肝癌组织LncRNA TINCR表达水平对术后长期生存的影响

目的 探讨肝癌组织中LncRNA TINCR 表达水平对术后长期生存的影响。方法 回顾性分析2013 年4 月～2016 年2 月间在本院接受手术治疗的157 例肝细胞肝癌患者的临床资料。RT-PCR 法检测肝癌标本内LncRNA TINCR 表达水平，采用ROC 曲线和Kaplan-Meier 法分析LncRNA TINCR 表达水平对肝癌术后长期生存的影响。结果 肝癌组织LncRNA TINCR 表达水平对术后长期生存预测的曲线下面积（AUC）为0.812，特异度为73.77%，灵敏度为79.17%，最佳判读值为1.89（P＜0.0001）。根据ROC 曲线分析结果，将肝癌组织LncRNA TINCR 相对表达水平大于1.89 的93 例（59.24%）患者纳入高表达组，而肝癌组织LncRNA TINCR 相对表达水平小于或等于1.89的64 例（40.76%）患者纳入低表达组。Kaplan－Meier 法生存分析发现高表达组术后3 年内有76 例患者死亡，3 年总生存率为18.28%（17/93）；低表达组术后3 年内有20 例患者死亡，3 年总生存率为68.75%（44/64），低表达组3 年总生存率明显优于高表达组（P＜0.0001，两组间死亡风险比为3.7534，95%可信区间为2.5158～5.6000）。结论 肝癌组织LncRNA TINCR 表达水平与肝癌术后长期生存显著相关，LncRNA TINCR 表达水平升高则预示着预后不佳。     

Vaccination inhibits the human adenoviral transduction in a mouse keratoconjunctivitis model

Adenovirus infections are a major cause of epidemic keratoconjunctivitis (EKC), which can lead to corneal subepithelial infiltrates and multifocal corneal opacity. In the current study, we investigated the use of an E1/E3-deleted adenovirus serotype 5 (Ad5) vector as a vaccine administered intramuscularly (IM) or intranasally (IN) against subsequent challenges with a luciferase-expressing Ad5 (Ad5-Luci) vector via eyedrop. We evaluated the adaptive immune response to Ad5 vector vaccination and confirmed a robust polyfunctional CD8 T cell response in splenic cells. Neutralizing Ad5 antibodies were also measured in the sera of vaccinated mice as well as Ad5 antibody in the eye wash solutions. Upon challenge with Ad5-Luci vector 8 weeks post the primary immunization, transduction was significantly reduced by > 70% in the vaccinated mice, which was slightly better in IM- vs. that in IN-vaccinated animals. Resistance to subsequent challenge was observed 10 months post primary IM vaccination, with sustained reduction up to 60% in the Ad5-Luci vector transduction. Passive immunization of naive mice with antisera from IM to vaccinated mice subsequently challenged with the Ad5-Luci vector resulted in approximately 40% loss in transduction efficiency. Furthermore, the mice that received IM immunization with or without CD8 T cell depletion showed > 40% and 70% reductions, respectively, in Ad8 genomic copies after Ad8 topical challenge. We conclude that Ad-vector vaccination successfully induced an adaptive immune response that prevented subsequent Ad transduction in the cornea and conjunctiva-associated tissues in a mouse model of adenovirus keratoconjunctivitis, and that both cellular and humoral immunity play an important role in preventing Ad transduction.     

植物抗体及其应用

20世纪80年代末科学家将抗体基因转入烟草表达,标志着植物抗体的诞生.人类既可以以植物为生物反应器异源表达和生产具有药用及商业价值的蛋白质;也可用抗体在植物体中进行免疫调节,以研究植物生理代谢机制,或增加植物抵抗病虫害的能力.本文旨对植物抗体的优越性、表达生产及其在医药学、植物抗病及代谢等领域的进展进行综述和讨论.     

p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体的构建鉴定及在胃癌细胞中的表达

目的 构建p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体,体外转染胃癌7901细胞,观察其在胃癌细胞中的表达及相关特性.方法 提取人全血总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增p21WAF1和p27WAF1基因并将其分别克隆到真核双表达载体pIRES中构建重组质粒pIPES-p27KIP1-p21WAF1,经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体介导重组质粒plRES-p27KIP1.p21WAF1"转染胃癌7901细胞,收集并提取转染后12、24、48、72 h和5 d各细胞的总RNA,逆转录成cDNA,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中p21WAF1和p27KIP1在RNA水平的表达.带有绿色荧光蛋白的pIRES-EGFP作为对照.结果 RT-PCR扩增分别获得约500和600 bp大小的产物,重组质粒pIRES-p27KIP1.p21WAF1经酶切和测序鉴定证实为p21WAF1和p27KIP1基因.转染胃癌7901细胞48 h时转染率为68%.与空质粒对照组比较,重组质粒转染胃癌7901细胞12、24、48、72 h和5 d后FQ-PCR证实p27KIP1的Ct值(cycle threshold,Ct)分别减少8.2、10、10、7.4和6.7,p21WAF1的Ct值分别减少7.4、8.2、8.2、6.3和5.70其中24 h和48 h的Ct值减少最大.结论 真核双表达载体pIRES-p27KIP1.p21WAF1构建成功并能在胃癌7901细胞内高效表达.     

雷帕霉素靶蛋白反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的构建雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的反义RNA真核表达载体，观察其对血管平滑肌细胞（VSMC）功能的影响。方法提取人VSMC总RNA，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）扩增mTOR基因cDNA序列，经pGEM-T载体克隆后双酶切，将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1，转染VSMC，Westernblot法检测反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果经RT-PCR获得664bp产物，T载体克隆后，酶切确定该片段为mTOR基因cDNA，进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR，测序证明序列正确后转染VSMC，证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达，转染72h的mTOR蛋白产物表达抑制率达82％，S期细胞由15％降低为7％，凋亡细胞增至9％。VSMC增殖过程在Gx／Go期→S期受阻。结论成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体。     

高血压性脑出血血肿周围脑组织细胞间粘附分子-1的表达

目的探讨急性高血压性脑出血患者细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在血肿周围脑组织和正常脑组织中的表达及其意义。方法选择30例行开颅手术治疗的急性高血压性脑出血患者,采用免疫组化技术检测ICAM-1在血肿周围脑组织及正常脑组织中的表达。结果实验组血肿周围脑组织可见ICAM-1的表达水平上调,其表达水平明显高于正常脑组织的表达水平(P<0.01)。神经元和血管内皮细胞共同表达ICAM-1,且神经元表达较明显。结论ICAM-1在人类高血压性脑出血血肿周围脑组织的表达水平上调,其表达上调可能参与了血肿周围脑组织的白细胞浸润,最终引发炎性反应和继发性脑损伤。     

iNOS在颅内囊性动脉瘤瘤壁中的表达及意义

目的探讨诱导性一氧化氮合酶（iNOs）在颅内囊性动脉瘤瘤壁中的表达及其意义。方法应用免疫组化染色和原位杂交染色技术检测iNOS在颅内囊性动脉瘤和正常动脉血管壁组织中的表达。结果所有脑动脉瘤标本中均可见iNOS表达，而正常脑动脉标本中则未见其表达：iNOS阳性表达部位主要在动脉瘤壁外膜和中膜的炎症浸润区的炎症细胞（如淋巴细胞、单核巨噬细胞）的胞浆内。结论动脉瘤的发生可能与局部iNOS过度表达，继而合成大量的NO有关。     

蚊虫的共生菌及其在媒介控制中的应用

许多昆虫与寄生在昆虫体表或肠道细胞中的微生物建立了共生关系。臭虫、蚜虫、猎蝽等昆虫可以依靠非最佳食物为生，这一是由于其特殊的生存环境，还由于其体内的共生微生物可以帮助合成和补充其食物中所缺乏的必需营养物质。蚊虫也与其肠道中共生细菌有着密切的联系。成蚊喜产卵于富舍细菌的水体中，水体细菌成为蚊虫幼虫的重要食物来源。伊蚊和库蚊幼虫正常生长发育不可缺少细菌，在无菌条件下饲养，蚊虫或其他媒介昆虫不能正常发育至成熟或不能传播人畜疾病。该文对蚊虫与细菌的共生现象以及其在以下几方面的应用进行综述，（1）蚊虫共生细菌的分离与鉴定，（2）共生细菌的形成与传代，（3）共生细菌在昆虫中的分布，并讨论了经过遗传改造的蚊虫共生细菌对蚊虫防治及控制疟疾等由昆虫传播的疾病的应用前景。     

胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

目的:探讨胰腺癌与癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的改变及其蛋白表达的特点,以及其与胰腺癌发生发展的关系。方法:分别采用免疫组化SP法及甲基化特异PCR(MSP)检测46例人胰腺癌和癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平,并结合临床资料进行分析。结果:胰腺癌中p16蛋白表达率为41.3%(19/46),而癌旁组织表达率为95.7%(44/46),两者有差异显著性(P<0.01)。p16蛋白阳性的19例胰腺癌标本中均未检出基因甲基化;p16蛋白缺失的27例标本中有18例检出基因甲基化,甲基化率为39.1%。p16基因甲基化与蛋白缺失有明显关系(P<0.05)。p16基因表达及其启动子区甲基化的发生率与胰腺癌的大小,患者性别﹑年龄的差异无显著意义(P>0.05),但与组织分化程度﹑淋巴结转移﹑PTNM分期有显著意义(P<0.05)。结论:p16基因启动子的异常甲基化可影响p16蛋白的表达,它们与胰腺癌的发生发展有关;p16甲基化和蛋白表达可能成为胰腺癌诊断及预后的候选标志物之一。     

丙型肝炎病毒E1E2蛋白原核表达载体的构建及表达产物的鉴定

目的 :构建丙型肝炎病毒 (HCV)包膜糖蛋白 (E1E2 )基因的原核表达载体 ,为研究HCVE1E2蛋白属性及基因免疫奠定基础。方法 :设计HCVE1E2区基因上、下游引物 ,分别引入BglⅡ及EcoRI酶切位点 ,以含有HCVH株基因序列的质粒pBRTM/HCV1- 30 11为模板 ,通过PCR扩增获得HCVE1E2区基因片段 ,将其克隆入原核表达载体pRSETA ,然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定 ;将此表达载体转化入表达菌BL2 1(DE3)pLySs诱导表达 ,并采用SDS -PAGE对表达产物进行鉴定。结果 :经酶切及序列测定分析表明 ,成功地构建了重组原核表达载体pRSETA -HCVE1E2 ;SDS -PAGE显示目的蛋白大量表达 ,且呈非溶状态。结论 :HCVE1E2融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达 ,为HCVE1E2蛋白的制备及基因疫苗的研制奠定了基础。