P38MAPK信号转导通路在大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中的作用

目的:探讨大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中P38MAPK及Fas基因表达的变化.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;免疫细胞化学法观察大蒜素处理后细胞内磷酸化P38MAPK(P-p38MAPK)表达及分布变化;Western blot检测大蒜素处理前后细胞内P-p38MAPK和Fas蛋白表达量的变化.结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性.其72h中效浓度(IC_(50))为12.8 mg·L~(-1).Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加.免疫细胞化学法检测药物处理后P-p38MAPK表达增加,主要分布于细胞核与细胞浆,而阴性对照组仅弱表达.Western blot结果分析P-p38MAPK,Fas蛋白表达量随大蒜素浓度的增加而增加,呈剂量依赖性.其阴性组、72 h的1/2 IC_(50)组、IC_(50)组P-p38MAPK蛋白表达水平(相对灰度值)分别为0.259 8±0.013 2,0.361 2±0.008 3,0.505 6±0.005 5;Fas蛋白表达水平分别为0.287 4±0.008 9,0.426 8±0.007 9和0.597 1±0.010 9,差别均有显著性意义(P<0.01).结论:大蒜素可诱导THP-1细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能是通过激活P-p38MAPK/Fas途径实现.     

大蒜素对人横纹肌肉瘤RD细胞的作用及其机制

目的：探讨大蒜素（ allicin）对人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的作用及其相关机制。方法应用不同浓度大蒜素（5,10,20,30μg/ml）作用人横纹肌肉瘤RD细胞株24h,采用MTT比色法检测不同浓度大蒜素下RD细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测不同浓度大蒜素作用后RD细胞的凋亡率。结果 MTT比色法检测各实验组增殖抑制率分别为（25.82±1.75）%、（31.04±1.61）%、（36.32±1.61）%、（42.58±3.88）%;流式细胞仪检测对照组及各实验组凋亡率分别为（5.23±0.80）%、（7.07±0.83）%、（10.60±2.51）%、（15.70±1.79）%、（19.33±0.72）%。以上检测各组间比较差异均有统计学意义（ P<0.05）。结论大蒜素能有效抑制RD细胞的增殖,诱导其凋亡。     

鼻咽癌细胞中大蒜素抑制MAPK信号通路的作用机制研究

目的:探讨大蒜素导致鼻咽癌细胞G1/S期阻滞的分子机制。方法:采用MTT法测定细胞增殖活性;激酶活性分析测定MAPK激酶的活性;报道基因分析检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot法检测细胞周期蛋白CyclinD1的表达水平。结果:大蒜素呈浓度依赖性抑制鼻咽癌细胞增殖,细胞的存活率从100%降为52.8%(50μg/mL),P=0.0068;检测50μg/mL大蒜素处理时MAPK激酶的活性,发现其活性仅为未处理组的42.92%,说明大蒜素抑制了MAPK激酶活性;基因分析显示在大蒜素作用下,转录因子AP-1的转录活性也呈浓度依赖性的降低,从6.3×103U降低到3.8×103U(50μg/mL),P=0.0089,受AP-1调节的G1/S期调节蛋白CyclinD1的相对表达水平也从100%下降为32.2%。结论:大蒜素通过抑制MAPK信号通路而抑制转录因子AP-1的活性,从而下调CyclinD1表达,导致细胞G1/S期阻滞。     

大蒜素穴位注射治疗变应性鼻炎的实验研究

目的:探讨大蒜素穴位注射对变应性鼻炎大鼠相关指标的影响及其作用机理。方法:将36只SD大鼠造模成功后,随机分为大蒜素穴位注射组、大蒜素肌肉注射组、生理盐水穴位注射组、模型组,分别给予相应治疗,观察相关指标并进行分析。结果:大蒜素穴位注射组症状积分、鼻腔分泌物涂片和鼻黏膜切片嗜酸性粒细胞(EOS)计数较其它3组均明显下降(P<0.01),显效率为66.7%,总有效率为100%,较其它3组疗效显著(P<0.01)。结论:大蒜素穴位注射可以减少变应性鼻炎大鼠鼻腔分泌物、鼻黏膜中EOS的含量,改善临床症状,达到治疗变应性鼻炎的目的。     

大蒜素片对缺血性心脏病患者血浆GMP—140、TXB_2、6—K—PGF_(1α)、NO及血液流变学的影响

大蒜素片治疗组41例和消心痛治疗组26例冠心病心绞痛患者,比较其疗效,并观察治疗前后患者血浆GMP—140、TXB_2、NO及血液流变学等指标的变化。结果:大蒜素片对冠心病心绞痛的总有效率为85.4％,与消心痛基本相同,同时大蒜素片能明显降低患者血浆GMP—140、TXB_2的水平,升高患者血浆NO水平,并能显著改善患者的血液流变性。提示大蒜素片治疗冠心病心绞痛具有良好的疗效,其作用机理可能是抑制血小板活化,阻止血栓形成,扩张冠状动脉及外周血管,改善患者的血液流变性等。     

胃镜下局部注射大蒜素对进展期胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨胃镜下大蒜素局部应用对进展期胃癌的影响及作用机制。方法 进展期胃癌患者80例，胃镜及病理均证实为腺癌，分为两组；大蒜素组40例，术前48 h胃镜下病变处局部注射大蒜素，对照组40例局部注射生理盐水；手术切除胃癌组织，采用美国Becton Dickinson公司产的FACS-420型流式细胞仪检测，观察胃癌组织周期（G0/G1期、S期、G2/M期）各时相百分比、细胞凋亡率、增殖指数（proliferation index，PI），以及胃癌组织细胞凋亡相关基因（Fas、Bax、Bcl-2）蛋白表达。结果 大蒜素组与对照组细胞凋亡率（%）分别为9.60±1.52、2.20±0.58， G0/G1期（%）分别为72.12±8.35、69.56±5.15， G2/M期（%）分别为9.54±3.20、13.20±3.05，PI值分别为27.80±8.35、30.40±5.15；两组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；大蒜素组可增加凋亡促进基因Bax基因蛋白、凋亡始动基因Fas基因蛋白的表达（P＜0.05，P＜0.01），降低凋亡抑制基因Bcl-2基因蛋白的表达（P＜0.05）。结论 本项研究初步证明胃镜下局部注射大蒜素能够抑制进展期胃癌组织细胞生长、增殖，并促进胃癌细胞凋亡。     

大蒜辣素前体包芯片的制备

目的:制备大蒜辣素前体包芯片,使其口服后在短时间内促发酶促反应,生成大蒜辣素。方法:以蒜氨酸和蒜酶双层片为片芯,控酸颗粒为外层压制得到包芯片。并以人工胃液为介质小杯法考察包芯片大蒜辣素产率。结果:大蒜辣素前体包芯片在人工胃液中10 min内大蒜辣素产率>70%。结论:以蒜氨酸、蒜酶及控酸盐组合制备包芯片能够有效避免蒜酶在胃酸条件下失活,达到在体内获得较高产率大蒜辣素目的。     

大蒜质量标准中商榷内容的研究

目的:参照美国药典、欧盟药典和英国药典对2010版中国药典收载的大蒜薄层鉴别和含量测定等进行研究。方法:采用微波灭酶法处理样品,对大蒜药材进行薄层色谱鉴别;采用阳离子交换色谱柱,以磷酸盐缓冲溶液为流动相,流速0.5 mL.min-1,检测波长214 nm,测定大蒜药材中蒜氨酸含量。结果:不同产地大蒜药材的薄层色谱在与蒜氨酸和精氨酸对照品斑点Rf值相同的位置上,均检出相同的斑点。建立的蒜氨酸含量测定HPLC法,经方法学实验表明,蒜氨酸浓度在31.2～374.4μg.mL-1范围内呈良好线性关系(r=0.9999);低、中、高浓度平均回收率(n=9)分别为102.8%(RSD=4.0%),101.8%(RSD=3.0%),111.0%(RSD=3.8%)。结论:本研究建立了大蒜药材的薄层色谱鉴别和高效液相色谱含量测定方法,可用于大蒜药材的定性与定量分析,建议作为大蒜质量标准进一步研究的参考。     

大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响,进一步探讨大蒜素的脑保护机制。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为5组:假手术组(Sham组);缺血再灌注组(IR组);缺血再灌注+大蒜素10 mg/kg(All-10 mg)、20 mg/kg(All-20 mg)、30 mg/kg(All-30 mg)组,夹闭两侧颈总动脉8 min再灌注24 h建立大鼠全脑缺血再灌注模型,取海马组织硫堇染色观察海马组织学改变及存活神经元密度;免疫组织化学染色测定海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与Sham组相比,IR组海马CA1区神经元密度明显降低,Bax蛋白表达明显增加(均P0.05);与IR组相比,大蒜素处理各组海马CA1区神经元密度明显增多,Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax蛋白表达明显减少,其中以All-20 mg组变化最显著(均P0.05)。结论大蒜素可以通过影响凋亡相关蛋白的表达而抑制细胞凋亡,从而发挥脑保护作用。