霍乱弧菌溶原性噬菌体CTXΦ的氯霉素抗性基因标记及诱导

目的　对携带霍乱毒素基因的溶原性噬菌体CTXΦ进行遗传标记 ,以深入研究CTXΦ对霍乱弧菌的转染机制。方法　将CTXΦ基因组中ctxAB的上下游同源序列连接到cat基因的两侧 ,然后通过自杀质粒介导的DNA同源重组技术将霍乱菌株N16 96 1染色体上CTXΦ基因组中的ctxAB基因缺失掉 ,替换以氯霉素抗性基因 ,对CTXΦ基因组进行遗传标记 ,然后用丝裂霉素C诱导这种经抗性基因标记的噬菌体 ,再利用它对古典型霍乱弧菌的转染检测活性。结果　获得了ctxAB缺失、带有cat遗传标记的重组菌株N Φc;诱导出的CTXΦc噬菌体颗粒成功感染了霍乱菌株 1119。结论　N Φc中的CTXΦ带有了氯霉素抗性标记 ,诱导出具有感染活性的CTXΦc可用于研究毒力基因的水平转移     

PCR方法在出血性大肠杆菌O157:H7诊断中的应用

自1982年首次在美国引起出血性肠炎爆发以来,肠出血性大肠杆菌O157:H7(entero-hemorrhagic E.coli O157:H7,EHECO157:H7)已经成为世界性的重要的公共卫生和食品安全问题,曾在日本、美国、加拿大等国造成了暴发流行和大规模食物中毒事件.估计目前在美国每年可造成大约70000人感染.     

徐州市2000年肠出血性大肠埃希菌O157：H7感染性腹泻的调查

目的 了解徐州市丰县和铜山县肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7引起的出血性结肠炎（HC）在腹泻病患者中所占的比例，以及临床症状和肾功能变化的情况。方法 使用EHECO157胶体金快速检测试剂筛选粪便标本，阳性者使用免疫磁珠方法分离病原菌。对经过细菌学证实的EHECO157：H7引起的HC患者，进行临床症状的观察和生化检验指标分析。结果 2000年5月份，丰县由EHECO157：H7引起的HC占腹泻病患者0.98%，6月份铜山县的HC患者占腹泻病患者5.89%。在出现腹泻病症状的同时，18.5%患者的肾功能已经出现异常，表现为尿蛋白，血清肌苷或血尿素氮等指标的升高，在27例HC患者中，有14和13例分别分离到不产生志贺毒素和产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株，根据分离菌株是否产生志贺毒素将患者分为两组进行比较，尿蛋白阳性患者的比例分别为4/13和1/14，血小板减少患者的比例分别为6/13和3/14，统计学分析有显著意义。提示分离到产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株的患者，发生肾功能异常的可能性较大，结论 此次调查证实了EHECO157：H7感染所引起的HC在整个腹泻病患者中所占的比例随季节的变化而不同，感染产生志贺毒素EHECO157：H7菌株的患者，发生肾功能异常的可能性要比不产生志贺毒素的大，还证实了在该菌感染的初期，患者的肾功能就已经出现了异常。     

徐州市2000年肠出血性大肠埃希菌O157∶H7感染性腹泻的调查

目的　了解徐州市丰县和铜山县肠出血性大肠埃希菌 (EHEC)O15 7∶H7引起的出血性结肠炎 (HC)在腹泻病患者中所占的比例 ,以及临床症状和肾功能变化的情况。方法　使用EHECO15 7胶体金快速检测试剂筛选粪便标本 ,阳性者使用免疫磁珠方法分离病原菌。对经过细菌学证实的EHECO15 7∶H7引起的HC患者 ,进行临床症状的观察和生化检验指标分析。结果　 2 0 0 0年 5月份 ,丰县由EHECO15 7∶H7引起的HC占腹泻病患者 0 .98% ,6月份铜山县的HC患者占腹泻病患者5 .89%。在出现腹泻病症状的同时 ,18.5 %患者的肾功能已经出现异常 ,表现为尿蛋白、血清肌苷或血尿素氮等指标的升高。在 2 7例HC患者中 ,有 14和 13例分别分离到不产生志贺毒素和产生志贺毒素的EHECO15 7∶H7菌株。根据分离菌株是否产生志贺毒素将患者分为两组进行比较 ,尿蛋白阳性患者的比例分别为 4 / 13和 1/ 14 ,血小板减少患者的比例分别为 6 / 13和 3/ 14。统计学分析有显著意义。提示分离到产生志贺毒素的EHECO15 7∶H7菌株的患者 ,发生肾功能异常的可能性较大。结论　此次调查证实了EHECO15 7∶H7感染所引起的HC在整个腹泻病患者中所占的比例随季节的变化而不同 ,感染产生志贺毒素EHECO15 7∶H7菌株的患者 ,发生肾功能异常的可能性要比不产生志贺     

嗜酸乳杆菌对链霉素处理小鼠感染大肠杆菌O157：H7的预防和治疗作用的观察

目的 观察嗜酸乳杆菌对小鼠感染大肠杆菌0157：H7的可能治疗作用。方法 使用口服链霉素处理的BALB／c小鼠为模型，在大肠杆菌0157：H788-2364感染前或后，在不同时间经口给以嗜酸乳杆菌LAI，观察试验小鼠的临床症状、肠道和肾脏的病理改变、排菌时间以及粪便中志贺毒素对Vero细胞的毒性作用等。结果 发现口服嗜酸乳杆菌可以明显降低感染了大肠杆菌0157：H7小鼠的死亡率，降低通过粪便排泄病原菌的时间，以及降低粪便标本对Vero细胞的毒性作用。结论 口服嗜酸乳杆菌对感染大肠杆菌O157：H7的小鼠有预防和治疗作用。     

El Tor型霍乱弧菌口服活疫苗候选株IEM108的构建

目的 构建能够诱导抗菌抗毒素免疫和抵抗CTXΦ转染的霍乱弧菌生物安全性口服活疫苗候选株。方法 以不产毒的EI Tor型霍乱弧菌疫苗候选株IEMl01为出发菌株，以管家基因thyA为选择压力，在IEMl01的thyA基因缺失株IEMl01-T中，通过质粒．染色体致死平衡系统表达霍乱毒素B亚单位基因ctxB和介导CTXΦ噬菌体免疫的rstR基因。在家兔模型中，通过检测血清杀弧菌抗体和抗CTB的IgG抗体来评价该新建疫苗候选株的免疫原性；以对家兔攻毒试验后肠段积液量来评价其保护力。结果 含ctxB、rstR和大肠杆菌来源的thyA基因的重组质粒在：IEMl01-T中稳定存在，GMI-ELISA检测ctxB基因能够很好表达。动物试验表明，该新建疫苗候选株能刺激机体产生高滴度的血清杀弧菌抗体和抗CTB IgG抗体，能较好抵抗至少4μg纯品CT和不同毒株的攻击。结论 应用质粒．染色体致死平衡系统构建了能抵抗CTXΦ转染和稳定表达ctxB的生物安全性抗菌抗毒口服活疫苗候选株，其在家兔模型中有较好的免疫原性和保护力。     

产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7的亚碲酸钾抗性基因簇分布和抗性水平

目的 了解产志贺毒素大肠杆菌O157：H7的亚碲酸盐抗性基因簇的分布和抗性水平的关系。方法运用PCR和核酸杂交方法进行基因检测，使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平。结果在所检测的志贺菌、沙门菌、霍乱弧菌、耶尔森菌、泌尿道致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠黏附性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌中，只有大肠杆菌O157：H7具有ter(tellurite resistance，ter)基因簇。所检测的34株产志贺毒素的大肠杆菌O157：H7有33株具有ter基因簇，所检测的18株不产生志贺毒素的大肠杆菌O157，4株具有ter基因簇，但是没有该毒力岛的其它基因。ter基因阳性的33株菌中，亚碲酸钾的抗性水平一般较高，4株在750μg/ml以上，19株为500～750μg/ml，10株为250～500μg/ml；而4株ter基因簇阴性的菌株，也表现了高水平的耐药性，其抗性水平均为500～750μg/ml。其它ter基因簇阴性的菌株，20株耐药性为5～10μg/ml，1株10～20μg/ml，6株20～50μg/ml，2株50～100μg/ml，1株100～250μg/ml。结论ter基因簇在产志贺毒素的大肠杆菌O157：H7中高频率存在，而在其它病原菌中没有检测到。高水平的亚碲酸钾抗性可以作为选择性分离产志贺毒素大肠杆菌O157：H7的指标之一。     

肠出血性大肠埃希菌O157：H7引起的溶血性尿毒综合征患者血清抗体调查

目的 对1999年某地出现的一批先有腹泻病症状后继发急性肾功能衰竭（肾衰）的患者进行血清学调查和诊断。方法 使用基因克隆表达纯化的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）-溶血素（Hly)和EHECO157脂多糖（LPS）为抗原，对采集自42例肾衰患者的血清标本进行蛋白印记试验。结果 EHEC-Hly的检测发现，IgG抗体阳性21份，阳性率50.0%；IgM抗体阳性16份，阳性率38.1%；在11份标本中同时检测到IgG和IgM抗体，阳性率26.2%；检测到IgG或IgM抗体阳性的标本26份，阳性率61.9%，EHECO157LPS的检测发现，24份标本分别检测到IgG和IgM抗体，阳性率各为57.1%；在29份标本中检测到IgG或IgM抗体，阳性率69.0%;在20份标本中检测到IgG和IgM抗体，阳性率47.6%，在42份血清标本中同时检测到EHEC-Hly和O157LPS的特异性抗体的标本22份，阳性率52.4%；检测到EHEC-Hly或O157LPS的特异性抗体的标本34份，阳性率81.0%。结论 结合细菌学和血清学诊断结果，临床症状和流行病学分析。可以认为这些患者感染了EHECO157：H7，在分离不到病原菌的情况下，检测患者血清标本的EHEC-Hly和/或EHECO157LPS的特异性抗体，不失为一种可以考虑的诊断方法。     

志贺氏菌、沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌O157：H7缺失基因分析

新发传染病的发生与微生物进化和社会、环境等因素有关。微生物进化是导致新的病原体出现的内在因素。过去认为，缓慢进化是发生新的病原体的主要力量，需要时间比较长。现在发现，细菌可以在短时间发生大片段基因的获得和缺失。发生“飞跃”。也就是说，基因的获得或丢失，可以在短时期内产生许多新的突变株。其中一部分可以是病     

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7引起的溶血性尿毒综合征患者血清抗体调查

目的　对 1999年某地出现的一批先有腹泻病症状后继发急性肾功能衰竭 (肾衰 )的患者进行血清学调查和诊断。方法　使用基因克隆表达纯化的肠出血性大肠埃希菌 (EHEC) -溶血素(Hly)和EHECO15 7脂多糖 (LPS)为抗原 ,对采集自 4 2例肾衰患者的血清标本进行蛋白印记试验。结果　EHEC Hly的检测发现 ,IgG抗体阳性 2 1份 ,阳性率5 0 .0 % ;IgM抗体阳性 16份 ,阳性率38.1% ;在 11份标本中同时检测到IgG和IgM抗体 ,阳性率2 6 .2 % ;检测到IgG或IgM抗体阳性的标本 2 6份 ,阳性率 6 1.9%。EHECO15 7LPS的检测发现 ,2 4份标本分别检测到IgG和IgM抗体 ,阳性率各为 5 7.1% ;在 2 9份标本中检测到IgG或IgM抗体 ,阳性率6 9.0 % ;在 2 0份标本中检测到IgG和IgM抗体 ,阳性率4 7.6 %。在 4 2份血清标本中同时检测到EHEC Hly和O15 7LPS的特异性抗体的标本 2 2份 ,阳性率 5 2 .4 % ;检测到EHEC Hly或O15 7LPS的特异性抗体的标本 34份 ,阳性率81.0 %。结论　结合细菌学和血清学诊断结果、临床症状和流行病学分析 ,可以认为这些患者感染了EHECO15 7∶H7。在分离不到病原菌的情况下 ,检测患者血清标本的EHEC Hly和 /或EHECO15 7LPS的特异性抗体 ,不失为一种可以考虑的诊断方法