反义核苷酸抑制人高迁移率族蛋白1表达对胰腺癌细胞的影响

目的　构建高迁移率族蛋白 1(HMGB1)基因的反义真核表达载体 ,寻找胰腺癌基因治疗新途径。方法应用分子克隆技术构建HMGB1基因反义真核表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1,转染胰腺癌细胞株PANC 1,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫印迹法 (Westernblot)、噻唑蓝 (MTT)比色法检测转染 4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果　成功构建 pcDNA3 1/antisense HMGB1反义真核表达载体。所获反义表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低 (P <0 0 1)。反义 pcDNA3 1/antisense HMGB1的导入能有效抑制PANC 1增殖活性 (P <0 0 1)。 结论　应用反义RNA技术阻断HMGB1基因的表达 ,能有效抑制癌细胞的体外增殖活性 ,为基因治疗提供了新思路     

纳米脂质体介导酪氨酸激酶受体3配体基因转染树突状细胞对结肠癌细胞凋亡的作用

目的 观察利用阳性纳米脂质体介导的基因治疗联合免疫治疗对结肠癌细胞的治疗作用.方法 应用基因克隆技术分别构建含有绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒(pEGFP),并依据静电吸附原理制备携带基因的阳离子纳米脂质体,再将转染阳性的树突状细胞(DC)移植作用于结肠癌细胞.结果 成功构建含有绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒,并得到酶切鉴定和序列测定证实.携带酪氨酸激酶受体3 配体(FL)基因的阳离子纳米脂质体成功转染DC,发现基因在细胞内得到很好表达,且随着培养时间的增加,蛋白表达量有所增加,72h时表达量最高.基因移植后发现对照组肿瘤体积增长最快,FL基因组肿瘤体积增长较慢；FL基因组肿瘤细胞凋亡率和死亡率明显高于对照组(P＜0.05)；而pEGFP组和对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阳离子纳米脂质体作为基因载体具有一定优越性.基因治疗联合免疫治疗在结肠癌治疗中具有重要意义.     

胶质细胞源性神经营养因子基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

目的 克隆大鼠胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因，构建含有GDNF基因的重组腺病毒载体，为转染神经干细胞和基因治疗奠定基础。方法 从大鼠脑组织中提取总RNA，用逆转录聚合酶链反应方法扩增出约660bp的片段，并将该片段克隆到载体pAdTrack-CMV中，进行酶切鉴定和序列分析。结果 证实成功构建了含有GDNF基因的重组腺病毒质粒。结论 克隆到正确的大鼠GDNF基因，并构建出重组质粒pad—GDNF，为下一步重组腺病毒颗粒和基因治疗打下基础。     

高迁移率族蛋白1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的研究胰腺癌(PC)组织中高迁移率族蛋白1(High mobjlity group box 1,HMGB1)蛋白表达,并探讨其与癌分化程度、肿瘤大小、浸润、淋巴及血道转移的关系.方法用免疫组织化学SABC方法,检测73例胰腺癌组织、10例癌旁组织、6例正常胰腺组织HMGB1蛋白表达.结果HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达(76.7%),在癌旁组织中仅有微弱表达,正常胰腺组织无表达;HMGB1的阳性率与癌分化程度无关(P＞0.05);与肿瘤的大小、浸润、淋巴及血道转移呈正相关(P＜0.01).结论HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达,可作为胰腺癌生长、转移及预后的重要判定指标.     

疝环充填式无张力疝修补术在成人腹股沟疝的临床应用

目的　评价疝环充填式无张力疝修补术治疗腹股沟疝的临床价值。方法　应用聚丙烯网塞及网状补片治疗腹股沟疝 14 4例 ,对手术时间、手术方法、术式的优点、并发症及术中注意事项进行回顾性总结。结果　全组均痊愈 ,手术时间平均 43 .5min ,术后疼痛轻微 ,平均 6h后即可下床活动 ,无感染病例 ,主要并发症为 6例尿潴留和 5例阴囊积液。 63例出现术后低热。随访无复发病例。结论　该方法操作简便 ,符合腹股沟区生理解剖特点 ,术后疼痛轻 ,患者恢复快 ,复发率低 ,是治疗腹股沟疝的理想方法     

胰腺癌组织中高迁移率族蛋白1和基质金属蛋白酶2的表达研究

目的:研究胰腺癌组织中高迁移率族蛋白1 ( high mobility group box 1,HMGB1)及基质金属蛋白酶2 ( matrixmetalloproteinase 2, MMP 2)蛋白表达并探讨其与癌分化程度、肿瘤大小、浸润、淋巴及血道转移的关系。方法:用免疫组织化学SP 方法,检测73 例胰腺癌组织、30例癌旁组织HMGB1 及MMP -2 蛋白表达。结果:HMGB1和MMP 2在胰腺癌中的阳性表达率分别为76. 7% ( 56/73 )和64 4% ( 47/73 ),在癌旁组织中分别为20 .0%(6/30)和23 3%(7/30), 两者在癌组织与癌旁组织间表达差异均有统计学意义,P<0. 01。HMGB1 和MMP- 2 的阳性率与癌分化程度无关,P>0 .05;与肿瘤的大小、浸润、淋巴及血道转移呈正相关,P<0 .05或<0 .01;HMGB1 和MMP -2 在胰腺癌组织中表达呈正相关,P< 0. 01。结论:HMGB1 和MMP- 2 在胰腺癌生长、侵袭和转移过程中起着重要的作用, 联合检测有利于评估胰腺癌的生物学行为和判     

腹腔镜辅助结直肠癌根治术临床分析

目的探讨应用腹腔镜辅助行结直肠癌根治术的可行性及安全性。方法回顾性分析2000年5月～2005年2月68例腹腔镜辅助结直肠癌根治术临床和病理资料。术中按传统根治术的要求使用超声刀游离结肠或直肠及其相应的肠系膜和淋巴脂肪等组织。结肠癌根治性手术者，在腹部的左侧或右侧做5cm长的辅助切口，腹腔外行肠切除和肠吻合。Miles手术者在充分游离乙状结肠和直肠后，在左下腹做辅助性小切口（乙状结肠造口处），切断乙状结肠后，腹部手术者行乙状结肠造口，会阴手术组经会阴行直肠切除。结果行左半结肠癌根治20例，右半结肠癌根治12例，横结肠癌根治9例，切除包括肿块在内的肠管约13—21．5cm；行Dixon术18例，Miles术9例，下切缘距肿瘤下缘3—5cm。术后病理证实两切缘均未见癌。手术时间120—180min，平均145．2min。出血量20—80ml，平均48．5ml。淋巴结清扫数3～18个，平均11．2个。1例直肠癌行Miles术式者术后会阴部切口裂开，无其他并发症。63例随访5～60个月，平均23个月。6例因术后7～12个月发生肿瘤转移死亡，术后生存时间18～36个月。未发现腹壁小切口和穿刺孔转移。结论腹腔镜技术在结直肠恶性肿瘤根治性手术中有广阔的应用前景。     

原发性十二指肠乳头癌的临床诊治分析

目的：探讨十二指肠乳头癌的早期诊断及治疗效果。方法：回顾性分析收治的36例经手术及病理组织学检查确诊的十二指肠乳头癌患者的临床资料。十二指肠乳头癌主要以进行性无痛性黄疸（27例）、上腹部隐痛（6例）及上消化道出血（3例）为首发临床表现。术前纤维十二指肠镜、ERCP、MRCP、B超及CT检查确诊率分别为93．5％、100．0％、85．7％、86．1％和72．7％。结果：23例行胰十二指肠切除术（Child术）．11例行十二指肠乳头癌局部切除术．2例行姑息性胆肠吻合术。36例均行病理组织学检查，切缘均无癌残存。Child术及局部切除术术后的3年生存率分别为42．3％和45．1％；5年生存率分别为30．6％和34．2％。结论：纤维十二指肠镜检查、ERCP和MRCP是诊断十二指肠乳头癌的有效方法，早期诊断、选择合理的手术方式是治疗的关键。     

BAG-1蛋白表达与结肠癌临床病理因素关系的研究

目的:研究抗凋亡基因BAG 1在 结肠癌组织中的表达及与临床病理因素的 关系。方法:应用免疫组织化学SABC法对 64例结肠癌及10例正常结肠组织中BAG 1基因的表达进行检测。结果:结肠癌组织 中BAG 1蛋白阳性表达率为64.1%(41/ 64),显著高于结肠正常组织的10.0%(1/ 10),P<0.05;BAG 1在结肠癌中的表达与 结肠癌病理类型、肿瘤直径、浸润深度及有 无淋巴结转移无关,P>0.05;但与病理分 级、远处转移、Duke’s分期及预后密切相 关,P<0.05。结论:结肠癌组织中存在不 同水平的BAG 1蛋白的高表达,对疾病的 预后有着重要意义     

克隆大鼠内皮素B受体基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

目的克隆大鼠内皮素B受体（EDNRB）基因，构建含有EDNRB基因的重组腺病毒载体，为转染神经干细胞和基因治疗先天性巨结肠（HD）奠定基础。方法从大鼠心脏组织中提取总RNA，用RT—PCR方法扩增出约1580bp的片段，并将该片段克隆到载体pAdtrack—CMV中，进行酶切鉴定和序列分析。结果证实成功构建了含有EDNPd3基因的重组腺病毒质粒。结论克隆到正确的大鼠EDNPd3基因，并构建出重组质粒pAd—EDNRB，为下一步重组腺病毒颗粒和基因治疗打下基础。