三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察

目的为研究DNA条形码技术在中成药鉴定中的应用,以三七片为研究对象,对方法的适用性、专属性与精密度进行考察。方法收集15批次市售三七片样品,考察三七片DNA提取条件,并对"中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则"中PCR扩增、序列获得、结果判定等方法适用性进行确认;收集三七、人参、西洋参,制作三七片及其掺伪品,考察方法的专属性和重现性。结果三七片取样量100 mg,56℃水浴8 h所获得DNA的质量浓度平均值为60.7 ng/μL,PCR扩增、序列获得和结果判定均可获成功;三七、人参和西洋参的ITS2序列长度均为230bp,三七与人参、三七与西洋参的序列间均存在7个稳定的SNP位点,自制三七片和掺伪三七片均可成功获得ITS2序列,不同比例三七与人参、三七与西洋参的测序峰图在SNP位点处呈现相应峰高比的SNP套峰具备专属性;重复性、中间精密度和重现性考察符合《中国药典》2015年版(通则9101)相关要求。结论 ITS2序列作为DNA条形码能够稳定、准确鉴定三七片的原料药材,具备良好的专属性和精密度,三七片DNA条形码分子鉴定法将为保障三七片临床用药安全提供新的技术手段,并对《中国药典》其他收载单方制剂的鉴定提供参考。     

新型聚合物Soluplus制备水飞蓟素固体分散体及体外评价

目的 制备水飞蓟素固体分散体(SM-SD),提高水飞蓟素(SM)的溶出度.方法 采用溶剂法,以Soluplus为载体制备SM-SD,以累积溶出度为评价指标,筛选药物与载体比例,通过扫描电镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等对SM-SD进行物相表征.结果 筛选的药物载体比例为1:9,制备的SM-SD在120min时的累积溶出度可达59.14％,表征结果提示SM可能以无定形形态分散在载体中.结论 以Soluplus为载体的SM-SD可显著提高SM的溶出度.     

基于主成分分析的山玫胶囊质量评价

目的探讨主成分分析法用于山玫胶囊质量评价的可行性。方法将山玫胶囊的色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》软件中进行相似度评价,并用SPSS19.0进行主成分分析,计算综合主成分F值,再进行聚类分析验证,从而对山玫胶囊的质量进行综合评价。结果对山玫胶囊进行主成分分析,提取了5个主成分,对综合主成分F值进行排序,确定了10批山玫胶囊的质量优劣。聚类分析与主成分分析结果基本一致。结论本方法快速、准确,适用于山玫胶囊的质量评价。     

珊瑚菜Gl4CL 基因克隆与生物信息学分析

目的：对动物药材DNA提取方法进行优化,利用优化方法提取市售动物药材DNA并进行DNA条形码鉴定。方法：基于SDS法DNA提取原理,比较裂解液中不同EDTA浓度（0.025、0.25、0.5 mol·L-1）、是否含NaCl和Triton X-100等因素对不同用药部位动物药材DNA提取质量的影响,筛选得到最佳裂解液配方;使用优化的裂解液配方提取121份市售动物药材DNA并进行基原物种鉴定。结果：裂解液配方为1 % SDS、0.03 mol·L-1 Tris-HCl、0.25 mol·L-1 EDTA、0.2 mol·L-1NaCl对不同用药部位动物药材DNA提取效果最佳,并可实现对蝉蜕等提取困难样本DNA的提取;利用优化裂解液提取的121份市售动物药材DNA满足中药材分子鉴定后续实验要求,所有市售动物药材均可准确鉴定到基原物种。结论：本研究优化的裂解液配方可用于除壳类、分泌物类、加工品外不同用药部位动物药材的DNA提取,为动物药材分子鉴定提供了技术支持。     

不同居群野罂粟个体形态特征及访花昆虫行为观察

目的:野罂粟作为"咳欣康"与"咳喘宁"等中成药的主要成分被大量开发,野生资源数量急剧减少。本研究探讨不同地区野罂粟个体形态学差异及访花昆虫的类别与行为。方法:在野罂粟盛花期,选择不同生境的10个野生居群,采用经典的样方法与样带法结合定位观测研究花期野罂粟的株高、分埠数、莛数和叶片性状等7个生物学指标和访花昆虫的类别与行为特征的差异。结果:(1)在个体水平上,野罂粟生物学指标在居群内和居群间均表现出明显差异(P0.05),株高、分埠数、莛数和叶面积在不同居群间呈现极显著差异(P0.01);(2)访花昆虫有7目18科23种,其中鞘翅目(4科6种,占26.1%)、半翅目(4科5种,占21.7%)、双翅目(3科4种,占17.4%)、鳞翅目(3科4种,占17.4%)。结论:为了更科学的阐明药用植物的繁育机制、遗传背景、活性物质等关键问题,建议下一步开展野外定位观测结合环境控制试验,系统研究中草药的繁殖生物学过程和规律,预期成果将为优良中药品种繁育与栽培及其资源的科学评价提供参考依据。     

不同载体木犀草素固体分散体的制备及溶出度测定

目的:制备不同载体的木犀草素(LUT)固体分散体(SD),提高LUT的溶解度和溶出度,并探讨不同载体对药物溶解度和溶出度的影响。方法:应用平衡溶解度和超饱和溶液抑晶试验,筛选合适的载体材料并采用溶剂法制备SD;在单因素试验基础上,以药载比、温度和乙醇用量为影响因素,溶出度为指标,采用Box-Behnken设计优化处方和工艺;用差式扫描量热法(DSC)、扫描电镜(SEM)、X-射线衍射(XRD)以及傅里叶红外光谱(FTIR)对SD进行表征。结果:选择聚乙烯己内酰胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物(Soluplus^?)和共聚维酮(PVP/VA)为载体材料;最优条件为药载比1∶11,温度60℃,乙醇用量50 mL(Soluplus^?)或35 mL(PVP/VA);与原料药相比,2种SD溶解度分别提高42倍(Soluplus^?)和102倍(PVP/VA);120 min时2种SD的累积溶出度均达到95%;SEM、DSC和XRD表征结果显示,药物在SD中均以无定形态存在;IR结果显示,药物与载体之间存在氢键作用。结论:2种载体制...     

大黄对幼年雌性大鼠卵巢Bcl-2、Bax表达的影响及与煎煮时间的关系

目的观察长期灌胃大黄水提取物对幼年雌性大鼠卵巢Bcl-2、Bax表达的影响及与煎煮时间的关系。方法 4周龄雌性SD大鼠100只,随机分为正常对照组,大黄水浸剂0.5,1.0,2.0g·kg-1组,水煎10min 0.5,1.0,2.0g·kg-1组,水煎30min 0.5,1.0,2.0g·kg-1组。采用免疫组织化学法检测卵巢中Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与正常对照组比较,各给药组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。同种提取物不同剂量间比较,水浸剂2.0g·kg-1组Bcl-2蛋白表达率(0.3417±0.0406)显著低于0.5g·kg-1组(0.5012±0.0437)(P0.05),Bax蛋白表达率(0.3912±0.0426)显著高于0.5g·kg-1组(0.2491±0.0420)(P0.05);水煎10min 2.0g·kg-1、1.0g·kg-1组Bcl-2蛋白表达率(0.3374±0.0501)、(0.3511±0.0476)显著低于0.5g·kg-1组(0.4733±0.0456),Bax蛋白表达率(0.4034±0.0479)、(0.3844±0.0321)显著高于0.5g·kg-1组(0.2944±0.0412)(P0.05);水煎30min 2.0g·kg-1组Bcl-2蛋白表达率(0.4471±0.0512)显著低于0.5g·kg-1组(0.5103±0.0441)(P0.05),Bax蛋白表达率(0.3171±0.0434)显著高于0.5g·kg-1组(0.2204±0.0406)(P0.05)。不同提取物相同剂量间比较:水煎10min各剂量组Bcl-2蛋白表达率显著低于水浸各剂量组、水煎30min各剂量组相应剂量蛋白表达率,Bax蛋白表达率显著高于水浸各剂量组、水煎30min各剂量组相应剂量蛋白表达率(P0.05)。结论长期应用大黄可使幼年大鼠卵巢中Bcl-2蛋白表达率显著降低,Bax蛋白表达率显著升高,由此推定,大黄对卵巢中Bcl-2、Bax表达的影响与大黄的煎煮时间以及剂量有一定的相关性。     

赤雹根总皂苷对佐剂关节炎大鼠血清及足TNF-α,IL-1β,IL-6水平的影响

目的:观察赤雹根总皂苷对佐剂型关节炎大鼠血清及足跖中肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、白介素-6(TNF-α,IL-1β,IL-6)表达水平的影响,探讨赤雹根总皂苷治疗类风湿性关节炎的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、赤雹根总皂苷40、80、160 mg/kg剂量组和雷公藤多苷12mg/kg阳性对照组。除正常对照组外,其余各组大鼠均于右后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂0.1ml。造模18天后,各给药组均灌胃给予相应药物,连续21天。计算大鼠关节炎指数,酶联免疫法(ELISA)检测大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平,免疫组织化学法测定足跖以上三种因子蛋白表达水平。结果:赤雹根总皂苷剂量40、80、160mg/kg组大鼠关节炎指数分别为6.00±0.40、5.10±0.18、4.20±0.32均显著低于模型对照组7.20±0.32;血清中TNF-α水平分别为0.56±0.05、0.32±0.04、0.18±0.04 ng/ml均显著低于模型对照组0.98±0.08 ng/ml,IL-1β水平分别为0.29±0.02、0.17±0.01、0.13±0.01 ng/ml均显著低于模型对照组0.49±0.01ng/ml,IL-6水平分别为1.13±0.03、0.95±0.01、0.79±0.06 ng/ml均显著低于模型对照组1.58±0.04ng/ml;足跖中TNF-α蛋白表达水平分别为1.09±0.27、0.61±0.13、0.57±0.11 IOD均显著低于模型对照组2.17±0.34,IL-1β蛋白表达水平分别为1.13±0.32、0.65±0.22、0.63±0.24 IOD均显著低于模型对照组2.23±0.46IOD,IL-6蛋白表达水平分别为1.31±0.29、0.59±0.21、0.45±0.17 IOD均显著低于模型对照组2.49±0.38 IOD。结论:抑制TNF-α、IL-1β、IL-6水平及表达是赤雹根总皂苷治疗佐剂型关节炎的机制之一。     

赤雹根总皂苷对类风湿性关节大鼠NF-κB p65和IL-6表达的影响

目的:研究赤雹根总皂苷(TSTR)对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)活性的影响,探讨赤雹根总皂苷治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余大鼠用完全弗氏佐剂诱导佐剂性关节炎。将造模成功的大鼠随机分为赤雹根总皂苷40,80,160 mg/kg,雷公藤多苷12 mg/kg,模型对照组,每组10只。各给药组均灌胃给予相应药物,连续21天。计算大鼠足肿胀度和关节炎指数;ELISA法检测各组大鼠血清IL-6的含量;免疫组化法测定大鼠足跖组织NF-κB p65蛋白及足跖组织和脾脏IL-6蛋白表达水平;Western blot法检测大鼠足跖组织中NF-κB p65蛋白表达水平;RT-PCR法测定大鼠足跖部NF-κB p65mRNA、IL-6 mRNA的表达水平。结果:赤雹根总皂苷各剂量组大鼠组肿胀度和关节炎指数均显著低于模型对照组;血清中IL-6含量和IL-6蛋白表达水平及IL-6 mRNA的表达水平均低于模型对照组;足跖组织中NF-κB p65蛋白表达水平和IL-6 mRNA的表达水平均低于模型对照组。结论:抑制NF-κB和IL-6的表达是赤雹根总皂苷治疗类风湿性关节炎的作用机制之一。