合皮肤原位再生复原技术作用前后小鼠皮肤皮损区域黑色素的变化及酪氨酸酶的表达水平, 并与对照组及正常组进行比较。结果　与对照组相比, 激光联合湿润烧伤膏(MEBO) 治疗组皮损区黑色素的表达明显降低(P <0． 05), 酪氨酸酶的表达水平明显下降, 与其他对照组相比, 有显著性差异(P <0． 05)。结论　调Q1064nm 激光干预治疗后, 通过湿润烧伤膏外涂为创面创造一个再生的生理湿润环境, 调节黄褐斑皮损区的局部环境, 减少酪氨酸酶的表达, 使黑色素的生成减少, 从而抑制黄褐斑的产生。     

含己烯雌酚血清对体外培养正常人黑素细胞的作用

目的:观察不同浓度含己烯雌酚(DES)血清对体外培养人黑素细胞的增殖和酪氨酸酶活性的影响。方法:采用MTT法测定黑素细胞增殖情况;参考Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性;NaOH溶解法测定黑素含量。结果:己烯雌酚血清不同剂量对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有促进作用。结论:己烯雌酚能促进体外培养人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性,对相关皮肤色素性疾病可能有一定的治疗作用。     

核因子-κB在非小细胞肺癌表皮生长因子受体-酪氨酸酶抑制剂耐药中的作用和机制

近十年来,全球范围内肺癌的发病率和病死率迅速上升,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占80%~85%。在NSCLC的治疗中,以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为靶点的酪氨酸酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)开创了分子靶向治疗     

普通及合并白癜风的HBV感染者血清抗TRP-1抗体的检测及其临床意义分析

目的 检测普通及合并白癜风的HBV感染者血清抗酪氨酸酶相关蛋白-1自身抗体(autoantibodies to tyrosinaserelated protein-1,a-TRP-1)水平并分析其临床意义.方法 选取白癜风患者126例(其中合并HBV感染8例,合并a-TP0、a-TG阳性34例,其他白癜风病84例);无白癜风病史的普通HBV感染者84例(HbsAg、HbeAg、HbcAb阳性24例,HbsAg、HbeAb、HbcAb阳性60例);乙肝抗体阳性对照者96例(HbsAb、HbeAb、HbcAb阳性48例,HbsAb阳性48例);乙肝五项全阴性的健康对照者96例.用ELISA法和细胞免疫荧光法检测所有标本a-TRP-1表达水平,并对结果进行统计分析.结果 白癜风组a-TRP-1总阳性率为6.3％ (8/126),其中合并HBV感染者、合并a-TPO及a-TG阳性者、其他白癜风患者a-TRP-1浓度为分别为948.2±68.3 U/mL、36.1±0.1U/mL、54.3±12.8U/mL,各组阳性率分别为100％ (8/8)、0％ (0/34)、0％(0/84);健康对照组为46.9±0.1U/mL,阳性率为0％(0/96).白癜风组中合并HBV感染者与健康对照组抗体浓度比较,差异有统计学意义(P＜0.01),而a-TPO、a-TG阳性者、其他白癜风患者与健康对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).普通HBV感染组中,HbsAg、HbeAg、HbcAb阳性者与HbsAg、HbeAb、HbcAb阳性者a-TRP-1浓度分别为868.7±161.4U/mL、756.7±157.5U/mL,阳性率分别为91.7％ (22/24)、85.0％ (51/60),与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);乙肝抗体阳性对照组中HbsAb、HbeAb、HbcAb阳性者与HbsAb阳性者分别为26.8±0.1U/mL、33.3±0.1U/mL,阳性率分别为0％ (0/48)、0％ (0/48),与健康对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).细胞免疫荧光法检测结果显示,ELISA法检测的a-TRP-1抗体阳性血清与黑素细胞培养固定物反应后,在胞浆和胞膜处发出明亮荧光,荧光强度+++～++++,合并a-TPO、a-TG阳性及部分其他白癜风患者血清在胞膜处也有荧光,荧光强度约++,健康对照血清荧光暗淡或无荧光.结论 a-TRP-1抗体的高表达与HBV感染有密切关系,该抗体应该不是大部分白癜风患者具有代表性的血清标志物,在大部分没有白癜风的普通HBV感染者体内也可高水平存在,这可能是该类患者继发白癜风的预兆和重要原因.     

Rescue of the albino phenotype by introducing a functional tyrosinase minigene into Kunming albino mice

AIM To use the tyrosinase minigene as a visual marker to perform microinjection training and improve the techniques related with transgene to greatly elevate the efficiency of gene transfer.METHODS A mouse tyrosinase minigene, i.e., TyBS,in which the 2.25-kb authentic genomic 5' non-coding flanking sequence of mouse tyrosinase was fused to a mouse tyrosinase cDNA, was introduced into the fertilized eggs of outbred Kunming albino mice.RESULTS Of the 11 animals that developed from the injected eggs, two mice (P1 and #8) exhibited pigmented hair (P1) and eyes (P1 and #8), as confirmed by PCR analysis for the tyrosinase minigene integrated into the genome. When founder P1 was bred to Kunming male mouse, six progeny out of 11 offspring inherited the transgene and the pigmented-eye phenotype.CONCLUSION Taken together, these results suggest that this minigene encodes the active tyrosinase protein and that its 5' flanking region contains the sequences regulating the expression of mouse tyrosinase gene as expected. We have rescued the albino phenotype by introduction and expression of a functional tyrosinase minigene in the Kunming albino mouse and the transgene can be passed to subsequent generation.These findings also indicate that TyBS can be a useful visual marker gene in the co-transgenic experiments.