METase在不同原核表达系统中的表达和活性比较

目的：构建L-蛋氨酸γ-裂解酶（Metase）基因的两种高效原核表达载体，建立最佳高效原核表达体系。方法：在Metase基因已经克隆的基础上，通过分子克隆技术构建两种重组表达质粒pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase,重组质粒转化感受态大肠杆菌Dh5α,诱导表达，测定Metase活性，统计分析比较。结果：成功构建出两种高效重组表达质粒pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase,经诱导后都能测出Metase活性。结果：重组表达质粒pBV220-Metase具有比pGEX-4T-1-Metase更强的活性，可作为Metase的高效表达体系。     

阻断大脑中动脉建立大鼠局灶性脑梗塞模型的观察

通过经颅阻断大鼠大脑中动脉制成局灶性脑缺血动物模型。大脑中动脉阻塞后大鼠均出现各种神经病学征象。氯化三苯基四氮唑染色发现梗塞区位于皮质及基底节。光镜和电镜观察大脑中动脉阻塞后脑组织的病理改变,发现梗塞区不同程度的细胞和间质变性坏死。结果表明该模型是比较理想的局灶性脑缺血模型.     

糖痹康颗粒调控AMPK/NF-κB通路改善糖尿病大鼠坐骨神经炎症反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调控腺苷活化蛋白激酶/核转录因子-κB（AMPK/NF-κB）通路对糖尿病大鼠坐骨神经炎症的影响。方法 SD大鼠高脂高糖饲料诱导连续8周后按单次35 mg·kg^-1链脲佐菌素（STZ）腹腔注射造模。成模后按体质量、血糖随机将大鼠分为模型组和各给药组、糖痹康颗粒低、中、高剂量组（0.625、1.25、2.5 g·kg^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1）,并设正常组。成模后持续给药干预12周。期间分别检测治疗前及治疗第4、8、12周大鼠的体质量、血糖水平及热痛阈;于给药第12周时取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）、劳克坚牢蓝（LFB）染色,扫描电镜观察坐骨神经超微结构变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠坐骨神经组织中AMPK、磷酸化（p）-AMPK、NF-κB的蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠造模后各时间点血糖浓度、热痛阈均显著升高（P<0.01）;坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达显著升高（P<0.01）,p-AMPK/AMPK蛋白表达显著降低（P<0.01）。经糖痹康颗粒治疗后,与模型组比较,糖痹康颗粒各组热痛阈明显降低（P<0.05,P<0.01）,坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;糖痹康颗粒高、中剂量组p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。坐骨神经形态学观察显示,糖痹康颗粒治疗后大鼠坐骨神经排列整齐度、致密程度、脱髓鞘变化均优于模型组。结论 糖痹康颗粒可以改善糖尿病大鼠坐骨神经功能、减轻神经炎症损伤,其作用机制可能与上调AMPK/NF-κB通路中AMPK的表达,抑制下游NF-κB表达,从而减轻因NF-κB激活引起IL-1β、TNF-α等炎症因子升高造成的神经炎症反应相关。     

两种不同补肾方法治疗去卵巢大鼠骨质疏松症的对比研究

目的：探讨评价中医药“活血补肾法”与“滋阴补肾法”治疗绝经后骨质疏松症的疗效作用。方法：以反应骨代谢状况的S—Ca，S—P，S—ALP，U—Ca，U—HYP，U—HYP／U—Cr，U—Ca／U—Cr等生化指标，E2、LH、CT等内分泌激素，以及股骨近端骨密度与子宫、肾上腺、股骨近端的组织形态学为观察指标，比较活血补肾的丹仙康骨胶囊与滋阴补肾的六味地黄丸对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响。结果：活血补肾的丹仙康骨胶囊比滋阴补肾的六味地黄丸更能有效的提高模鼠骨密度、降低U—Ca，U—P，U—HYP，U—HYP／U—Cr，U—Ca／U—Cr，同时能提高S—ALP，差异显著。在光镜下观察，活血补肾组、滋阴补肾组其肾上腺皮质、子宫内膜，固有腺体瘦缩都有所减轻，但两组无明显差别。活血补肾组比滋阴补肾组骨干预端软骨骨化较好，骨小梁变粗明显。结论：不同补肾方法对骨重建过程骨吸收与骨形成具有选择性差异。同滋阴补肾的六味地黄丸相比，活血补肾的丹仙康骨胶囊不仅能抑制骨吸收，还能促进骨形成，具有较好的抗骨质疏松作用。     

环磷酰胺在儿童风湿性疾病中应用

环磷酰胺(CTX)作为一种细胞毒性药物,被广泛应用于肿瘤化疗中。同时,由于其具有较强的免疫抑制作用,在自身免疫性疾病中也得到了越来越多的应用。近年来,CTX被用于儿童风湿性疾病,用以治疗较严重及有致命性的自身免疫性疾病,已取得较好的疗效。但可能产生的毒副作用是影响其临床应用的主要障碍。现对CTX的作用机制、目前在儿童     

树突状细胞在支气管哮喘发病机制中的作用

树突状细胞(DCs)作为功能最强的抗原递呈细胞,不仅能刺激初始型T细胞增殖,还能刺激已活化或记忆型T细胞。本文通过研究过敏性哮喘模型气道中DCs数量增加,提示DCs在支气管哮喘的发病机制中起重要作用,且DCs在以Th2反应增强为主要免疫病理改变中占重要地位。     

血液系统疾病中LRP15基因启动子区甲基化状态的研究

目的:探讨LRP15基因启动子区及第一外显子区的甲基化与血液系统疾病的关系和临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR方法检测了9例正常人、73例急性白血病患者、8例慢性髓系白血病患者、2例慢性淋巴细胞白血病、12例血液系统良性病患者骨髓LRP15基因启动子区及第一外显子区的甲基化状况;硫化修饰结合限制性内切酶分析及硫化测序验证了一例血液系统良性病患者LRP15基因启动子区及第一外显子区的甲基化。结果:AL患者LRP15基因甲基化阳性率(71.23%)高于正常供者及慢性白血病(10%),差异有统计学意义(P<0.05)。LRP15基因在非恶性血液病患者中甲基化阳性率(55.56%)高于正常供者,硫化修饰结合限制性内切酶分析及硫化测序进一步证实了上述结论。结论:LRP15基因启动子的甲基化与不成熟的白血病细胞有关,与血液系统良性疾病也有一定关系。     

幼年特发性关节炎患儿外周血Th细胞亚群变化

目的探讨幼年特发性关节炎(JIA)患儿外周血CD4 T淋巴细胞及其亚群CD4 CD45RA 、CD4 CD45RO 的表达及其临床意义。方法采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测36例JIA患儿外周血CD4 T淋巴细胞及其亚群CD4 CD45RA 、CD4 CD45RO 的表达,同期检测20例年龄、性别无差异的健康儿童为对照。结果JIA患儿外周血CD4 T淋巴细胞明显低于对照组(t=2.099,P<0.05),CD4 CD45RA T淋巴细胞数与对照组比较明显降低(t=3.450,P<0.01),CD4 CD45RO T淋巴细胞数明显升高(t=3.913,P<0.01),CD4 CD45RA T/CD4 CD45RO T比值明显降低(t=4.904,P<0.01);与对照组比较,JIA各亚型(全身型、多关节型、少关节型)的CD4 CD45RO T淋巴细胞数均明显升高,CD4 CD45RA T/CD4 CD45RO T比值明显降低(P<0.01);CD4 CD45RA T淋巴细胞数与正常对照组比较在全身型中显著降低(t=4.192,P<0.01);在多关节型中明显降低(t=2.214,P<0.05);在少关节型中稍有降低,但与对照组比较差异无显著性(t=1.793,P>0.05)。结论JIA患儿的免疫功能紊乱主要表现为CD4 T淋巴细胞及其亚群CD4 CD45RA T/CD4 CD45RO T失衡,这可能在JIA发病机制中起着重要的作用。     

教您如何远离颈椎病

正23岁的小李从事IT行业,每天在电脑前工作10个小时以上。当他感到颈肩部严重不舒服来就诊时,笔者给他做了详细的体格检查,然后安排照了片子。拿到片子结果后,对他说:你虽是20多岁的年龄,但从片子看,却是40多岁的颈椎,甚至可能许多40多岁人的颈椎比你的还要好。其实像小李这样的情况并不是个例,作为一个工作近20年的骨科医生,我亲眼目睹了颈椎病的发病人群越来越年轻化。以前每天想着都是如何治病救人,怎样把手术做好,但是现在我想的更多的是怎么才能降低颈椎病的发病率,让更多的人尤其是年轻人免受颈椎病的困扰。其实颈椎病主要是现代人     

重庆市3类职业人群心肺复苏认知现状

目的了解重庆市3类职业人群心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)认知现状及其影响因素。方法采用整群随机抽样的方法,在重庆市4个区的机关、事业单位、企业进行问卷调查,对CPR知识和态度进行描述性分析,并对其影响因素进行统计学检验。结果重庆市3类职业人群CPR知识总得分为(32.32±12.48)分,合格率为29.31%,其中开放气道与人工呼吸知识的合格率最低,为31.64%;CPR态度总得分为(23.87±4.36)分;听说过CPR、接受过CPR培训是职业人群CPR知识的影响因素(P<0.05);不同性别、文化程度、单位性质、工作岗位、自觉健康状况、自己是否患病、是否遇到过CPR的场合、是否听说过CPR、是否接受过CPR培训的职业人员CPR态度得分比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论重庆市3类职业人群CPR知识和实施CPR的态度积极性还需提高,今后相关单位应该有组织、有计划地开展普通职业人群CPR培训,并注重培训的方式和后续的复训,帮助普通职工获取更深入的CPR知识,改善CPR态度,助推院外第一目击者的施救成功率的提高。