全反式维甲酸下调慢性阻塞性肺病患者NGAL、MMP-9/TIMP-1比率的研究

目的探讨慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血中性粒细胞(PMN)中NGAL活性和血浆中MMP-9、TIMP-1与COPD病变的关系及体外ATRA干预后NGAL、MMP-9和TIMP-1的变化,以揭示ATRA逆转的作用机制。方法以30例COPD患者为实验组,20例发作期哮喘为阳性对照组,20例健康成年人为健康对照组,均进行肺功能检查,RT-PCR测定COPD组及哮喘组和健康对照组PMN中NGALmRNA的表达强度,ELISA测定其血浆MMP-9和TIMP-1的表达水平。COPD组PMN分为ATRA组和未干预对照组,RT-PCR测定细胞沉淀中NGALmRNA的表达强度,ELISA测定上清液中MMP-9和TIMP-1的表达水平。结果COPD组和哮喘组血浆中MMP-9、NGAL水平和MMP-9/TIMP-1比例显著高于未干预对照组(P<0.05);TIMP-1水平显著低于未干预对照组(P<0.05)。COPD组与哮喘组间有统计学意义(P<0.05)。COPD组患者肺功能与MMP-9和NGAL成负相关,与TIMP-1成正相关。ATRA干预后,COPD患者中MMP-9、NGAL水平较前下降,TIMP-1较前上升,MMP-9/TIMP-1比例降低。结论COPD组NGAL、MMP-9和MMP-9/TIMP-1摩尔比例升高,TIMP-1降低;可作为COPD患者PMN活性的诊断依据。ATRA通过下调MMP-9、NGAL,上调TIMP-1的表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,可能对肺气肿的治疗提供新的途径。     

胸腺肽对46例大肠癌患者术后早期免疫状态的影响

在肿瘤的发生、发展过程中,机体的免疫系统始终处于功能低下状态,加之手术时对肿瘤的触摸、牵拉、挤压可促进肿瘤细胞的转移和创面的污染.因此术后早期机体更需要处于良好的免疫监视状态.我们对围手术期应用胸腺肽的46例大肠癌患者T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞(NKC)活性及可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)进行测定,现报告如下.     

RAIL泰素帝协同诱导人肺腺癌细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL）和化疗药物泰素帝（TXT）联合应用对体外培养人肺腺癌A549细胞的凋亡诱导作用,并初步探讨其作用机制。方法：通过形态学观察和MTT比色法检测TRAIL、TXT及二者联合应用对A549细胞的形态学影响和细胞增殖的抑制作用； Annexin Ⅴ FITC/PI染色，流式细胞术检测A549细胞的凋亡率；半定量RT PCR检测TXT对A549细胞死亡受体DR4、DR5基因表达的影响。结果：①TXT对A549细胞的生长有明显的抑制作用，且呈显著的剂量依赖性，IC50为62.1?ng/ml；而A549对TRAIL不敏感，100?ng/ml的抑制率仅为（6.84±1.14）%，1600?ng/ml的抑制率为（26.10±4.02）%。4?ng/ml TXT与100?ng/ml TRAIL联合应用有显著的协同抑制作用（P＜0.05），抑制率为（19.98±4.15）%；②100?ng/ml TRAIL、4?ng/ml TXT单独作用A549细胞24?h的凋亡率为4.44%和12.26%。100?ng/ml TRAIL与4?ng/ml TXT联合作用A549细胞24?h的凋亡率为16.84%；③4?ng/ml TXT作用前后，死亡受体DR4、DR5mRNA表达水平无明显改变。结论：人肺腺癌细胞A549对TRAIL不敏感，但TRAIL与TXT联合有显著的协同诱导细胞凋亡作用，这种协同作用机制与DR4、DR5的表达无关。     

氧分压变化对NK92细胞生存及黏附性的影响

目的探讨体外培养环境中氧分压变化对NK92细胞迁移特性及相关基因表达的影响。方法将NK92细胞株分别置于1%、5%、10%、15%及21%氧,5%CO2环境下培养6小时;采用流式细胞技术检测细胞活力,甲苯胺蓝法检测黏附能力;RT-PCR半定量技术检测迁移相关基因的表达。结果不同氧分压条件下NK92细胞活率无显著区别;1%、5%、10%氧压下NK92细胞黏附促进率显著高于15%及21%氧压组（P〈0.05）;10%氧压下NK92细胞CCR1、5、6、7及CXCR4 mRNA的水平显著高于常氧（21%O2）对照组（P〈0.05）;低氧（1%O2）显著下调NK92细胞CCR5、7、CX3CR1及CXCR4基因的表达,上调HIF-1α及CCR1基因的表达。结论体外培养环境中氧分压变化能影响NK92细胞黏附性及相关基因表达的变化,但不影响其生存;NK92细胞低氧环境下生存可能与HIF-1α及CCR1基因表达上调有关。体外细胞功能及药物效应的研究不仅要考虑模拟体内的CO浓度,还应考虑氧环境因素对细胞的影响。     

益气养阴方及其拆方影响急性髓细胞白血病细胞Flt3和N-ras表达研究

目的研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对Flt3和N-ras在人急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的作用机制。方法收集60例AML患者骨髓单个核细胞,将所提取每例患者的细胞混悬液分成4组:对照组不加药物,实验组分别加入益气养阴方、扶正方、祛邪方中药制剂。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫印迹法(Western bloting)观察益气养阴组、扶正组、祛邪组及对照组对Flt3、N-ras基因及FLT3蛋白表达的影响。结果 RT-PCR法检测:对照组、益气养阴组、扶正组、祛邪组Flt3基因表达率分别为(90.78±6.92)%、(38.18±4.50)%、(65.57±5.55)%、(61.35±6.39)%,N-ras基因表达率分别为(93.28±5.54)%、(34.38±6.69)%、(59.42±7.35)%、(65.28±7.64)%,益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Westernbloting检测:对照组、益气养阴组、扶正组、祛邪组FLT3蛋白灰度值分别为0.8127±0.0284、0.4265±0.0353、0.5396±0.0274、0.5473±0.0282,对照组与益气养阴组、扶正组、祛邪组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论中药益气养阴方可抑制AML细胞的克隆性增殖,可降低Flt3和N-ras在AML细胞的表达水平,对AML治疗具有作用。     

化疗药物对人肺腺癌细胞死亡受体DR4与DR5表达影响的研究

目的:研究化疗药物依托泊苷(Vp16)、顺铂(DDP)、多西他赛(TXT)对A549细胞死亡受体( death receptor, DR) DR4DR5基因表达的影响。方法:采用逆转录聚合酶链反应(PT PCR)方法对亚毒性剂量Vp 16 、DDP和TXT作用不同时间后的人肺腺癌细胞株A549 细胞的死亡受体DR4、DR5 的mRNA表达进行半定量检测。结果:1)亚毒性剂量Vp 16 可上调A549 细胞DR4、DR5 基因表达。7 5μg/mL Vp 16 处理A549 细胞8 h后, DR4/βactin、DR5/βactin 的比值分别为1. 13±0. 13 和1 .06±0. 25。7 5μg/mL Vp 16处理A549细胞12 h后,DR4/βactin、DR5/βac tin的比值分别为1 .18±0 .20和1.02±0. 02,两者与对照组之间比较,差异均有统计学意义,P<0 .05(P值分别为0 .04、0 02、0. 00和0 .02)2)亚毒性剂量DDP和TXT对A549细胞DR4DR5基因转录水平无明显影响。5μg/mLDDP、0 005μmol/L TXT (约为4 ng/mL) 作用A549细胞4、8 h后DR4、DR5基因转录水平与对照组之间比较,差异无统计学意义,P>0 .05结论:药物干预对TRAIL凋亡通路以及耐药机制的影响存在多样性。部分化疗药物可上调肿瘤细胞死亡受体DR4、DR5基因表达,同时不排除其他作用机制的存在。     

RT-PCR法检测白血病干细胞Flt3和N-ras基因的表达

目的：采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测益气养阴方及其拆方后的扶正方组、祛邪方组急性白血病干细胞Fh3和N-ras基因的表达,以期阐明Flt3和N-ras基因表达与疾病发生、发展的关系。方法：RT-PCR法检测中药益气养阴方组、扶正方组、祛邪方组及对照组AML患者骨髓单个核细胞Fh3和N-ras基因表达的情况。结果：Fh3和N-ras基因表达阳性率益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异有显著性意义（P均〈0．01）;益气养阴组与扶正组和祛邪组比较,差异有显著性意义（P均〈0．01）;扶正组与祛邪组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）;各FAB亚型AML间Fh3与N-ras表达阳性率比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：中药益气养阴方可降低Flt3和N-ras基因在AML细胞的表达水平,抑制AML细胞的克隆性增殖,对AML具有治疗作用。     

中药复方对急性髓细胞性白血病干细胞Flt3和N-ras基因表达的影响

背景：在白血病患者体内存在一群白血病干细胞,这些恶性干细胞是白血病细胞存在和不断增殖的根源,针对干预白血病干细胞的特异性靶向治疗药物已成为近年来研究热点。 目的：探讨中药复方对急性髓细胞性白血病干细胞Flt3和N-ras基因表达的影响。 设计、时间及地点：随机区组实验,于2007-09/2008-12在山东中医药大学附属医院完成。 对象：2006-2007年山东中医药大学附属医院、山东大学齐鲁医院血液科就诊的急性髓细胞性白血病初治患者50例,FAB分型M1 5例,M2 15例,M4 9例,M5 21例。 方法：原方：黄芪、白花蛇舌草、小蓟、太子参、半枝莲、蒲公英、生地、黄精、女贞子、旱莲草、天冬、麦冬、白术、茯苓、甘草。扶正方：黄芪、太子参、生地、黄精、女贞子、天冬、麦冬、白术、茯苓、甘草。祛邪方：白花蛇舌草、小蓟、半枝莲、蒲公英、旱莲草。制剂：上述3组组方药物由山东中医药大学附属医院中药制剂实验室(国家三级重要制剂实验室)配制成1 g/mL的药液,无菌试验阴性后过滤除菌备用。常规无菌采集急性髓细胞性白血病M1,M2,M4,M5型患者骨髓各5 mL,稀释后加入淋巴细胞分离液,联合应用免疫磁珠分选系统和流式细胞仪分离纯化白血病干细胞。调整细胞浓度至2×108 L-1,均分成4组：对照组不加药物,实验组分别加入原方、扶正方、祛邪方的对应中药制剂,终浓度为100 mg/L,继续培养48 h后进行指标检测。 主要观察指标：RT-PCR法检测Flt3、N-ras基因的表达。 结果：与对照组比较,原方组、扶正方组、祛邪方组Flt3表达阳性率均明显降低(P < 0.05),但原方组降低幅度明显大于扶正方组、祛邪方组(P < 0.05);扶正方组与祛邪方组Flt3表达阳性率比较无明显差异(P > 0.05)。4组N-ras表达阳性率与Flt3表达情况基本一致。 结论：Flt3和N-ras基因在白血病干细胞中存在过度表达,中药原方及其拆方后的扶正方、祛邪方均能够降低白血病干细胞中Flt3和N-ras基因的表达水平。     

胸腺肽在46例大肠癌患者术后早期免疫状态的影响

在肿瘤的发生、发展过程中 ,机体的免疫系统始终处于功能低下状态 ,加之手术时对肿瘤的触摸、牵拉、挤压可促进肿瘤细胞的转移和创面的污染。因此术后早期机体更需要处于良好的免疫监视状态。我们对围手术期应用胸腺肽的46例大肠癌患者Ｔ淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞 (ＮＫＣ)活性及可溶性白细胞介素 2受体 (ｓＩＬ 2Ｒ)进行测定 ,现报告如下。临床资料1.一般资料 :本组大肠癌患者 46例 ,年龄 38～ 76岁。所有病例均经病理学检查证实。围手术期输异体血者不作为选择对象。Ｄｕｋｅｓ临床病理分期 :Ｂ期 2 0例 ,Ｃ期 2 6例 ,所有患者均行根治…