兔半月板纤维软骨细胞的体外去分化研究

目的:比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第5代。采用相差倒置显微镜和SEM观察各代细胞的形态变化和超微结构,MTT法检测细胞增殖情况并描绘生长曲线,采用细胞化学染色和免疫组化鉴定细胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白。结果:半月板纤维软骨细胞原代接种后8~12 h开始贴壁,48~72h大部分细胞贴壁,胞质逐渐展开,细胞变大伸长,形成突起,呈多角形,细胞形态规则,轮廓清晰,镜下观察有立体感,7~10 d后,细胞长满传代。传代后细胞贴壁生长能力和增殖速度明显加快,原代至第2代细胞形态较规则,多呈多角形,大小均一。第3代后随着传代次数的增加,细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传代周期延长。第5代分裂相少见,密度稀疏,细胞形态不佳,约80%呈长梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板细胞形态规则,呈多极性,表面有突起;第5代细胞形态不规则,多呈梭形。生长曲线可见第4代前半月板细胞生长速度及生长周期均相似,第5代后细胞生长速度减慢,增殖减缓。细胞化学和免疫组化染色分析胶原和蛋白聚糖的表达:随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减弱而Ⅰ型胶原表达逐渐增强。结论:体外单层培养条件下,随着传代的进行,细胞活力逐渐下降,生长速度减慢,传代周期延长,逐渐变为梭形,形态不规则。体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞表型随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减少而Ⅰ型胶原表达逐渐增多,体外单层培养条件下培养的半月板纤维软骨细胞从第3代开始逐渐失去其特异性表型,发生去分化,逐渐变为成纤维细胞的表型。体外单层分离培养的第5代前半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型和生物学特性,可作为组织工程半月板的种子细胞。     

BMP-12重组腺病毒载体转染外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化研究

目的探讨携带BMP-12基因的腺病毒载体转染诱导外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化的效果。方法取3~4月龄新西兰兔外周血,体外分离培养外周血MSCs至第3代。采用Ad Easy腺病毒载体系统制备BMP-12重组腺病毒载体。将BMP-12重组腺病毒体体外转染第3代外周血MSCs,转染后24 h通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测转染效率,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,转染后8、24 h在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达;转染后0、7、14 d,采用免疫组织化学染色观察I型胶原表达情况;实时定量PCR检测肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平,并设未转染细胞作为对照组。结果转染后24 h,倒置相差显微镜观察示细胞生长增殖缓慢,细胞形态清晰;FCM检测示,转染组转染效率为99.57%,未转染组为2.46%;转染后8 h,荧光显微镜下即可见GFP表达,随培养时间延长GFP表达逐渐增多,24 h时几乎所有细胞均可见GFP表达。免疫组织化学染色示,随转染时间延长,Ι型胶原表达逐渐增强;转染组转染后14 d,肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平分别为0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067,均显著高于未转染组的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024,差异有统计学意义(t=—7.700,P=0.031;t=—5.741,P=0.020;t=—12.998,P=0.000)。结论 BMP-12重组腺病毒载体可明显促进外周血MSCs向肌腱/韧带成纤维细胞表型分化,并促进肌腱/韧带特异基因表达和细胞外基质产生,为外周血MSCs用于肌腱/韧带再生提供了依据。     

急性膝关节后外侧旋转脱位修复治疗后的步态分析及其指导意义北大核心

背景:近年来对膝关节后外侧旋转脱位的评估常依赖传统影像技术获取静态解剖信息,同时以Lysholm评分和国际膝关节文献委员会评分进行功能评估,但这些均无法对患者的运动学特征进行定量评价,亦无法为术后提供具体的康复指导。目的:通过对急性膝关节后外侧旋转脱位术后患者进行步态分析,动态评估术后的运动学指标和位移指标,帮助指导康复。方法:纳入2011年1月至2014年12月四川大学华西医院收治的急性膝关节后外侧旋转脱位患者12例,行关节镜下一期韧带重建或修复,术后常规康复训练,同时采用Opti-Knee~?分析系统采集患侧膝关节(损伤组)及健侧膝关节(正常组)的6个自由度数据(包括运动角度和位移),计算其变化范围,并将2组结果进行比较。结果与结论:(1)运动角度方面:2组膝关节最大内/外翻转角,内/外旋转角差异无显著性意义(P>0.05),而损伤组膝关节最小屈曲角,最大屈曲角及屈曲/伸展、内/外翻角、内/外旋转角度变化范围均大于正常组(P<0.05);(2)位移方面:2组股骨相对于胫骨前移、内移、外移最大值及内/外位移变化范围差异无显著性意义(P>0.05),损伤组股骨相对于胫骨后移、下移最大值及胫骨前/后移变化范围大于正常组,而上移最大值和上/下位移变化范围则小于正常组(P<0.05);(3)结果提示,关节镜辅助一期治疗急性膝关节后外侧旋转脱位可在一定程度上恢复膝关节步态,Opti-Knee~?分析系统可客观提供运动参数信息,其自由度数据的改变有助于指导康复。     

2018年美国关节置换术使用氨甲环酸的临床实践指南解读

2018年美国髋关节和膝关节外科医师协会(AAHKS),美国骨科医师协会(AAOS),髋关节学会(THS),膝关节学会(TKS)及美国局部麻醉与疼痛医学学会(ASRA)共同协作,针对氨甲环酸(TXA)在全关节置换术(TJA)中应用的有效性和安全性进行了循证研究,就氨甲环酸给药的方式、剂量和时机以及在血栓形成高风险患者中的使用等提出了推荐意见,并根据证据支持强度对推荐意见进行了分级。本文对该指南进行解读,旨在为中国的骨科医务工作者、患者、医疗管理人员和指南制定者提供参考。     

国家自然科学基金运动系统脊柱疾病相关研究近5年资助情况与研究进展

<正>脊柱是人体重要的支撑和平衡结构,起着负重、运动和保护等功能,常见的脊柱疾病主要包括脊柱发育异常、损伤、退行性变、肿瘤、感染及免疫性疾病等。针对上述疾病的发生、发展、诊断与治疗,人们不断探索创新,随着近年来数字医学与组织工程的快速发展,基础研究与临床诊疗新技术的不断革新与突破,脊柱疾病相关研究取得了许     

关节镜下修复重建膝关节脱位合并多发韧带损伤的疗效观察

目的 探讨关节镜下重建断裂的前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)和后交叉韧带(posteriorcruciate ligament,PCL)及修复膝关节内部结构,治疗膝关节脱位合并多发韧带损伤的临床疗效.方法 2003年7月-2006年8月,收治24例膝关节脱位患者,采用关节镜下重建ACL和PCL,修复内侧副韧带(medial collateral ligament,MCL)、外侧副韧带(lateral collateralligament,LCL)和其他膝关节损伤结构.男19例,女5例;年龄20～69岁,平均42岁.均为单膝损伤,其中左膝11例,右膝13例.于伤后4h～6个月入院.ACL、PCL、MCL及LCL损伤8例,ACL、PCL及MCL损伤12例,ACL、PCL及LCL损伤4例.合并腓总神经损伤1例,内侧半月板损伤3例,外侧半月板损伤7例.评估患者术后并发症、膝关节活动范围和手术前后症状改善情况,Lysholm评分评估手术前后膝关节功能情况.结果 术后患者均获随访11～36个月,平均25个月.4例出现轻微关节僵硬,3例出现轻微关节疼痛,均未作特殊处理.11例(45.8%)运动功能恢复至伤前运动水平;13例(54.2%)显著改善,不需要辅助独立行走.24例Lachman试验、膝内外翻应力试验及前、后抽屉试验均为阴性,胫骨前后移动均<5 mm.1例腓总神经损伤者感觉运动恢复良好.Lysholm膝关节功能评分术前(41.8 ±4.3)分,术后(87.0±6.0)分:关节活动范围术前(87.5±12.5).术后(125.0 ±9.2)°术前、后比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 膝关节脱位后关节镜下重建ACL、PCL和修复其他膝关节结构是治疗膝关节脱位的一种有效方法.     

半月板纤维软骨细胞与壳聚糖/聚磷酸钙体外复合培养的实验研究

目的:观察半月板纤维软骨细胞在不同配比壳聚糖/聚磷酸钙(chitosan/calciumpolyphosphate,CS/CPP)支架材料上的生长状况,优选最佳配比CS/CPP生物材料作为组织工程半月板支架材料。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第3代,并对其进行表型鉴定。采用共混-化学交联固化-冷冻干燥法将CS、醛基化海藻酸钠(aldehyde alginate,ADA)、CPP有机地结合起来,制备4种不同配比的新型组织工程半月板复合支架材料。将体外分离培养的第3代半月板细胞,通过二次沉淀接种法将其种植于不同配比的CS/CPP支架上,体外培养7天,采用相差倒置显微镜、SEM、HE染色观察细胞在支架上的形态、黏附、生长情况。结果:体外分离培养的第3代半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型。相差倒置显微镜下可见,细胞在支架上黏附良好;扫描电镜下可见,细胞在支架上均匀分布,细胞多数呈多角形,并有基质分泌;HE染色结果显示,有细胞长入到三维支架材料内部。其中,半月板细胞在3:7的CS/CPP支架材料上单位面积内数目最多,生长最旺盛,细胞外基质分泌最多。结论:三维多孔的CS/CPP复合材料能促进半月板纤维软骨细胞的黏附、生长和增殖,其中3:7的CS/CPP支架材料细胞相容性和生物活性最好,最适于半月板纤维软骨细胞粘附和生长,并且能促进半月板细胞增殖和维持其表型,有望成为组织工程半月板良好的支架载体。     

膝关节自体软骨细胞移植术后康复的研究进展

目的总结膝关节自体软骨细胞移植术(autologous chondrocyte implantation,ACI)术后康复的研究进展。方法查阅近年来国内外ACI术后康复相关的基础及临床研究,并进行总结分析。结果研究表明,ACI术后移植物成熟分为4个阶段:增生期(术后0～6周)、过渡期(术后6～12周)、重塑期(术后12～26周)、成熟期(术后26周～2年)。为了避免早期移植物损伤,适当刺激移植物和骨骼的整合过程,更快恢复关节功能,临床需针对术后不同阶段移植物的生物力学特性设计康复锻炼方案,主要体现在术后负重、运动范围、康复训练方式的过渡和调整。结论膝关节ACI术后应科学地逐步增加负重和运动范围,在不同阶段可借助相应的康复锻炼手段。但目前相关研究的证据等级较低,仍需更高质量、更大样本量的随机对照试验,进一步探讨完善康复方案。     

兔外周血MSC复合同种异体脱钙皮质骨修复软骨缺损的研究

目的:比较外周血(peripheral blood,PB)与骨髓(bone marrow,BM)来源MSC复合脱钙皮质骨基质(demineralized cortical bone matrix,DCBM)修复兔膝关节软骨缺损的效果,为其进一步的临床应用提供实验参考。方法:获取分离培养的第三代兔PB-MSC和BM-MSC,以2×107/ml的细胞密度接种于DCBM上。20只成年新西兰兔,构建股骨远端滑车关节面中心部大面积全层软骨缺损模型,随机分为4组:I组:PB-MSC/DCBM复合物;II组:BM-MSC/DCBM复合物;III组:单纯DCBM支架组;IV组:空白缺损组。分别于术后24周、48周取材,通过大体观察、组织学评分、组织化学和免疫组织化学染色评价其在体内修复软骨的效果。结果:移植后24周PB-MSC/DCBM组:修复区由半透明组织填充,局部有小的浅的凹陷,表面光整,稍低于周围正常软骨,与周围组织连接连续。BM-MSC/DCBM组的大体观察类似I组。单纯DCBM组:表面光整,与周围组织连续性不如I、II组。空白缺损组:仍有一大的缺损。48周PB-MSC/DCBM组和BM-MSC/DCBM组,缺损区基本不可见,充填好,表面光滑,基本和周围正常组织无界限,与周围软骨连续性好,软骨细胞外基质表达较多。组织学评分显示:在24周和48周两个时间点,PB-MSC/DCBM组和BM-MSC/DCBM组比较组间无差异,均显著高于单纯DCBM组和空白缺损组。结论:PB-MSC具备与BM-MSC相似的修复兔关节软骨缺损的能力。