五例恙虫病东方体感染基因型及其基因变异

目的旨在了解浙闽地区人群恙虫病东方体感染的基因型,并分析其基因变异。 方法从浙闽地区5例散发恙虫病发热期患者血中分离病原体并进行细胞培养;提取感染细胞DNA,巢式PCR扩增完整恙虫病东方体56-kD型特异性抗原（TSA）基因和热休克蛋白基因（groESL）并测序;采用MEGA 7.0软件,进行序列比对和系统发育分析。 结果病原学确认5例恙虫病患者,并分离到恙虫病东方体菌株。序列比对表明,5菌株中有2株的56-kD TSA基因和groESL基因100%一致,另2菌株的此二个基因序列一致性亦为100%,分别将两组菌暂时命名为浙江-1型和浙江-2型。56-kDa TSA基因比对和系统发育分析表明,浙江-1型和浙江-2型分别与台湾-A基因型和Gilliam-C基因型亲缘较近（98.45%和98.50%）,但有明显变异;另1株菌Wuj/2014与台湾-A基因型高度相似（99.94%）。56-kDa TSA基因各基因型支系的时间树分析表明,台湾-A基因型、浙江-1型和浙江-2型3支系与祖先的分歧时间相对其他原型株晚,尤其是浙江-2型,说明这些基因型或亚型在恙虫病东方体的进化过程中出现较晚。 结论本研究病例所感染恙虫病东方体基因型不同,可能为未被认识的新的基因亚型,迫切需要进行全基因组测序确认,并探讨其基因变异与人恙虫病严重程度间的关系。     

环介导等温扩增法快速检测霍乱肠毒素A亚单位基因

霍乱是由霍乱弧菌引起的、以腹泻为主要症状的烈性传染病.以发病急、传播快、涉及范围广、能引起大流行为特征,属甲类传染病,曾引起多次世界大流行[1].霍乱弧菌广泛地存在于水体和海产品中,浙江地处沿海,人们大多喜食海产品,因此霍乱仍是沿海地区最主要的传染病.霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)是霍乱弧菌毒力的决定因素.     

Ⅱ型猪链球菌浙江分离株cps2J、ef、mrp基因的克隆及序列分析

目的阐明浙江省猪链球菌分离株的血清型分型,分析其与国内外其他猪链球菌Ⅱ型（SS2）菌株 cps2J、ef、mrp毒力基因的差异。方法参照GenBank上已发表的cps2J、ef、mrp毒力基因序列,设计引物 ,对6株浙江省猪链球菌分离株进行cps2J、ef、mrp全基因克隆及序列测定,并与国内外其他分离株的基 因序列进行比较。结果cps2J、ef、mrp基因的完整开放阅读框（ORF）分别为999bp、2532bp、3771bp,各 自编码333、843、1256个氨基酸。经对cps2J、ef、mrp毒力基因的序列比较与系统进化分析,6株浙江分 离株均分布在SS2发生群中,与国内外其他SS2菌株cps2J、ef、mrp基因核苷酸的同源性均较高,分别为 98.39%～100.0%、99.6%～100.0%和99.4%～100.0%,分离的年代和地区对基因的同源性和系统进化分支影 响不大。结论6株浙江省猪链球菌分离株为2型菌株,cps2J、ef、mrp基因序列非常保守,与GenBank上国 内及欧洲SS2菌株中相应序列有很高的同源性,可能有着相同的起源。     

应用环介导等温扩增法快速检测O139群霍乱弧菌

目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测O139群霍乱弧菌的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对O139霍乱弧菌wbfR基因设计4条引物(2条内引物、2条外引物);优化LAMP反应条件和反应体系,对反应体系中的引物、dNTP、Mg2+/Mn2+离子及Calcium等浓度进行优化;并对13株种系背景明确的霍乱弧菌不同实验对照株、30株O139群霍乱弧菌地方分离株、10株O1群霍乱弧菌地方分离株、32株其他肠道菌进行检测,验证该方法的特异性;通过肉眼目测或电泳检测比较结果.结果 所有O139群霍乱弧菌经LAMP榆测均呈绿色并电泳有阶梯状条带为阳性,O1群霍乱弧菌及其他肠道菌均检测呈橙色并电泳无相应条带为阴性;该体系最低检测限为63 CFU/反应;检测结果在白光下通过肉眼即可判断;从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右.结论 本研究建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测O139群霍乱弧菌,无需昂贵的仪器,简单方便,非常适合基层检验部门或小型实验室以及流行病学人员于应急车上或现场监测等使用,值得推广.     

猪链球菌核酸检测量值溯源研究及方法评估

针对病原微生物检测中急需解决的计量标准和量值溯源问题,建立猪链球菌核酸量值荧光定量PCR方法,研制猪链核酸检测标准物质,探索等效一致的核酸测量技术。方法根据已报告的DNA序列设计并合成种特异性16S rRNA引物,建立荧光定量PCR方法,摸索最佳上、下游引物配比浓度,利用已知核酸浓度的标准品作标准曲线并获得Ct值与样本...     

门多萨假单胞菌引起尿潴留膀胱炎性反应一例CSCD

患者男,69岁,患者于8年前无明显诱因出现排尿困难,排尿等待,尿不尽感,伴尿线细,射程短。夜尿4～5次,无发热、腰痛,无尿急、尿痛及肉眼血尿,曾就诊当地医院,诊断为前列腺增生,给予前列康治疗,效果不佳.     

应用环介导等温扩增法快速检测O139群霍乱弧菌

目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测O139群霍乱弧菌的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对O139霍乱弧菌wbfR基因设计4条引物(2条内引物、2条外引物);优化LAMP反应条件和反应体系,对反应体系中的引物、dNTP、Mg2+/Mn2+离子及Calcium等浓度进行优化;并对13株种系背景明确的霍乱弧菌不同实验对照株、30株O139群霍乱弧菌地方分离株、10株O1群霍乱弧菌地方分离株、32株其他肠道菌进行检测,验证该方法的特异性;通过肉眼目测或电泳检测比较结果.结果 所有O139群霍乱弧菌经LAMP榆测均呈绿色并电泳有阶梯状条带为阳性,O1群霍乱弧菌及其他肠道菌均检测呈橙色并电泳无相应条带为阴性;该体系最低检测限为63 CFU/反应;检测结果在白光下通过肉眼即可判断;从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右.结论 本研究建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测O139群霍乱弧菌,无需昂贵的仪器,简单方便,非常适合基层检验部门或小型实验室以及流行病学人员于应急车上或现场监测等使用,值得推广.     

浙江省2005～2007年流行性脑脊髓膜炎病原学监测及分子分型研究

目的 对浙江省2005～2007年流行性脑脊髓膜炎(流脑)病原学监测结果进行分析,了解脑膜炎奈瑟菌(Neisseria Meningitidis,Nm)的菌群分布、变迁、耐药状况及分子分型特征.方法 常规方法做表型鉴定,聚合酶链反应(PCR)特异性引物扩增,脉冲场凝胶电泳(PFGE)参考中国疾病预防控制中心(CDC)传染病预防控制所推荐的方法进行,药物敏感试验参考美国临床和实验室标准机构(CLSI-2007)制定的标准进行.结果 116株疑似Nm的血清群构成比分别为:A群52.58%,B群15.52%,C群31.90%;从病人分离的49株中,A群占61.23%,C群占32.65%,而B群仅占6.12%.菌株对环丙沙星、奈啶酸、甲氧苄氨嘧啶产生不同程度耐药,但对青霉素、氨苄西林、美罗培南、氯霉素敏感,分离自不同人群的血清群菌株的耐药性有一定差异.PFGE酶切图谱及聚类分析发现,相同血清群的病人和其密切接触者的分离菌株的PFGE酶切图谱相似度达100%,属同一克隆系;A群和C群菌株的PFGE酶切图谱相似度相对较高,亲缘关系较近,分别有一定相关性,各存在一紧密相关的流行克隆群;B群菌株PFGE酶切图谱呈现较高的多态性.结论 浙江省Nm流行菌群正在发生变迁,目前仍以A群为主,但C群是近年来新出现的主要致病血清群.分子分型结果也显示,浙江省存在优势克隆群的A群和C群主要流行菌株.青霉素、氨苄西林、美罗培南、氯霉素类仍可作为浙江省治疗流脑的首选药物.鉴于多数人群对C群Nm缺乏免疫力,以及C群流脑的高病死率,应密切关注C群流脑的发生,以防C群流脑的爆发或流行.     

实时荧光定量PCR检测0139群霍乱弧菌研究

目的:利用荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异检测0139群霍乱弧菌的定量方法.方法:选取0139群霍乱弧菌糖基转移酶基因(LPSgt)作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan探针,探针的两端均进行荧光标记.对PcR扩增体系进行优化,进一步评价实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后,对收集的临床样本进行鉴定.结果:本文所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测和鉴定0139群霍乱弧菌,其他菌株均无阳性结果产生;该方法的灵敏度可达到10 cfu/ml;定量检测的批间和批内的变异系数均小于5%;对85例临床样本进行评价,结果获得9例0139群霍乱弧菌阳性,与常规培养法结果完全一致.结论:本文建立的检测0139群霍乱弧菌实时荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,实用性强,可对结果进行定量分析,为0139群霍乱弧菌的实验室诊断和现场流行病学调查提供了较好的分析手段.     

空调冷凝水军团菌污染状况检测

在国外，军团菌病被称为“城市文明病”。随着城市经济的繁荣，大型建筑的兴建及随之而来的大型空调设备的增加，可能导致军团菌病的发生和流行。世界范围内已有多起事件证明中央空调冷却塔水的污染是军团菌病爆发流行的原因。最近的一次是2005年9月25目发生在加拿大多伦多市一老人护理院，二周内，88人染病，16人死亡。由于军团菌在自然界广泛存在并导致的高病死率，军团菌病已成为世界性的公共卫生问题。我国已于2003年8月19日颁布《公共场所集中空调通风系统卫生规范》，为落实该规范要求，我们开展了外环境水军团菌污染状况及菌型检测，现将结果报告如下。