CARP编码蛋白的相互作用蛋白筛选

目的 :筛选与CARP编码蛋白相互作用的蛋白 ,为其功能研究奠定基础。方法 :将编码全长CARP的DNA序列插入到pGBKT7 BD载体中 ,转化AH1 0 9酵母 ,然后与含有已克隆到pACT2载体上的人心脏cDNA文库的Y1 87酵母融合。CARP与相应的人心脏cDNA片段编码的蛋白发生相互作用后 ,可激活报告基因的表达。阳性克隆的质粒进行测序分析。同源性检索搜寻GenBank中与之相同或相似的序列。结果 :共筛选约 3× 1 0 7个cDNA ,筛选出 9个阳性克隆 ,其中包括FLNa (actin bindingprotein 2 80 )。结论 :CARP编码蛋白在酵母中可以特异性的结合FLNa ,提示CARP可能通过与FLNa相互作用参与调控细胞增殖     

线粒体DNAl6189T→C变异与2型糖尿病发病机制的关系

目的　探讨线粒体DNA16189T→C变异与 2型糖尿病 (T2DM )的关系。　方法　运用PCR -RFLP技术在 3 0 8例无血缘关系的上海地区汉族人 (糖耐量正常 158名 ,T2DM患者 150例 )中检测线粒体DNA16189T→C变异。　结果　上海地区汉族人线粒体DNA16189T→C变异频率显著高于英国白种人 (2 9%vs 9.9% ,P =6.85× 10 - 6 )。线粒体DNA16189T→C变异阳性的糖尿病 (DM )患者胰岛素抵抗 (HOMA IR)值明显低于阴性者 (P =0 .0 2 7) ,并且 ,逐步多元回归分析显示该变异是HOMA IR的独立相关因素之一 (部分R2 =0 .0 2 8,P =0 .0 2 6)。　结论　线粒体DNA16189T→C变异与上海地区汉族人T2DM胰岛素抵抗相关     

胰岛β细胞功能紊乱与2型糖尿病

胰岛β细胞功能受损和胰岛素抵抗是2型糖尿病的两大致病机制。β细胞功能，尤其早时相胰岛素分泌，对维持正常葡萄糖代谢有重要作用。在从正常糖耐量向糖尿病进展的过程中，β细胞功能呈进行性下降，早期应用促进或模拟早时相胰岛素分泌的药物保护β细胞功能有助于延缓糖尿病的进展。     

磷酸化转录激活因子5在胰腺癌细胞的表达及生长激素的干预作用

目的 检测磷酸化转录激活因子5(pSTAT5)在7株胰腺癌细胞株中的表达,观察生长激素(GH)处理SW1990细胞及其移植瘤后pSTAT5表达的变化,探讨GH的分子作用机制.方法 体外培养人胰腺癌细胞株SW1990、Cap-1、Colo、Mia、Aspc、P3、PANC1,Western blotting检测各株细胞的pSTAT5表达;收集指数生长期的SW1990细胞接种于BALB/C裸鼠,成瘤后随机分为GH组(瘤内注入GH 4 mg·kg-1·d-1,连续2周)和对照组(NS组),最后一次注射GH后1、2、24 h分批处死裸鼠,Western blotting检测SW1990细胞和移植瘤pSTAT5蛋白表达的变化.结果 所有胰腺癌细胞(SW1990、Cap-1、Colo、Mia、Aspc、P3、PANC1)均有pSTAT5表达.GH(50 ng/ml)刺激后5 min,SW1990细胞pSTAT5的表达量为0.57±0.05,较刺激前显著增高,10 min达到0.64±0.04,15 min很快下降至0.39±0.03,但直至1 h仍高于对照组(0.33±0.02对0.25±0.06),2 h后表达量为0.26±0.03,回落到基础水平.移植瘤pSTAT5表达无明显变化.结论 GH可迅速上调SW1990细胞的pSTAT5表达,但维持时间较短,而对胰腺癌移植瘤pSTAT5的表达无显著影响.     

可溶型鸟苷酸环化酶(sGC)的激活能够逆转实验性肺动脉高压

背景:严重的肺动脉高压是一种有着很高的死亡率的致残性疾病,其特征是肺部血管重塑以及右心室肥大。利用长期缺氧而导致肺动脉高压的内皮型一氧化氮合酶基因敲除的纯合子(NOS3(-/-))小鼠和野生型小鼠,以及野百合碱性肺动脉高压的大鼠,我们检测了可溶型鸟苷酸环化酶(sGC)的刺激因子。Bay41- 2272或其激活剂Bay58-2667是否会逆转肺部血管的重塑。方法与结果:在肺体外灌注系统中,Bay41-2272和Bay58-2667均能剂量依赖性地抑制急性缺氧导致的血压增高反应。野生型(NOS3( / ))和NOS3基因敲除(NOS3(-/-))小鼠在氧气含量低于10％的环境中饲养21天或35天,外周肺动脉完全肌肉化程度的增高证明:两组小鼠均发生肺动脉高压、右心室肥大以及肺部血管重塑。从第21天到35天,分别用sGC的激活剂Bay58-2667(10 mg/kg/d)或刺激因子Bav41- 2272(10 mg/kg/d)处理野生型小鼠,能够明显减轻肺动脉高压、右心室肥大以及肺动脉的结构重塑。相反的,在NOS3基因敲除小鼠(NOS3(-/-))中长期使用sGC激活剂进行治疗却收效甚微。在注射野百合碱而导致严重肺动脉高压的大鼠中,这两种化合物均能明显逆转其血流动力学和结构上的的改变。结论:sGC的激活能够逆转野百合碱和长期缺氧性肺动脉高压所引起的血流动力学和结构的改变。而这种效果部分的依赖于NOS3产生的内源性一氧化氮。     

钙对用克山病病区粮喂养大鼠甲状旁腺激素降钙素以及生长激素分泌的影响

用模仿克山病病区易感人群膳食组成的病区粮偏食喂养大鼠，观察在该饲料中补充不同浓度的钙对大鼠内分泌及生长代谢的影响。结果表明：病区粮偏食明显低钙，仅为常规食的１／３２；用该饲料喂养的大鼠体重增长缓慢；血清总钙及血浆钙离子水平明显降低，仅约为常规食组动物的一半左右，血Ｐ升高；血清甲状旁腺激素（ＰＴＨ），降钙素（ＣＴ）和生长激素（ＧＨ）水平均明显降低，与常规食组比，均为Ｐ＜０．０１。补Ｃａ后随血清Ｃａ增加，血清ＰＴＨ、ＣＴ和ＧＨ均明显升高而接近常规食组水平。这说明钙对用克山病病区粮喂养大鼠的内分泌功能及生长代谢具有一定的调节作用，从而改善了用病区粮喂养大鼠引起的代谢偏移。     

CARP相互作用蛋白HTRM的表达谱分析及亚细胞定位

目的观察CARP相互作用蛋白HTRM的组织表达谱和亚细胞定位及其对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用。方法我们利用CLONTECH公司的成人多组织膜，通过Northern杂交的方法，检测HTRM在心脏、脑、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾脏以及胰腺中的表达情况。将HTRM带上GFP标签转染HEK293S细胞，观察其亚细胞定位情况。再将HTRM及对照载体转染VSMC细胞，通过细胞计数以及MTr两种方法检测细胞的增殖情况。结果NorthernBlot实验显示HTRM有两个转录本，2．4kb的转录本主要在心脏和骨骼肌中表达，1．35kb的转录本主要在胎盘中表达；亚细胞定位显示HTRM是一个胞浆蛋白；高表达HTRM可以轻微的促进VSMC细胞增殖。     

IC53基因多态性与脑卒中的关系

目的：研究我们实验室从人主动脉cDNA文库克隆的新基因IC53单核苷酸多态与脑卒中的关系。方法：利用序列测定方法对IC53基因在基因组水平对96例正常人及96例脑卒中病人进行小规模SNP筛选的结果为基础，确定IC53基因Exon14终止密码子下游第213个碱基的10586位点作为大规模筛查的对象，应用PCR，RFLP方法对1461例脑卒中患者（脑卒中患者按照CT诊断标准又分为血栓性脑梗塞、腔隙性脑梗塞和高血压性脑出血三组）和1056例非脑卒中患者（即对照组，入选标准为年龄差别不超过5岁未患脑卒中的健康人或医院内其他与脑血管疾病无关的其他病人）进行比较。结果：统计分析结果显示，脑卒中组三组病人中仅血栓性脑梗塞组与对照组之问基因型频率有显著性差异（P〈0．05见表），TT基因型比CT基因型、CC基因型具有更高的致病危险，CT基因型的OR值为1．361（95％CI 1．029．1．800）、TT型为1．553（95％CI 1.056．2．085）。同时，血栓性脑梗塞组分别与腔隙性脑梗塞，高血压性脑出血组基因型频率有显著性差异（P〈0．05）。结论：提示IC53基因10586位点多态性可能与血栓性脑梗塞病有关，TT基因型增加了血栓性脑梗塞的发生。     

中药马勃促大鼠成纤维细胞增殖的有效成分

目的通过实验筛选出马勃中促大鼠成纤维细胞增殖的有效成分。方法利用极性不同的溶剂分离提取马勃的主要组分,作用于体外培养的成纤维细胞,观测各组分对成纤维细胞生长的影响,筛选出作用最强的组分,并利用质谱等方法确定有效成分。结果 80%乙醇提取物对成纤维细胞增殖作用明显,并筛选出对成纤维细胞增殖作用较强的有效成分。结论分析得到其有效成分可能为萜类化合物。