| 免疫球蛋白降解酶IdeS在大肠杆菌中的表达、纯化及功能鉴定 |
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| 引用本文： | 周思含,刘忞之,杨燕,王伟.免疫球蛋白降解酶IdeS在大肠杆菌中的表达、纯化及功能鉴定[J].药学学报,2022(7):2234-2239. |
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| 作者姓名： | 周思含 刘忞之 杨燕 王伟 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所,天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生健康委员会天然药物生物合成重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(82073757,81903487)； |
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| 摘 要： | 病原链球菌为逃避宿主的免疫反应,分泌一种可特异地裂解免疫球蛋白G的降解酶(immunoglobulin G-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes, IdeS)。IdeS既可作为工具酶用于IgG的指纹分析,又可用于治疗与自身免疫反应相关的疾病。本研究基于质粒pCold构建了两种重组IdeS的表达载体,并在大肠杆菌Shuffle T7中进行异源表达,经亲和色谱纯化后检测其蛋白活性。结果表明N-端含有His6-标签的重组IdeS产量为4 mg·L-1,其与抗体IgG1以1∶200 (m/m)在37℃反应30 min即可完全酶解。而N-端含有His6-标签且C-端含有硅胶亲和标签(SiBP)的重组IdeS产量为1.5 mg·L-1,其与抗体IgG1以1∶20 (m/m)在37℃反应30 min才可反应完全。C-端融合肽对于IdeS产量与活性都有较大的影响,使其活性降低,不利于后续应用于药物研发。上述结果表明,本系统所表达的N-端含有His6-标签的IdeS重组蛋白具有较高的活性,完全能满足抗体类药物研发...
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| 关 键 词： | 免疫球蛋白G降解酶 异源表达 IgG指纹分析 供体特异性抗体 |
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