结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展

结核分枝杆菌（MTB）蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白。分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白，游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内，在菌体内仅有微量存在；而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中，在细菌对数生长的晚期细菌死亡后才释放到培养基中。将培养不超过5d的滤液蛋白称为短期培养滤液蛋白，这是记忆性免疫CD4^＋T淋巴细胞的靶分子；将培养7d以上的滤液蛋白称为长期培养滤液蛋白，随着培养时间的延长，滤液中蛋白越来越多，由于部分MTB开始裂解死亡，释放胞质蛋白，培养42d时滤液中已有100多种蛋白质。结核病保护性免疫主要是细胞免疫，诱导细胞免疫反应的抗原主要存在于细胞壁、细胞质和培养滤液中，其中分泌蛋白和细胞壁表面的蛋白是主要的免疫保护性抗原，将成为新疫苗研究的首选靶抗原。现将保护性抗原的编码基因、生物学特性、免疫学功能等介绍如下。     

人型结核杆菌克隆DNA探针的制备及其应用的研究

用限制性内切酶ＰｓｔⅠ消化人型结核杆菌Ｈ３７ＲｖＤＮＡ,与质粒ｐＵＣ１９ ＤＮＡ连接后转化大肠杆菌,经同位素３２Ｐ标记的人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ全染色体ＤＮＡ探针筛选出６个阳性克隆（ＭＴ１￣６）,其中克隆ＤＮＡ片段ＭＴ２（４．２Ｋｂ）、ＭＴ４（３．５Ｋｂ）和ＭＴ５（３．０Ｋｂ）标记成探针,检测了２２种分支杆菌标准株和１５侏人型结核杆菌临床分离侏以及２种非分支杆菌,其杂交结果完全相同,与人型结核杆菌及     

传染性非典型肺炎患者血清干扰素-2α含量测定及评价

目的 观察SARS患者血清干扰素-2α(IFN--2α)含量变化。方法用放射免疫法检测了66例SARS患者血清IFN-2α含量，并与正常对照组作比较。结果SARS组进展期患者IFN-2α含量明显高于对照组，重型SARS患者血清IFN-2α含量要么较高，要么较低。结论患者血清IFN-2α含量变化提示细胞免疫参与了机体的免疫反应，重症SARS患者IFN-2α含量变化反映了患者的免疫机能状况差异。     

耐药脊柱结核的外科治疗

目的:探讨耐药脊柱结核的外科治疗及疗效.方法:对2005年3月至2009年4月收治的60例耐药脊柱结核的临床资料进行回顾性分析,男36例,女24例,年龄5～79岁,平均47.3岁.其中34例患者有神经受损症状,神经功能按ASIA分级标准:A级2例,B级5例,C级13例,D级14例.根据病灶部位及病变程度采用经脊柱前路、肋横突或后路病灶清除、植骨、内固定.并在药敏试验结合耐药基因检测指导下抗结核治疗12～18个月.观察患者复发、神经功能恢复、植骨融合情况.结果:所有患者均获得随访,时间1～5年,平均3.1年.2例术后复发,经再次手术治愈.神经功能受损的34例,术后改善或完全恢复.X线或CT检查提示57例患者植骨融合.结论:对耐药脊柱结核,药敏试验结合耐药基因检测指导下抗结核治疗,个体化术式选择,有较好的临床疗效.     

分子诊断技术在分支杆菌菌种鉴定中的应用价值

在微生物分类中 ,分支杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分支杆菌科、分支杆菌属。分支杆菌种类繁多 ,《伯杰系统细菌学手册》(第九版 )所确认的分支杆菌有 5 4种 ,临床可见能引起人类疾病的主要是结核分支杆菌 (ＭＴＢ) ,此外还有堪萨斯、鸟、胞内、猿猴、蟾蜍、海、溃疡、瘰疬、马尔摩、苏加、偶然、龟、脓肿等 10余种非结核分支杆菌 (ＮＴＭ)。ＮＴＭ病具有与结核病临床表现相似的全身中毒症状和局部损害 ,在无菌种鉴定结果的情况下 ,与结核病难以鉴别。ＮＴＭ与ＭＴＢ药物敏感性大不相同 ,许多ＮＴＭ对抗结核药物天然耐药 ,不同ＮＴＭ菌种对…     

结核分枝杆菌16KD重组蛋白的纯化及血清学诊断应用价值的研究

目的：纯化获得结核分枝杆菌重组16KD蛋白，并评价其在血清学诊断方面的应用价值。方法：应用亲和层析方法纯化结核分枝杆菌重组16KD蛋白，应用ELISA方法检测220例血清中的抗结核抗体。结果：结核分枝杆菌重组16KD蛋白以包涵体形式表达，以48名正常人血清0D492＋2S为正常限值，57例PPD阳性血清，47例菌阳结核患者血清和68例菌阴结核患者血清阳性检出率分别为19．30％、93．62％和82．35％。结论：结核分枝杆菌16KD重组蛋白以包涵体形式高效表达，具有较强的抗原特异性和免疫反应性。     

ahpC基因突变与结核分支杆菌耐异烟肼的研究

目的了解我国结核分支杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ａｈｐＣ编码基因及其启动子突变情况，研究其与ＩＮＨ耐药关系。方法通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）单链构象多态性（ＳＳＣＰ）方法分析６２株结核分支杆菌临床分离株ａｈｐＣ及其启动子基因。以Ｈ３７ＲＶ标准株为对照。结果３２株结核分支杆菌药物敏感株ａｈｐＣ及其启动子基因ＳＳＣＰ均泳动正常；３０株耐ＩＮＨ分离株ａｈｐＣ编码基因ＳＳＣＰ也未见异常；１２株高度耐ＩＮＨ分离株中，５株ａｈｐＣ启动子ＳＳＣＰ泳动异常；１８株低度耐ＩＮＨ分离株的ａｈｐＣ启动子泳动正常。结论结核分支杆菌ａｈｐＣ编码基因与耐ＩＮＨ无关；ａｈｐＣ启动子突变是结核分支杆菌ｋａｔＧ改变、过氧化氢酶缺乏的代偿性变化，也许能作为结核分支杆菌高度耐ＩＮＨ的间接指标。     

用DNA芯片检测结核分枝杆菌耐利福平基因突变的初步研究

目的研制一种新型DNA芯片，用于快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计探针并制作DNA芯片，PCR掺入法荧光标记根据结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断，与DNA芯片杂交，同时以DNA测序法为对照。结果18株结核分枝杆菌临床分离株中，1株敏感株DNA芯片杂交结果与标准株完全相同；17株耐RFP临床分离株中有17株检测到rpoB基因突变，其中14株单位点突变，1株511和516位双位点突变，与测序结果完全一致。另有两株为517和518、526和517位双位点突变，因为芯片上未点517位突变的探针，所以只检测到518和526位的突变，该突变与测序结果完全一致、结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变，可用于临床耐药性的检测，指导临床用药。     

应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变

目的应用聚合酶链反应(PCR)-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变，建立一种新的分子药敏试验方法。方法以传统药敏试验、PCR-单链构象多态性和PCR-直接测序方法为对照，对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、ITS和embB的寡核苷酸探针，通过反向斑点杂交检测78株结核菌临床分离株PCR产物。结果18株结核菌药物敏感株的4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中，59株为耐RFP株，rpoB基因突变率为93．2％，最常见的突变位点为531位和526位密码子，33株为耐SM株，rpsL基因突变率为75．8％，均为43位密码子AAD AGG突变，ITS基因突变率为9．1％，均为513位A→C突变，rpsL和ITS基因总突变率为84．8％；43株为耐EMB株，embB基因突变率为58．1％，均为306位密码子突变。结论应用PCR一寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变，检测其耐药性。     

应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌

目的：建立双重ＰＣＲ技术快速鉴定的结核与非结核分支杆菌。方法：通过试验选择双重ＰＣＲ最佳反应条件,检测引物Ａ１,Ａ２和Ｂ１,Ｂ２扩增分支杆菌的特异性及扩增结核分支杆菌的敏感性,并对３４例结核分支杆菌和非结核分支杆菌临床分离株鉴定。结果：引物Ａ１,Ａ２能扩增所试２４种分支杆菌,Ｂ１,Ｂ２仅扩增结核分支杆菌复合体菌种,两对引物扩增１２种非分支杆菌均为阴性。