补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响

目的:探讨补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响及机理。方法:以培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)或在试验体系中加入灌服补肾宁心方的兔血清,以孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定人单核细胞系U937与HUVECs的粘附,并用流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)以及E-选择素的表达。结果:ox-LDL显著增强单核U937细胞与内皮细胞之间的相互粘附,如在试验体系中加入灌服补肾宁心方的动物血清,则粘附率明显降低(P＜0.01)。流式细胞仪分析结果显示ox-LDL能明显促进内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达,补肾宁心方中药灌服血清可显著下调内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达(P＜0.01)。结论:补肾宁心方含药血清可能通过下调内皮细胞表面粘附分子的表达抑制单核-血管内皮细胞粘附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

过继转输胚胎抗原耐受T细胞诱导自然流产孕鼠母胎免疫耐受

探讨过继转输胚胎抗原耐受T细胞对小鼠自然流产模型妊娠预后及宿主孕鼠免疫细胞对父系抗原免疫耐受状态的影响。以CBA/J×BALB/c为正常妊娠模型 ,CBA/J×DBA/ 2为自然流产模型 ,将自然流产模型CBA/J孕鼠于孕 4d (着床期 )分别腹腔注射大鼠抗小鼠CD80和CD86mAb或大鼠同型IgG。于孕 9d ,应用免疫磁珠阴性分选三组孕鼠的脾脏T细胞 ,并将三组T细胞分别转输至孕 4d的CBA/J×DBA/ 2孕鼠。于宿主孕鼠孕第 9天 ,采用单向混合淋巴细胞反应分析宿主孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力 ,并用流式细胞术分析经父系抗原刺激的宿主孕鼠脾脏T细胞内IL 2表达水平。于孕 1 4d分别观察宿主孕鼠的胚胎吸收率。结果显示 ,过继转输胚胎抗原耐受T细胞和转输正常妊娠模型孕鼠的T细胞均可诱导宿主孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及IL 2的表达显著下降 (P <0 0 5 ) ,孕 1 4d胚胎吸收率也显著下降 (P <0 0 5 )。这些结果表明 ,于孕早期过继转输胚胎抗原耐受T细胞和转输正常妊娠模型孕鼠的T细胞能诱导宿主孕鼠母 胎免疫耐受 ,防止母体对胚胎的免疫排斥 ,从而使自然流产模型的妊娠预后达到正常妊娠水平。     

hCGβ-C3d3基因免疫BALB/c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hCG-βC3d3和pCMV4-hCGβ免疫BALB/c小鼠,免疫剂量为50 pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周,MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖;ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hCGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周,hCG-βC3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组;而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hCG-βC3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。     

人早孕蜕膜基质细胞及免疫活性细胞趋化因子受体CXCR6的表达

目的分析人早孕期蜕膜基质细胞趋化因子配基受体对CXCL16/CXCR6的表达及免疫活性细胞趋化因子受体CXCR6的表达,以探讨CXCL16/CXCR6在蜕膜免疫活性细胞募集中的可能规律.方法收集早孕期蜕膜组织,分离蜕膜基质细胞和免疫细胞,分别采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术分析蜕膜基质细胞CXCL16和CXCR6的表达;流式细胞术分析蜕膜CD56^＋CD16^-NK细胞、CD56^＋CD16^＋NK细胞、NKT细胞、T细胞、γδT细胞、单核细胞CXCR6的表达.结果人早孕蜕膜基质细胞高水平转录趋化因子受体CXCR6,低水平转录其配体CXCL16,但CXCL16和CXCR6在蛋白水平的表达偏低.早孕蜕膜γδT细胞CXCR6阳性率为87.29%;CD14^＋单核细胞CXCR6阳性率为47.71%;NKT细胞CXCR6阳性率为44.14%;T细胞CXCR6表达率为32.91%;而蜕膜两种NK细胞（CD56^＋CD16^-、CD56^＋CD16^＋）几乎不表达CXCR6.结论人γδT细胞、单核细胞、NKT细胞、T细胞可能通过表达趋化因子受体CXCR6被募集到蜕膜局部并驻留,从而参与早孕期母胎界面的免疫调节.     

早孕期外周血及蜕膜淋巴细胞CD28/CTLA-4的表达

目的：探讨人早孕期外周血及蜕膜淋巴细胞协同刺激分子表达水平在母．胎免疫调节中的作用。方法：以15例正常育龄妇女黄体期外周血为对照，应用流式细胞仪分析15例正常人早孕期外周血及蜕膜淋巴细胞CD28和CTLA-4的表达水平。结果：各组淋巴细胞几乎不表达表面CTLA-4分子；而表达细胞内CTLA-4分子（CTLA-4i）。蜕膜组织淋巴细胞CTLA-4i^＋／CD28^＋的比例显著高于早孕期及黄体期外周血。早孕期与黄体期外周CTLA-4i^＋／CD28^＋的百分率比较无显著性差异。结论：母胎界面局部高表达细胞内CTLA-4在母-胎免疫耐受中起重要作用。     

hCGβ-C3d3融合蛋白免疫BALB/c小鼠及其抗血清对hCG诱导鼠子宫增重的抑制效应

目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGb避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGb-C3d3和phCMV1-6His-hCGb,在CHO细胞中获得稳定、高效表达的重组蛋白,并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGb-C3d3融合蛋白和单用hCGb间隔4周两次免疫生育期雌性BALB/c小鼠,ELISA测定血清中抗hCGb抗体滴度,并对各组小鼠产生的抗血清拮抗hCG诱导的小鼠子宫增重效应进行比较。结果:C3d3使hCGb蛋白疫苗的免疫原性增强1 995倍,hCGb-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清具有很强的抑制小鼠子宫增重作用。结论:通过分子佐剂C3d3可以大幅提高机体对hCGb的体液免疫应答能力,hCGb-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清对hCG的生物学作用具有更强的抑制效应。     

免疫性不孕症中西医结合诊疗的思考

<正>据统计,约10%～15%的育龄夫妇患有不孕症,其中约10%的患者原因不明~([1])。对于这部分不孕症的发病病因、发病机制多认为与免疫相关。已有研究表明,免疫性不孕症与多种生殖免疫抗体相关,包括抗精子抗体(As Ab)、抗子宫内膜抗体(EmAb)、抗心磷脂抗体(AcAb)、抗卵巢抗体(AOAb)、抗透明带抗体(ZPAb)、抗绒毛膜促性腺激素抗体(Ah CGAb)等~([2,3])。这些抗体可从各个方面影响生育的多个环节,现分述如下。     

补肾宁心方对小鼠绝经后骨质疏松的选择性作用

目的:探讨补肾宁心方防治绝经后骨质疏松的作用。方法:建立BALB/c小鼠绝经后骨质疏松模型,灌服补肾宁心方浓缩液(简称补肾方),并以17β-雌二醇为阳性对照(简称E2组),以生理盐水为阴性对照(简称模型组)。12周后处死,取血测Th1/Th2型细胞因子;取椎骨(L3-4)和左股骨测骨密度(BMD);取右股骨行骨组织形态计量分析;胫骨提取总RNA,半定量RT-PCR分析护骨素(OPG)的mR-NA表达。计算子宫对体重的比值,并行子宫组织切片观察。结果:补肾方组的IFNγ-水平较模型组明显升高(P<0.01);而IL-4水平低于模型组(P<0.05)。补肾方组与E2组均可改善小鼠的BMD,增加骨小梁面积,使OPG mRNA表达增加。补肾方组的子宫与模型组比较无显著性差异。结论:补肾方能够选择性地防治绝经后骨质疏松,对子宫无或仅有轻微的刺激作用。其机制与调节Th1/Th2的偏离及提高OPG的表达,抑制破骨细胞的活性有关。     

饮食因素在多囊卵巢综合征治疗中的作用

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女常见内分泌疾病之一,多数患者伴有胰岛素抵抗(IR)或高胰岛素血症,即存在着远期并发2型糖尿病的危险。包括合理饮食、适量运动等减轻体质量的方式已成为PCOS患者重要的早期干预措施之一。很多研究发现,碳水化合物、蛋白质和脂类等饮食结构组成对PCOS患者减轻体质量,改善IR或高胰岛素血症有重要影响,认为碳水化合物、蛋白质和脂类的能量比例为4:3:3,血糖指数(GI)较低及富含多不饱和脂肪酸(PUFAs)的饮食结构更适宜PCOS患者减轻体质量,降低2型糖尿病的发病风险,为探讨饮食结构在PCOS发病机制中的作用提供了一定依据。     

补肾宁心方对去卵巢兔动脉粥样硬化的保护作用

目的 研究补肾宁心方对去卵巢兔动脉粥样硬化形成的影响。方法 26只3月龄新西兰雌兔随机分为正常组、假手术组、对照组(卵巢切除)、中药组(卵巢切除并灌以补肾宁心方),除正常组外均于手术2周后给予高脂饮食,中药组同时灌胃给补肾宁心方中药,连续3个月。各组于第12周末测定血脂(TC、TG、LDL-C和HDL-C)以及一氧化氮(NO)水平;取主动脉行组织形态学观察以及在光镜和扫描电子显微镜下行病理学检查,利用图像分析仪计算动脉粥样硬化斑块内膜面积比和内膜中膜厚度比、面积比。结果 12周末除正常组外,各组动物血脂测定结果比较,差异无显著性。与对照组比较,中药组血清NO水平明显升高,主动脉硬化斑块面积与动脉内膜比值,内膜中膜厚度比、面积比均明显降低,主动脉病理变化减轻。结论 补肾宁心方可抑制去势雌兔动脉粥样硬化形成,对血管内皮细胞具有保护作用。