复方积雪草有效组分对人肾小管上皮细胞补体C3表达的影响

目的：探讨复方积雪草有效组分——积雪草苷／大黄素干预肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的人肾近曲小管上皮细胞（HPTEC）补体C3 mRNA及蛋白的表达水平。方法：采用HPTEC，模型组TNF-α 10ng／ml诱导，治疗组在TNF-α诱导的同时，以不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素进行干预，于24h后分别提取细胞RNA及上清，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和酶链免疫方法（ELISA）分别检测HPTEC C3 mRNA和蛋白的表达。结果：正常HPTEC具有C3 mRNA和蛋白表达，经TNF-α诱导后G表达明显上调，用不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素干预后，C3 mRNA及蛋白水平表达出现不同程度的下调，呈一定的剂量依赖关系和协同作用。结论：复方积雪草有效组分能够抑制炎性细胞因子TNF-α上调所致的肾局部G过度产生。     

青藤碱对肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-1基因表达的影响

目的:探讨青藤碱对体外培养的肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达的干预作用。方法:体外培养小鼠肾小管上皮细胞株(MCT),分为正常对照组、模型组和干预组。模型组和干预组细胞予以IL-1β(10ng/ml)刺激,干预组细胞同时加不同浓度的青藤碱,继续培养48h,RT-PCR检测细胞MCP-1和ICAM-1 mRMA的表达,Quangtity One 1-D分析软件分析积分光密度,计算MCP-1和ICAM-1电泳条带的积分光密度和GAPDH积分光密度的比值,用SPSS统计软件进行统计分析。结果:IL-1β可显著增强肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-I mRNA的表达,青藤碱各个浓度均能显著下调MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达,并呈一定的剂量依赖性。结论:青藤碱能显著下调肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-1的mRNA表达,提示其具有防治肾小管肾间质炎症损伤作用。     

白三烯受体拮抗剂对阿霉素肾病大鼠肾间质纤维化的干预作用及其机制研究

目的探讨白三烯受体拮抗剂孟鲁司特（Montelukast,MON）对阿霉素肾病大鼠肾间质纤维化的干预作用及其可能机制。方法将制成阿霉素肾病模型的27只SD大鼠随机分为模型组、高剂量和低剂量MON干预组、强的松干预组,并设正常对照组,分别观察各组24h尿蛋白排泄量、血肌酐（Scr）、内生肌酐清除率（Ccr）、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）和肾脏病理变化;同时采用免疫组化、免疫印迹和RT-PCR法检测肾间质中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白质和基因表达水平。结果模型组大鼠24h尿蛋白排泄量和尿NAG均较正常组增高（P〈0.05）,肾组织病理形态可见肾小球病变轻微,但肾间质纤维化相对面积和肾间质α-SMA蛋白、基因表达水平均高于正常组（P〈0.05）;各治疗组大鼠肾间质α-SMA蛋白、基因表达水平和肾间质纤维化相对面积均较模型组下降（P〈0.05）;实验第6周时低剂量和高剂量MON组Scr、Ccr水平与正常组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,且MON高剂量组Scr和Ccr水平优于模型组（P〈0.05）。结论MON可改善阿霉素诱导肾病大鼠肾小管间质病变,减轻肾间质纤维化程度;其机制可能与通过抑制肾间质α-SMA过度表达有关。     

尿酸利仙含药血清对TNF-α诱导的人血管内皮细胞ICAM-1基因表达的影响

目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在不同时间对人血管内皮细胞(Endothelial cell ofvessels,ECV)中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响及中药尿酸利仙(含药血清)的干预作用。方法:①体外培养人血管内皮细胞,分别用不同浓度(12.5、25、50μg/mL)的TNF-α刺激,并用25μg/mL的TNF-α分别孵育细胞8、16、24、48h;②用25μg/mL的TNF-α孵育细胞16h,同时用含不同浓度(2.5%、5%、10%)尿酸利仙含药血清的培养液进行干预。用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定血管内皮细胞ICAM-1的mRNA表达。结果:①低、中、高浓度TNF-α刺激均可显著上调内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,且体现了一定的浓度梯度关系,但刺激组间无显著性差异。②25μg/mL的TNF-α在8h、16 h、24 h和48 h均可显著上调内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,各干预组间无显著性差异。③低、中、高浓度的尿酸利仙含药血清干预均可显著降低ICAM-1 mRNA的表达(P≤0.01),并以中浓度尿酸利仙含药血清作用最为显著。结论:TNF-α能显著上调内皮细胞表面黏附分子ICAM-1的mRNA表达,而尿酸利仙含药血清抑制病理条件下ICAM-1基因水平的过量表达,可能是其减轻TNF-α诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一。     

HBV感染血清标记物与HBV-DNA定量结果分析

我国约有1.2亿慢性HBsAg携带者,每年约有30万人死于慢性乙型肝炎相关性疾病,且患者也是居高不下.临床对乙肝患者的检测手段也多种多样.其中最常用的是乙肝两对半和HBV-DNA定量检测.因乙肝两对半的检测方法有限,且其组合模式也多种多样,常导致临床诊断困难.而荧光定量PCR法检测HBV-DNA不仅准确度高,且定量的数据能反映体内乙肝病毒复制的程度,因此,我们对本院300例不同HBV感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行了对比分析.     

寡核苷酸微阵列法检测高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性的临床应用

目的　了解血管紧张素转换酶(ACE)的单核苷酸多态性 (SNPs)与高血压的相关性。方法　制备一种基于PCR 序列特异寡核苷酸探针法 (PCR SSOP)原理的寡核苷酸阵列芯片,用于对ACE基因的多个SNPs位点(C5467T,A9596G,A11860G,intron16上 287bpI/D)的同步检测, 并采用该芯片测定了 50名健康者和 80例高血压患者ACE基因的多态性谱。结果　高血压患者ACE基因A11860G的基因型分布为(AA: 24;AG: 10;GG: 46),与健康者的基因型分布 (AA: 15;AG: 18;GG: 17)相比较差异有统计学意义 (χ2 = 11 39,P< 0 01);高血压患者ACE基因I/D的基因型分布为 (II: 37;ID: 12;DD:31),与健康者的基因型分布(II: 23;ID: 5;DD: 22 )相比较差异有统计学意义 (χ2 =12 87,P< 0 01);而C5467T、A9596G的基因型分布在两组人群中未见差异有统计学意义。结论　ACE基因A11860G和I/D一样可能与高血压发生、发展密切相关;ACE寡核苷酸基因芯片技术实现了对ACE基因的多个SNPs多态性位点的同步检测,方法简单、操作方便。     

AGEs对人腹膜间皮细胞FN和CTGF的合成和表达作用研究

目的 观察糖基化终末产物（AGEs）对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.方法 分别以不同浓度的AGEs（0、200、600、1 000mg/L）刺激HPMC 48h后,用RT-PCR法检测FN的表达情况.同时将体外培养的HPMC分为正常组（未加任何刺激因素）和AGEs组（终浓度为600mg/L）,两组均予刺激HPMC48h后,用RT-PCR及ELISA法检测细胞内FN和CTGF mRNA及蛋白的表达水平.结果 AGEs呈剂量依赖性上调HPMC FN mRNA的水平;AGEs组FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平均较正常组明显增加（P＜0.05或0.01）.结论 AGEs可诱导体外培养HPMC的FN、CTGF基因和蛋白高表达.     

尿转化生长因子-β1及Ⅳ型胶原与肾内微癥积的相关性研究

目的:通过无创检测方法早期发现肾内微型癥积.方法:对98例肾活检的患者进行中医辨证分型:检测血/尿TGF-β1、尿ColⅣ、Scr、Ccr、24 h尿蛋白排泄;时肾组织运用CMIAS计算机病理图像分析系统作半定量测定;观察尿TGF一岛、ColIV水平,与肾硬化程度、中医辨证间的相关性.结果:(1)肾病患者尿TGF-β1、ColⅣ明显高于健康人(P<0.01).(2)尿TGF-β1、COlⅣ与肾小球基质基底膜面密度、肾间质纤维化程度、间质浸润细胞数呈正相关(P<0.05),与尿ColⅣ呈负相关(P<0.05).随着硬化程度加重尿TGF-β1、ColⅣ水平逐级增高.(3)尿TGF-β1、COlⅣ分别与Scr正相关,与Ccr负相关(P<0.01);与血TGF-β1、24 h尿蛋白定量无关.(4)在轻度肾硬化组,Scr和Ccr尚正常时尿TGF-β1、ColⅣ已高于正常组(P<0.01),尿ColⅣ敏感程度要高于尿TGF-β1和Ccr.(5)98例肾脏病患者的中医辨证以脾肾气虚型为主,占66.3%,以传统"四诊"辩为兼瘀血证者仅占8例(8.16%),肾硬化均属于重度,肾功能已减退,尿TGF-βColⅣ水平显著高于无瘀血证者.结论:尿TGF-β1、ColⅣ能早于Scr和Ccr的异常反映肾硬化及硬化程度.不受血TGF-β1和24 h尿蛋白定量的影响,可以作为监测肾硬化及其进展的一项无创性早期标志性指标,以尿ColⅣ更为敏感;同时揭示肾微癥积的病因为正虚邪郁,中医传统的宏观辨证加上微观辨证可明显提高辨证的准确性,尿TGF-β1、ColⅣ可以作为中医微观辨证的一项量化指标早期诊断肾内微癥积,监测病情的动态变化,指导早期应用消癥散积中药防治肾硬化.     

尿转化生长因子-β1及Ⅳ型胶原与肾内微型癥积的相关性研究

目的：通过无创检测方法早期发现肾内微型癥积。方法：对98例肾活检的患者进行中医辨证分型;检测血／尿TGF-β1、尿ColⅣ、Scr、Ccr、24h尿蛋白排泄;对肾组织运用CMIAS计算机病理图像分析系统作半定量测定;观察尿TGF-β1、ColⅣ水平,与肾硬化程度、中医辨证间的相关性。结果：（1）肾病患者尿TGF-β1、ColⅣ明显高于健康人（P〈0．01）。（2）尿TGF-β1、ColⅣ与肾小球基质基底膜面密度、肾间质纤维化程度、间质浸润细胞数呈正相关（P〈0．05）,与尿ColⅣ呈负相关（P〈0．05）。随着硬化程度加重尿TGF-β1、ColⅣ水平逐级增高。（3）尿TGF-β1、ColⅣ分别与Scr正相关,与Ccr负相关（p〈0．01）;与血TGF-β1、24h尿蛋白定量无关。（4）在轻度肾硬化组,Scr和Ccr尚正常时尿TGF-β1、ColⅣ已高于正常组（P〈0．01）,尿ColⅣ敏感程度要高于尿TGF-β1和Ccr。（5）98例肾脏病患者的中医辨证以脾肾气虚型为主,占66．3％,以传统“四诊”辨为兼瘀血证者仅占8例（8．16％）,肾硬化均属于重度,肾功能已减退,尿TGF-β1、ColⅣ水平显著高于无瘀血证者。结论：尿TGF-β1、ColⅣ能早于Scr和Ccr的异常反映肾硬化及硬化程度,不受血TGF-β1和24h尿蛋白定量的影响,可以作为监测肾硬化及其进展的一项无创性早期标志性指标,以尿ColⅣ更为敏感;同时揭示肾微癥积的病因为正虚邪郁,中医传统的宏观辨证加上微观辨证可明显提高辨证的准确性,尿TGF-β1、ColⅣ可以作为中医微观辨证的一项量化指标早期诊断肾内微癥积,监测病情的动态变化,指导早期应用消瘕散积中药防治肾硬化。     

防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及足细胞病变的影响

目的：探讨防己黄芪汤对蛋白尿及其发生原因——足细胞病变的影响。方法：采用阿霉素肾病大鼠造成肾病综合征模型。以防己黄芪汤、2倍剂量防已黄芪汤、防已黄芪去甘草汤灌胃。于14d、28d、42d测24h尿蛋白定量;实验42d取血、取肾,检测血生化,观察肾组织病理改变,免疫组织化学法、Western-blotting、RT-PCR检测肾组织nephrin、podoein蛋白及基因水平。结果：模型组大鼠蛋白尿明显增加,伴血Alb下降;与模型组比较,防己黄芪汤组大鼠尿蛋白定量在实验14d、28d、42d明显减少。2倍剂量防己黄芪汤组、防己黄芪去甘草汤组大鼠尿蛋白定量在42d明显减少。模型组大鼠nephrin蛋白表达上调,药物干预后表达明显下降;模型组podoein蛋白和基因表达下调,药物干预后表达明显增加。结论：防己黄芪汤明显改善阿霉素肾病大鼠蛋白尿,这可能与其对足细胞关键结构nephrin、podoein表达的调节有关。