免疫球蛋白降解酶IdeS在大肠杆菌中的表达、纯化及功能鉴定

病原链球菌为逃避宿主的免疫反应,分泌一种可特异地裂解免疫球蛋白G的降解酶(immunoglobulin G-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes, IdeS)。IdeS既可作为工具酶用于IgG的指纹分析,又可用于治疗与自身免疫反应相关的疾病。本研究基于质粒pCold构建了两种重组IdeS的表达载体,并在大肠杆菌Shuffle T7中进行异源表达,经亲和色谱纯化后检测其蛋白活性。结果表明N-端含有His6-标签的重组IdeS产量为4 mg·L^-1,其与抗体IgG1以1∶200 (m/m)在37℃反应30 min即可完全酶解。而N-端含有His6-标签且C-端含有硅胶亲和标签(SiBP)的重组IdeS产量为1.5 mg·L^-1,其与抗体IgG1以1∶20 (m/m)在37℃反应30 min才可反应完全。C-端融合肽对于IdeS产量与活性都有较大的影响,使其活性降低,不利于后续应用于药物研发。上述结果表明,本系统所表达的N-端含有His6-标签的IdeS重组蛋白具有较高的活性,完全能满足抗体类药物研发...     

循证护理与临床应用

循证护理(EVidence -BasedNursing ,EBN) [1] 是近年来护理学科发展起来的一种提高护理实践科学性和有效性的方法[2 ] 。其核心思想就是运用现有最新最可靠的科学证据为服务对象提供最佳服务。EBN已经成为护理专业发展的必要成分、卫生保健系统和2 1世纪护理实践的标准[3 ] 。为此本文重点综述EBN的发展、概念、系统评价、信息检索及临床应用,旨在提高护理人员循证护理的能力,用科学的研究证据,制定出高质量的护理方案和护理决策,从而促进临床护理事业持续健康的发展。1　EBN的起源与发展早在2 0世纪70年代,英国内科流行病学家Cochra…     

两种染色方法疟原虫镜检效果比较

疟疾是一种严重危害人类健康的寄生虫病。人体疟原虫有4种:间日疟原虫、恶性疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫。我国间日疟较常见,恶性疟次之,但对人体危害较间日疟严重,三日疟偶尔发现,卵形疟已无病例报告。随着人口流动性加大,我国输入性疟疾病例也不断增加,及早的通过镜检发现疟原     

北京协和医院风湿免疫科牵头建成国际最大的系统性红斑狼疮网络数据库

北京协和医院风湿免疫科牵头国内106家三级医院,首次获得中国系统性红斑狼疮基本资料,建立了目前国际最大的系统性红斑狼疮网络数据库和与之匹配的生物标本库。2010年,协和风湿免疫科以开展＂十一五＂国家科技支撑计划项目——＂系统性红斑狼疮（SLE）的临床诊断、综合治疗的研究”为契机,牵头国内106家医疗单位（覆盖全国除西藏以外所有省市自治区）,组成中国系统性红斑狼疮研究协作组（Chinese SLE Treatmentand Research Group。CSTAR）,在严格培训、研究制定操作手册的基础上,成功采集了全国2170例系统性红斑狼疮患者的临床数据和随访资料,建立了与临床数据资源相结合的生物样本库和中国系统性红斑狼疮网络数据库（CSIS）,首次报告了我国系统性红斑狼疮的患病特点及危险因素。截至2010年12月,转     

下颌骨副孔分布与安全手术切缘的相关性研究

目的：探讨下颌肿瘤及颌周恶性肿瘤经下颌骨副孔浸润传播的途径模式以及治疗下颌肿瘤及颌周恶性肿瘤时下颌骨合理的切除方式。方法：在10-20倍的体视显微镜下观察下颌骨副孔的数量及分布规律，并对26例下颌骨肿瘤病人采用适当的下颌骨手术切除方式。结果：下颌骨内侧面着色副孔的出现率比外侧面的多；在外侧面，下区上部的着色副孔数最多；在内侧面，下区中部的着色副孔数最多。临床手术26例，术后追踪随访23例，19例手术后局部未见肿瘤复发，5年生存率76．9％。结论：（1）下颌骨肿瘤，颌周恶性肿瘤对下颌骨的浸润蔓延与下颌骨副孔密切相关；（2）彻底阻断肿瘤可能经副孔传播的途径，对建立一个真正“安全”的外科手术切缘，对患者的局部复发率和预后的控制均起积极作用。     

外源性IL-18基因转染联合顺铂对胶质瘤C6细胞凋亡的诱导作用

目的研究外源性IL-18基因联合顺铂对胶质瘤C6细胞的凋亡诱导作用,为胶质瘤治疗提供新的途径。方法将IL-18基因及pLXSN病毒载体导入胶质瘤C6细胞,建立C6/IL-18及C6/pLXSN细胞;C6/IL-18、C6/pLX-SN及胶质瘤C6细胞均以RPMI1640培养基培养,经0.3、3、30、60、120μg/ml顺铂作用48h后,用酶标仪在490nm波长处测吸光度值,计算细胞抑制率;以顺铂的10倍血浆峰浓度作用（3μg/ml）细胞24h后,采用吖啶橙/溴乙啶（A//EB）双荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 C6/IL-18细胞、C6/pLXSN细胞及亲代C6细胞经120、60、30、3、0.3μg/ml顺铂作用后的抑制率依次降低,C6/IL-18细胞抑制率明显高于C6/pLXSN和C6细胞（P均〈0.05）。以30μg/ml顺铂作用后C6/IL-18细胞的凋亡率明显高于C6/pLXSN和C6细胞（P均〈0.05）。结论外源性IL-18基因联合顺铂可明显增加对胶质瘤C6细胞的抑制作用,其相关机制有待进一步探讨。     

自体下颌下腺部分移植治疗干眼病的应用解剖学

目的:为血管化自体下颌下腺部分游离移植治疗重症干眼病微创手术提供形态学依据.方法:在30侧经红色乳胶灌注的成人标本上,对下颌下腺腺体的体积、下颌下腺导管的长度及腺体周围动静脉腺支血管的走行、分布、毗邻关系等显微解剖特点进行了较为详细的观测.结果:下颌下腺分为浅部和深部.浅部体积约为(1.77±0.53)cm3;深部体积约为(1.08±0.84)cm3.下颌下腺导管由下颌下腺浅部的深面发出,长约5 cm.营养下颌下腺的最丰要血供来源为面动脉和颏下动脉.下颌下腺的主要同流静脉是面静脉.结论:根据下颌下腺导管、下颌下腺及周围动静脉腺支的解剖点,提示在采用血管化自体下颌下腺游离移植治疗重症干眼病的手术时,可以将带血管的下颌下腺浅部及导管移植至颞部.术式经标本模拟具有可行性.     

pTAT-HA质粒载体在受体菌DH5α中的转化及鉴定

目的探索pTAT-HA质粒在受体菌DH5α中转化的方法。方法配制LB培养基,将pTAT-HA质粒转化至DH5α,培养筛选成功转化子,电泳鉴定。结果pTAT-HA质粒转化菌可在Amp＋LB培养基中生长,电泳结果显示质粒大小准确无误（约3000bp）。结论pTAT-HA质粒转化成功,转化菌可冷冻保存质粒,提取的质粒可用于下游分子生物学实验。     

pTAT—HA质粒转化菌保存效果的实验研究

目的探讨保存pTAT—HA质粒转化菌简单有效的方法。方法配制LB细菌培养基,将pTAT—HA质粒转化至DH50α感受态细胞,筛选成功转化子并扩增培养,将转化菌接种在不同浓度甘油菌液和新鲜牛奶中,-70℃保存6个月和1年后分别复苏,计算存活率,分析保存效果。结果保存6个月以30％甘油、40％甘油和新鲜牛奶保存效果较好,保存1年仅见30％甘油、40％甘油和新鲜牛奶冻存管有存活菌。结论pTAT-HA质粒转化菌宜使用30％-40％甘油菌液或新鲜牛奶保存。     

VEGF抗体靶向血管治疗增生性瘢痕的研究

目的探讨VEGF抗体靶向血管治疗对烧伤后增生性瘢痕的治疗作用.方法将人的增生性瘢痕植入裸鼠肩胛部皮下,建立裸鼠增生性瘢痕移植模型.3周后,用不同剂量血管内皮生长因子单克隆抗体进行瘢痕内注射治疗.治疗3周后解剖取材,通过测量瘢痕的大小观察瘢痕的体积变化,用Masson 染色和免疫组化技术观察移植瘢痕胶原和微血管数量的变化.结果与PBS对照组相比,靶向血管治疗3周后, 增生性瘢痕的体积明显减小, 瘢痕胶原和微血管明显减少.结论 VEGF抗体靶向血管治疗具有抑制增生性瘢痕微血管生成、胶原合成及抑制瘢痕生长的作用.