破骨细胞分化因子诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞的实验研究

目的:探讨破骨细胞分化因子(ODF)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)联合应用进行体外诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞(OC)的能力。方法:收集5～6周小鼠骨髓细胞,在含M-CSF(10 ng/ml)的α-MEM全培养液中培养24h,然后将悬浮生长的细胞接种到24孔培养板,并加入不同浓度的ODF和M-CSF。,通过观察抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色的阳性细胞和能否在骨磨片上形成吸收陷窝来鉴定OC形成情况。结果:在只加入ODF或M-CSF一种细胞因子时,未见有TRAP阳性或CTR阳性细胞形成,同时加入ODF和M-CSF,可形成典型的OC。TRAP阳性多核细胞的数目和培养液中钙离子浓度的增加与ODF的浓度呈正相关。结论:小鼠骨髓来源的单核细胞在ODF和M-CSF共同作用下可形成具有骨吸收功能的OC,为体外研究OC的分化发育和功能调节提供了一种新的方法。     

大鼠牙龈组织表达护骨因子和护骨因子配体

目的 观察成年大鼠牙龈组织是否表达护骨因子（Osteoprotegerin,OPG)和护骨因子配体（Osteoprotegerin Ligand,OPGL)，为进一步探讨二者在牙龈组织中表达的生理及病理意义奠定基础。方法 提取成年大鼠牙龈组织总RNA，应用特异引物通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增目的片段，并将其插入pGEM-T载体，测序鉴定。结果 测序表明扩增出的二个目的片段DNA序列与文献报道一致，即为护骨因子和护骨因子配体，护骨因子在大鼠虎龈组织表达水平较高，而护骨因子配体表达水平较低。结论 大鼠虎龈组织表达护骨因子和护骨因子配体，二者表达的相对水平对维持牙槽骨局部骨形成与骨吸收的平衡可能有重要意义。     

血脂水平在长时期内的生物学变异

目的：探讨我国人血脂水平的长期个体内生物学变异情况。方法：在多年从事血脂标准化研究及参加国际血脂标准化计划基础上长期测定一相对稳定人群的血脂水平，分析其中23例1年多次及100例10-15年间每年1次血脂测定结果。结果：两组病例血脂水平的个体内总变异（包括生物学变异和分析变异）大致为，总胆固醇10％，甘油三酯28％，低密度脂蛋白胆固醇18％，高密度脂蛋白胆固醇16％。结论：血脂指标，尤其是甘油三酯有较大生物学变异，临床上判断血脂水平高低时需考虑到生物学变异的存在，并采取适当措施减小生物学变异。     

老年人跌倒研究的现状及进展

1987年Kellogg国际老年人跌倒预防工作组将跌倒定义为：无意图的摔倒在地上或一些更低的平面上，但不包括暴力、意识丧失、偏瘫或癫痫发作所致的跌倒。Kellogg定义适合于以确定导致神经元损伤及平衡控制功能损伤的相关因素为目的的研究，有一定的局限性。为了更广泛地探讨跌倒的危险因素、制定预防跌倒的对策，很多研究者都将某些急慢性疾病、意识紊乱所致的跌倒也包括在内。所以，只要是出现突发的、不自主、     

胚胎干细胞向心肌细胞的分化

目的：了解国内外在胚胎干细胞向心肌细胞分化的机理及其应用潜能等方面的研究现状。资料来源：应用计算机检索Medline，检索时间为1997／2005，检索词限定为“embryonic stem cell，cardiomyocyte／cardiac myocyte．differentiation”，并限定语言种类为英文。资料选择：对所检索到的文献进行初审，纳入标准：符合胚胎干细胞向心肌细胞分化的文章。排除标准：重复性研究。资料提炼：共查找文献200余篇，筛选出26篇。资料综合：收集到多篇关于胚胎干细胞分化为心肌细胞的文章，从最初获得胚胎干细胞源性心肌细胞的实验方法的建立到在单细胞水平对胚胎干细胞源性心肌细胞进行电生理研究。进一步，很多研究者从转录因子的角度研究了控制心脏发育的转录因子在胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中的表达，研究表明心脏转录因子GATA4、肌细胞增强因子2C和NKx2．5控制着心脏基因的表达，它们在心脏发生过程中发挥重要的转录调控作用。研究同时发现，钙调神经磷酸酶信号通路、MAPK信号通路以及其他信号通路参与了心肌细胞分化的调节。此外，从胚胎干细胞纯化分化的心肌细胞用于治疗心肌梗死亦是一个关键问题。结论：当胚胎干细胞以胚小体的形式在没有白血病抑制因子的条件下培养时，一些干细胞可以分化成心肌细胞。干细胞来源的心肌细胞表达一些收缩蛋白，如MHC和肌球蛋白轻链-2V。转录因子GATA4、肌细胞增强因子2C和NKx2．5在心肌细胞分化中发挥重要作用，并且可以触发特异基因如α-肌动蛋白、MHC和肌球蛋白轻链-2V的表达，然而，胚胎细胞向心肌细胞分化的分子机制还有待进一步研究，鉴别出促进心脏分化的因子是研究心脏分化的基础所在。     

血脂和脂蛋白及载脂蛋白检测的标准化

心血管病流行病学研究需要对人群的血脂水平作国际间与地区间的横向比较，同一人群的血脂纵向研究、多中心协作研究及临床疗效观察中都需要血脂测定做到标准化。临床上需要制定血脂的合适水平或异常水平的划分标准、治疗指针及治疗目标，危险因素干预建议采用统一（至少在同一国家内）血脂水平划分方案，而且不同划分水平之间的差距不是很大，这就要求血脂测定达到一定的准确度。目前临床上普遍使用生化自动分析仪和商品试剂盒测定血清总胆固醇（TC）或甘油三酯（TG），测定的精密度较过去有很大提高。但有数据表明临床实验室测定结果的可比性仍不能满足临床要求，主要原因在于不同分析系统测定的准确性问题。如何提高和保证临床检验的准确性，使不同方法、不同厂家、不同实验室的检验结果具有可比性，是迫切需要重视和解决的重要课题。血脂测定标准化并非要求统一测定方法，而是实验室之间对同一批标本的血脂测定值取得基本一致，要求测定值落入在可允许的不精密度（CV）及不准确度（偏差）范围内，表1。     

血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质的研制

目的 研制与临床标本基质相似的血清总胆固醇(TC)、总甘油(TTG)、游离甘油(FG)和甘油三酯(TG)标准物质.方法 按国家标准物质技术规范的要求,制备4种血脂浓度的健康人新鲜混合血清,用酶法测定TC检测均匀性,用HPLC法检测稳定性并定值,评估不确定度.结果 4种血清均匀性检验数据方差分析P值分别为0.339、0.212、0.275、0.196(均＞0.05),说明均匀性良好;稳定性研究结果显示4种血清TC和TG在-20℃保存至少可稳定4年;4种血清的标准值和不确定度TC分别为(5.110±0.064)mmol/L、(4.761±0.062)mmol/L、(3.941±0.050)mmol/L和(3.158±0.041)mmol/L;TTG分别为(2.212±0.043)mmol/L、(1.679±0.033)mmol/L、(1.275±0.027)mmol/L和(1.067±0.023)mmol/L;FG分别为(0.142±0.005)mmol/L、(0.149±0.004)mmol/L、(0.146±0.003)mmol/L和(0.122±0.003)mmol/L;TG分别为(2.069±0.043)mmol/L、(1.530±0.033)mmol/L、(1.129±0.027)mmol/L和(0.945±0.023)mmol/L.结论 研制的血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质均匀性和稳定性良好,定值可靠,已被国家质量监督检验检疫总局发布为国家一级标准物质(GBW 09145、GBW 09146、GBW 09147、GBW 09148).     

甘油标准物质的研制

目的 研制浓度适宜、便于保存和使用的甘油水溶液标准物质.方法 参照一级标准物质技术规范(JJG 1006-1994)及有关技术文件,制备适当浓度的甘油水溶液,HPLC法进行均匀性和稳定性检验,滴定法测定该溶液的甘油含量.结果 (1)甘油溶液均匀性检验:3次测量结果的x-±s分别为1.297 5±0.014 3、1.302 0±0.008 9、1.313 7±0.007 8,经方差分析,差异无统计学意义(F=11.462,P=0.166),说明甘油溶液分装均匀.(2)4℃保存至少稳定4年,定值为0.103 6 g/g,不确定度为0.000 4 g/g.结论 研制的甘油标准物质符合国家一级标准技术要求.已于2006年5月被国家质量监督检验检疫总局批准为国家一级标准物质(GBW 09149).     

丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验

目的：观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化，以及丹参红花提取物的干预作用。 方法：实验于2005-11／2006—05在卫生部老年医学重点实验室完成。取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞，分为：①正常对照组。②无血清培养组：用无血清培养基培养24h。③低密度脂蛋白处理组：以含有800mg／L低密度脂蛋白的培养基培养16h。④丹参红花提取物预处理组：用丹参红花提取物（商品名丹红滴注液，由陕西步长集团提供浓缩液，国药准字号Z 20026866／Z 20026867）预处理24h后加入800mg／L低密度脂蛋白继续培养16h或在无血清培养基中培养24h。以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响；应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4mRNA水平；用流式细胞仪分析细胞凋亡率；并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量。 结果：①低密度脂蛋白处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍，1.2倍和4倍。②无血清培养组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1．4倍、1．6倍和3倍。③丹参红花提取物预处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0．4倍，0．5倍和0．2倍。④丹参红花提取物组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0．2倍、0．5倍和0．6倍。 结论：丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4 mRNA表达水平，从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡，对内皮细胞起到很好的保护作用。     

AGTR1基因A10208G位点多态性与宁夏地区2型糖尿病与健康人的相关性

目的:糖尿病与心血管疾病可能存在着共同的遗传基础,AT1基因可能是心血管疾病与糖尿病共同的候选基因,人类编码AT1受体基因是AGTR1基因。分析2型糖尿病与健康者AGTR1基因A10208G位点多态性与胰岛素抵抗和β细胞功能之间的关系。方法:选择2005-03/2007-03于银川市第一人民医院内分泌科住院新诊断的2型糖尿病患者127例,符合1999年WHO糖尿病诊断标准,男68例,女59例,平均(54.86 11.05)岁,伴有腹型肥胖的2型精尿病患者105例,不伴有腹型肥胖的2型糖尿病患者22例,所有患者均自愿参加本实验,实验经医院伦理委员会批准。健康对照组人群来自宁夏地区的健康志愿者224名,男117名,女107名,平均(56.68 11.39)岁。所有对象均无血缘关系,且两组人群在性别和年龄上均匹配,各项参数之间无统计学意义。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析105例伴有肥胖2型糖尿病患者,22例不伴肥胖的2型糖尿病患者及224例健康对照者AGTR1基因A10208G位点多态性,并测定相应生化指标进行分析。结果:351名受试者均进入结果分析。①腹型肥胖糖尿病组AGTR1基因A10208G位点基因型分布和等位基因频率与健康对照组比较有统计学意义(基因型:x~2=10.85,P<0.01;等位基因:x~2=5.57,P<0.05)。②腹型肥胖糖尿病组携G等位基因患者Homa-IR、Homa-β明显高于非腹型肥胖糖尿病组携G等位基因患者(P<0.05)。结论:①AGTR1基因A10208G位点多态性与2型糖尿病存在相关性,尤其是伴有腹型肥胖的2型糖尿病患者。②AGTR1基因A10208G位点A→G的突变可能参与胰岛素抵抗和胰岛β细胞分泌功能损伤。