双参宁心胶囊对冠状动脉微循环障碍大鼠心脏功能及血流动力学的影响

目的 研究益气活血中药双参宁心胶囊对冠状动脉微循环障碍大鼠心脏血流动力学及心功能的影响。方法 大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,尼可地尔组（5 mg·kg^-1）,双参宁心胶囊高、中、低剂量（180,90,45 mg·kg^-1）组。动物按分组先给予相应药物7 d,末次给药后2 h进行模型制备。采用左心室注射内注射栓塞微球（40~120 μm,约1 000个微球）方法建立大鼠冠脉微循环障碍模型。造模术后24 h后超声心动图观察左室舒张末期内径（LVIDd）,左室收缩末期内径（LVIDs）,左室舒张末期容积（LVEDV）,左室收缩末期容积（LVESV）,每搏输出量（SV）,心输出量（CO）,左室射血分数（EF）,左室缩短率（FS）;心导管技术测定大鼠动脉收缩压（SBP）,舒张压（DBP）,左室峰压（LVSP）,左室舒张末压（LVEDP）,左室内压最大上升速率（LV+dp/dt_max）,左室内压最大下降速率（LV-dp/dt_max）,计算平均动脉（MAP）,体表标准Ⅱ导心电图计算心率（HR）;生化分析法检测肌酸激酶（CK）,肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）活性;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清心肌肌钙蛋白T（cTnT）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠心肌组半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）,B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）及Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达;2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察心肌梗死面积;苏木素-伊红（HE）染色观察心肌形态学改变。结果 与假手术组比较,模型组SV,CO,EF,FS显著降低（P<0.01）,LVIDs,LVEDV显著增加（P<0.01）;与模型组比较,双参宁心胶囊各剂量组可以增加EF（P<0.05,P<0.01）和FS（P<0.01）;180,90 mg·kg^-1剂量组明显降低LVIDs,LVESV,增加LVEDV,SV和CO（P<0.05,P<0.01）。与假手术组比较,模型组SBP,DBP,MAP,LVSP,LV+dp/dt_max及LV-dp/dt_max均显著降低（P<0.01）,HR差异无统计学意义。双参宁心胶囊各剂量组对大鼠血流动力学具有一定程度改善,较模型组增加大鼠SBP,DBP,MAP,LVSP,LV+dp/dt_max,LV-dp/dt_max及HR（P<0.05,P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,CK-MB及cTnT明显升高（P<0.01）,与模型组比较,双参宁心胶囊有明显降低动物血清CK,LDH,CK-MB及cTnT的作用（P<0.05,P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠心肌Caspase-3蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较,双参宁心胶囊低剂量组心肌Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05）;与模型组比较,双参宁心胶囊高剂量组显著增加大鼠心肌Bcl-2表达（P<0.01）。心肌TTC染色显示,与模型组比较,双参宁心胶囊各剂量组均能显著减少心肌梗死面积（P<0.01）。HE病理结果显示,双参宁心胶囊各剂量组心肌组织病理变化与模型组比较有不同程度的减轻。结论 益气活血中药双参宁心胶囊可以明显增加微球栓塞导致的冠脉微循环障碍的心脏功能,改善心脏血流动力学指标,减少心肌梗死面积,降低CK,LDH,CK-MB及cTnT等心肌损伤标志物水平,其作用机制与抑制心肌细胞凋亡起到保护心肌的作用有关。     

痰瘀同治方对兔动脉粥样硬化对氧磷酶活性及炎症因子的影响

目的:探讨痰瘀同治方对兔动脉粥样硬化(AS)对氧磷酶活性及炎症因子的影响。方法:将家兔随机分为正常组、模型组、辛伐他汀组、痰瘀同治方5,2.5,1.25g·kg^-1剂量组;采用主动脉球囊拉伤加高脂喂养造模;造模4周开始给药,给药8周。实验结束后,测定各组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,血清对氧磷酶-1(PON-1)活性,C反应蛋白(CRP)和白介素-6(IL-6)含量。结果:与模型组比较,辛伐他汀组和痰瘀同治方5g·kg^-1剂量组家兔TC,LDL-C明显降低,痰瘀同治方5,2.5g·kg^-1剂量组PON-1活性较模型组明显升高,痰瘀同治方各剂量组CRP,TNFα-和IL-6水平较模型组明显降低。结论:痰瘀同治方通过调节血脂,抗炎,保护PON-1活性等途径起到抗AS的作用。     

犬冠状动脉平滑肌细胞培养及鉴定

目的:建立犬冠状动脉平滑肌细胞培养及鉴定的方法。方法:用胶原酶消化法体外培养犬冠状动脉平滑肌细胞。结果:分离犬冠状动脉后,用胶原酶消化法培养原代冠状动脉平滑肌细胞,8天后细胞细胞呈"峰-谷"状态,平滑肌细胞α-肌动蛋白免疫组织化学鉴定为平滑肌细胞,纯度为100%。结论:此方法操作简单、快速,得到细胞数量大、纯度高,是一种稳定的冠状动脉平滑肌细胞培养法。     

补阳还五汤治疗大鼠气虚血瘀型脑缺血的代谢组学研究

目的：探讨补阳还五汤对气虚血瘀型脑缺血大鼠生物代谢途径的影响。方法：将30只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组（3.49 g/kg）。模型组和补阳还五汤组采用荧光微球诱导多发性脑梗死合并睡眠剥夺,建立气虚血瘀型脑缺血动物模型,并分别给予蒸馏水或补阳还五汤灌胃。假手术组给予蒸馏水灌胃,不睡眠剥夺和微球注射。记录各组大鼠的体质量。实验结束后,处死大鼠,采血分析。酶联免疫吸附试验法检测大鼠血清中血栓素B2（TXB2）和6-酮基-前列环素1α（6-keto-PGF1α）水平。采用液质联用的代谢组学方法检测血清样品。结果：与假手术组比较,模型组大鼠平均体质量明显降低,TXB2/6-keto-PGF1α比值升高（均P<0.05）;与模型组比较,补阳还五汤组大鼠平均体质量升高,药物干预可降低TXB2/6-keto-PGF1α比值（P<0.05）。代谢组学结果显示,假手术组与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,补阳还五汤组部分逆转模型组的变化,指标向假手术组回调的趋势明显。结论：模型大鼠体内的生物代谢途径受到明显干扰,补阳还五汤可以对异常生物代谢途径进行明显的调整,其调整的代谢途径包括：精氨酸的生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢、谷胱甘肽代谢、赖氨酸的生物合成。     

痰瘀互结证冠心病小型猪模型的建立

目的 利用高脂喂养结合冠脉球囊损伤在小型猪体内建立病证结合冠心病痰瘀互结模型。     

芪龙胶囊对犬急性心肌缺血的影响

目的:观察芪龙胶囊对犬急性心肌缺血缺血、心肌梗死的保护作用。方法:采用犬冠脉前降支结扎的方法建立犬急性心肌缺血模型。36只犬随机分为6组,每组6只动物,分别为:模型对照组,合心爽组(0.5 mg/kg),复方丹参片(0.24片/kg)组,芪龙胶囊256、128及64 mg/kg剂量组;采用心外膜电图标测心肌缺血范围及程度,定量组织学(N-BT染色法)测定心肌梗死范围,超声多普勒血流计测定心脏冠脉血流量,血气分析仪测定心肌耗氧量,全自动生化分析仪测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化。结果:芪龙胶囊经十二指肠给药可明显减少N-BT所示的犬心肌梗死面积/心室面积的比率;明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(药后15 min~180 min),与模型组比较均有显著差异;可减小由心外膜电图标测的心肌缺血范围(药后15 min~180 min);增加冠脉流量(药后30 min~45 min);对心肌缺血及心肌梗死引起的血清CK、LDH活性升高有明显抑制作用,对急性心肌缺血后动脉、静脉血氧含量未见明显影响。结论:芪龙胶囊对犬急性心肌缺血模型表现出较好的心肌保护作用,可能与增加冠脉血流量,改善心肌供血有关。     

山柰酚和槲皮素对乳鼠心肌缺氧复氧及过氧化损伤的保护作用

目的:观察山柰酚和槲皮素对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的干预作用并探讨其作用机理。方法:取大鼠新生乳鼠心肌细胞做原代培养,MTT法检测细胞活力,确定药物作用安全范围;考察药物对心肌细胞缺氧复氧损伤模型LDH漏出的改变;复制心肌细胞过氧化氢损伤模型,观察药物对细胞活力及上清液中LDH含量的影响。结果:山柰酚和槲皮素125μg/ml以下对心肌细胞活力无明显影响。山柰酚或槲皮素100、50、25、12.5μg/ml均可以降低缺氧复氧损伤后心肌细胞的LDH漏出率(P<0.01或P<0.05),其中山柰酚100、50、25μg/ml浓度,槲皮素以50、25、12.5μg/ml浓度作用较佳。山柰酚、槲皮素对心肌细胞过氧化氢损伤均有显著的抑制作用,均呈浓度依赖性,并可显著降低过氧化氢损伤所致的LDH释放。结论:山柰酚和槲皮素具有显著的抗心肌细胞缺氧损伤的能力,与其抗氧化的药理作用有关。     

天龙通心片对犬急性心肌缺血损伤的影响

目的:观察天龙通心片口服给药对实验性犬急性心肌缺血及相关指标的影响。方法:建立犬急性心肌缺血模型,分为正常组(等量β-环糊精10 g·kg~(-1)),合心爽组(5 mg·kg~(-1)),天龙通心片高、中、低剂量组(1,0.5,0.25 g·kg~(-1)),复方丹参片组(0.144 g·kg~(-1))。采用心外膜电图标测心肌缺血程度,定量组织学(N-BT染色法)测定心肌梗死范围,测定冠脉血流量、心输出量、心肌耗氧量、冠脉阻力及外周阻力,同时用光学试剂盒检测血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量。结果:与正常组比较,天龙通心片能减小由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)(P0.05),缩小经N-BT染色所显示的梗死区(P0.05),降低静脉血氧含量等作用(P0.05),增加麻醉犬冠脉流量、心输出量及心肌耗氧量,降低冠脉阻力及外周阻力(P0.05),而对血清CK,LDH及血清SOD活性,MDA含量的影响未见统计学差异。结论:天龙通心片具有一定的改善犬急性心肌缺血和心肌梗死的作用。     

双参芎连颗粒对高同型半胱氨酸血症慢性肾病大鼠血管舒张及PI3K/Akt/eNOS通路的影响

目的 研究双参芎连颗粒对高同型半胱氨酸血症慢性肾病大鼠血管病变及磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/内皮型一氧化氮合酶（eNOS）信号通路影响。方法 大鼠随机分为5组，分别为假手术组、模型组、双参芎连颗粒高、中、低剂量（8，4，2 g·kg^-1）组。采用高蛋氨酸饲料喂养结合5/6肾摘除法建立大鼠高同型半胱氨酸血症慢性肾病模型，5/6肾摘除术后4周后开始连续灌胃给药4周。术后4，8周测定大鼠动脉血压；术后8周实验结束，取血测定血清肌酐、尿素氮、同型半胱氨酸、蛋氨酸及血脂水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测胸主动脉磷酸化（p-）p85，p-Akt和p-Ser177等PI3K/Akt/eNOS信号通路相关蛋白表达，测定血清一氧化氮（NO），eNOS；采用离体血管环灌流方法，测定内皮依赖性舒张和非内皮依赖性舒张变化；苏木素-伊红（HE）染色观察肾脏组织及胸主动脉血管改变。结果 实验8周时，与假手术组比较，模型组动脉收缩压、血清尿素氮、肌酐、高同型半胱氨酸、蛋氨酸、总胆固醇及低密度脂蛋白明显增高；给予双参芎连颗粒4周后，各剂量组动脉收缩压、血清尿素氮、高同型半胱氨酸、蛋氨酸、血清总胆固醇及血清低密度脂蛋白均明显降低（P<0.05，P<0.01），双参芎连颗粒8，4 g·kg^-1组肌酐明显降低（P<0.05）。双参芎连颗粒各剂量组NO含量较模型组明细升高（P<0.05，P<0.01），双参芎连颗粒8 g·kg^-1组血清eNOS活性较模型组明显升高（P<0.05）。模型组动物离体胸主动脉环的内皮依赖性及非内皮依赖性血管舒张均受到明显损伤，双参芎连颗粒8 g·kg^-1组在乙酰胆碱累积浓度1×10^-5.5~1×10^-4 mmo1·L^-1舒张程度较模型组明显改善（P<0.05，P<0.01）；双参芎连颗粒8 g·kg^-1组血管环在硝普钠积浓度1×10^-10~1×10^-7mmo1·L^-1舒张程度较模型组明显，差异具有明显统计学意义（P<0.05）。Western blot 结果显示，与假手术组比较，模型组血管p-85，p-Akt及p-Ser177的表达均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，双参芎连颗粒各剂量组该通路磷酸化水平较模型组呈升高趋势，其中双参芎连颗粒8 g·kg^-1组p-Akt及p-Ser177的表达升高更明显，差异具有明显统计学意义（P<0.05）。双参芎连颗粒各剂量组的胸主动脉和肾脏组织病理变化与模型组比较有不同程度的减轻。结论 双参芎连颗粒可以改善高同型半胱氨酸血症慢性肾病大鼠高同型半胱氨酸及血脂代谢异常，降低血清肌酐及尿素氮水平，降低动脉收缩压，改善血管形态及舒张功能，其作用可能与调控PI3K/Akt/eNOS信号通路有关。     

胆固醇酯转运蛋白在家兔心脏肥大中表达的实验研究

目的 复制异丙肾上腺素致家兔心脏肥大模型,考察胆固醇酯转运蛋白（CETP）的表达变化。 方法 将雄性新西兰兔随机分为正常组和模型组。模型组采用腹腔注射异丙肾上腺素15 mg/(kg·d)（分早晚2次进行）建立家兔心脏肥大模型,正常组腹腔注射等体积的生理盐水,连续14 d后,取血、心脏和肺脏,分离左、右心室,考察脏器指数;HE染色观察心肌组织形态学改变;RT-PCR法检测心脏肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC mRNA表达;检测血清TG、TC、LDL-C及HDL-C的含量;检测左心室CETP的mRNA水平、蛋白表达及含量。 结果 与正常组比较,模型组家兔心脏质量指数（HW/BW）和左心室质量指数（LVW/BW）显著增加（P<0.05）,右心室质量指数（RVW/BW）和肺脏质量指数（LW/BW）有增加的趋势,左心室心肌细胞体积明显增大,间质增宽,左心室ANP、β-MHC的mRNA表达显著上调（P<0.05）。与正常组比较,模型组家兔血清TG含量显著升高（P<0.05）,TC、LDL-C水平呈升高趋势,HDL-C水平呈下降趋势,模型组家兔左心室组织中CETP mRNA水平和蛋白表达均显著上调（P<0.05）,CETP含量显著增加（P<0.05）。 结论 在异丙肾上腺素诱导的家兔心脏肥大模型中,CETP表达上调,但其是否与心脏肥大有关还有待进一步深入研究。本研究结果为后续研究CETP与心脏肥大的关系提供了理想动物模型。