内参基因β-actin质粒标准品的构建

为构建检测内参基因β-actin mRNA表达水平差异的标准品，以成人外周血细胞的总RNA为模板、Random 6 mers为引物反转录合成cDNA，用该cDNA为模板PCR扩增人β-actin基因相应的cDNA片段，构建PMD-18-β-actin重组质粒，鉴定测序后，用荧光定量PCR制作标准曲线。结果外周血提取的总RNA完整性良好，构建的β-actin质粒经PCR扩增后得到一186 bp的清晰条带，测序结果与目的片段完全一致，且质粒的原始浓度为2.39×1013 copies/mL，倍比稀释至2.0×104 copies/mL均能得到良好的标准曲线（R2=1），提示构建β-actin基因荧光定量PCR标准质粒成功。     

免疫比浊法测定D-二聚体假阳性病例干扰分析

摘要：目的 筛选 Ｄ－二聚体测试中出现假阳性的人群并进行干扰分析。 方法 采用不含有任何有效阻断成分的 Ｄ－二聚体试 剂（测试试剂，上海交通大学医学院附属苏州九龙医院检验科和苏州希肯公司合作制备）和含有阻断成分的 Ｄ－二聚体试剂 （苏州希肯公司市售试剂）对 ２０２０ 年 ４ 月至 ２０２０ 年 ８ 月间的临床凝血样本进行盲测，筛选出检测结果不一致的样本。 再用西 门子公司试剂（免疫比浊法）作为第三方试剂进行复测验证，对疑似假阳性样本倍比稀释后检测以确认干扰，并对其年龄、临 床症状等数据进行综合分析。 结果 共测试患者样本数为 ６ ４３６ 例，其中剔除 １３５ 例重复样本后，结果不一致样本经稀释试 验共筛选出干扰样本 ５９ 例。 其中，年龄在 ６０ 岁以上的患者 ３８ 例，占 ６４．４％；炎症的样本 ３０ 例，占 ５０．８％；类风湿因子（ＲＦ）阳 性样本 １０ 例，占 １６．９％。 结论 免疫比浊法测定 Ｄ－二聚体出现假阳性的情况多发生于 ６０ 岁以上、炎症相关疾病患者，建议 采用特异性较好的试剂盒以减少假阳性的发生。     

阿莎希丝孢酵母菌感染2例

阿莎希丝孢酵母菌（Trichosporon asahii）隶属于真菌纲、担子菌门、担子菌亚门、担孢目、皮肤丝孢酵母科毛孢子菌属,是条件致病菌,多分离自内源性免疫缺陷患者和肝炎病人血液中,也有引起哺乳动物白毛结节的报道[1],国外报道多引起血液病、恶性肿瘤、免疫缺陷、白细胞减少症等患者的皮肤或血行感染,国内曾有阿莎希丝孢酵母致导管相关感染[2]、阿萨希毛孢子菌非系统播散性感染等报道[3],但导致颅内感染的报道未检索到。近期我院自导管相关感染和颅内感染患者分离出阿莎希丝孢酵母菌各1例,报告如下。     

子宫肌瘤和肌壁组织B7-H3 mRNA表达水平及意义

目的探讨子宫肌瘤患者肌瘤组织和正常子宫肌壁B7-H3 mRNA的表达水平及其在子宫肌瘤患者发病中的作用。方法利用逆转录多聚酶链反应法和实时荧光定量PCR法检测44例子宫肌瘤患者的肌瘤组织和正常子宫肌壁的B7-H3 mRNA表达水平。结果子宫肌瘤的肌瘤组织表达的B7-H3 mRNA高于正常子宫肌壁。结论子宫肌瘤组织高表达B7-H3 mRNA,B7-H3 mRNA高表达可能与子宫肌瘤发生发展有关。     

活动期类风湿性关节炎患者外周血CD4+T 细胞的表型分析

目的分析活动期类风湿性关节炎(RA)患者外周血CD4+T淋巴细胞的表型变化,探讨其免疫病理机制.方法采用ELISA和双标记免疫荧光法检测47例活动期RA患者和50例健康成人外周血CD4+T细胞表面CD154、CD69的表达以及血清、血浆可溶性CD154(sCD154)的含量.结果活动期RA患者的外周血CD4+T细胞CD154(16.7%±8.1%)和CD69(13.9%±7.1%)的表达水平均显著高于健康人,其血清sCD154(18.43±6.27,ng/ml)和血浆sCD154(8.34±3.42,ng/ml)含量亦分别高于健康人血清sCD154(9.56±4.71,ng/ml)和血浆sCD154(2.98±1.13,ng/ml).结论CD4+T细胞表达的CD154、CD69以及血浆sCD154含量与RA的病程密切相关,可以成为RA的辅助诊断、疗效估价和预后判断的有价值的实验室参数.     

阻断型CD154抗体和CD80抗体生物学作用的研究

为比较阻断型抗人CD154单克隆抗体(1B1)和抗人CD80单克隆抗体(3H8)的单独及联合应用在调节CD4+T细胞对同种抗原的初次和再次免疫应答中的作用。采用免疫磁珠阴性选择法分离获得人外周血CD4+T细胞、将纯化的CD4+T细胞与刺激细胞体外共培养,通过检测培养上清IL-2、IFN-γ水平以及CD4+T细胞的增殖来评价1B1和3H8的生物学作用。结果显示,1B1和3H8单独或联合应用能不同程度地抑制混合淋巴细胞反应中CD4+T细胞对同种抗原刺激的增殖,下调CD4+T细胞分泌IL-2和IFN-γ,并且在再次反应中能有效诱导CD4+T细胞对同种抗原的免疫低反应性。因此,1B1和3H8的单独及联合应用在移植排斥的免疫干预及同种抗原免疫耐受的诱导中具有潜在的应用前景。     

白细胞介素15和骨桥蛋白在大鼠肾移植急性排斥反应早期的表达

目的 研究白细胞介素(IL)15、骨桥蛋白、穿孔素及颗粒酶B在大鼠肾脏移植急性排斥反应(AR)早期的表达变化.方法 以BN大鼠和LEW大鼠分别作为供受体,建立大鼠肾移植动物模型.环孢素A处理组(CsA组):(BN→LEW,术后注射环孢素A);IL-15阻断组:(BN→LEW,术后注射IL-15抗体);AR组:(BN→LEW,术后注射生理盐水);对照组:(LEW→LEW,术后注射生理盐水).对照组6只大鼠,其余组10只大鼠,于移植后1、3、5、7 d取外周血,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测骨桥蛋白、IL-15、穿孔素及颗粒酶B mRNA的表达,并作移植肾病理分析.结果 AR组、CsA组及IL-15阻断组肾移植术后IL-15、骨桥蛋白mRNA表达逐渐上调,第5天均达到高峰;对照组均处于低水平.术后第5天,CsA组和IL-15阻断组IL-15 mRNA分别为9685±1440、4346±741均低于AR组(17 022±2153,P<0.01),IL-15阻断组明显低于CsA组(P<0.01);CsA组和IL-15阻断组骨桥蛋白mRNA分别为13 226±1565、19 112±2908均低于AR组(24 663±2449,P<0.01),IL-15阻断组明显高于CsA组(P<0.01).术后第5天IL-15阻断组和CsA组穿孔素和颗粒酶B mRNA表达明显低于AR组(P<0.01).移植肾病理组织检查显示,AR组呈现重度急性排斥反应,IL-15阻断组排斥反应征象轻微.结论 大鼠肾移植AR发生早期骨桥蛋白、IL-15、穿孔素和颗粒酶B mRNA在外周血中均高水平表达,通过阻断IL-15/IL-15受体途径可明显下调颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达.     

两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究

目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能。结果 :经表型分析、Westernblot和竞争抑制试验 ,证实mAbB1、mAb4F1是识别人CD4 0L分子的特异性单抗 ,且识别的位点不同 ;mAbB1、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD4 0L TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应。结论 :成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD4 0L单克隆抗体的杂交瘤 (1B1、4F1) ,这两株单抗对CD4 0L的生物学功能具有明显的阻断作用 ,为阻断型单抗