温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究＊

目的 观察温阳解郁颗粒（Wenyang Jieyu granule，WYJY）对皮质酮（Corticosterone，CORT）诱导损伤型小鼠海马神经细胞（TH22 cell）的保护作用，基于脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor， BDNF）/酪氨酸激酶B（Tyrosine kinase B， TrkB）/细胞外信号调节蛋白激酶（Extra cellular regulated protein kinases， ERK）信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制。方法 体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型，以不同浓度的WYJY和氟西汀（Fluoxetine，FXT）含药血清作用于模型细胞，细胞增殖-毒性检测（Cell Counting Kit-8， CCK-8）法分析细胞活性，倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变，采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）、实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR， qPCR）法检测神经细胞内凋亡因子（BCL2-Associated X， Bax）、抗凋亡因子（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶（Phospho-p90RSK， RSK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein， CREB）蛋白表达水平以及相关基因的表达水平。结果 在浓度为459.5 μmol·L^-1的CORT作用24 h后，HT22细胞的活性抑制率达到50%，在此条件作用下细胞形态结构损伤明显，凋亡程度严重，细胞上清中BDNF的含量显著减少（P<0.05），细胞内凋亡相关因子Bax/Bcl-2的比值明显升高（P<0.01），BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低（P<0.01）；以5%的浓度为2.85 g·kg^-1的WYJY和10%的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后，HT22细胞存活率明显提升（P<0.01），细胞结构的损伤明显改善，细胞凋亡程度减轻，细胞外BDNF的含量显著升高（P<0.05），细胞内Bax/Bcl-2比值显著下调（P<0.01），BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升（P<0.05，P<0.01）。结论 温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤。调控BDNF/Trkb/ERK通路，放大CREB信号传导，影响Bcl-2、BDNF水平，可能是其保护海马神经元，发挥抗抑郁疗效的重要机制。     

铝对大鼠记忆及海马内组蛋白乙酰基转移酶1表达的影响

目的:通过研究亚慢性铝暴露对大鼠记忆功能及组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)表达的影响，探究铝损伤记忆功能的机制。方法:将Wistar大鼠随机分为对照组(control)和低染毒组(Al-L)、中染毒组(Al-M)、高染毒组(Al-H),以出生当天(1 d)至90 d持续染毒方式建立亚慢性铝暴露大鼠模型。用Morris水迷宫检测大鼠的记忆功能，用尼氏染色法观察海马CA1区神经细胞的形态改变，real time RT-PCR检测大鼠海马HAT1 mRNA的表达，Western Blot检测大鼠海马HAT1蛋白的表达。结果:与对照组相比，染铝组大鼠在目标象限停留时间较短，穿越平台次数较少，表明大鼠空间记忆能力受损；尼氏染色显示大鼠海马CA1区神经细胞形态受损，同时大鼠海马HAT1 mRNA和蛋白表达均降低。结论:亚慢性铝暴露降低大鼠海马CA1区HAT1表达，可能导致大鼠空间记忆功能障碍。     

知母皂苷Ⅱ对老龄大鼠学习记忆行为及海马区神经元的影响

目的本实验研究知母皂苷BⅡ(Timosaponin B-Ⅱ,TB-Ⅱ)对自然衰老大鼠学习记忆能力的改善及海马区神经元的保护作用。方法 SD大鼠老年对照组(15只)、青年大鼠对照组(15只)、TB-II 1 mg/kg组(15只)、TB-II2 mg/kg组(15只)和TB-II 4 mg/kg组(15只)。Morris水迷宫实验测量动物逃避潜伏时间; Elisa法测定脑脊液IL-6和TNF-α含量; TUNEL法检测海马区凋亡神经元; HPLC法检测多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺含量。结果水迷宫实验显示老龄对照组逃避潜伏时间比青年对照组增加,差异有统计学意义(P 0. 05);给药组与老年对照组相比逃避潜伏时间明显缩短,差异有统计学意义(P 0. 05);给药组脑脊液IL-6和TNF-α浓度下降(P 0. 05);给药组海马区神经元凋亡减少(P 0. 05);给药组DA、NE和5-HT含量增加(P 0. 05)。结论知母皂苷BⅡ通过抑制大脑炎症介质生成和抑制海马区神经元凋亡,提高神经递质含量,明显改善自然衰老大鼠的学习和记忆能力。     

脑脊液和海马组织儿茶酚胺氧位甲基转移酶与阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能的相关性研究

目的探讨脑脊液和海马组织儿茶酚胺氧位甲基转移酶(catechol O-methyl-transferase,COMT)与阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠学习记忆功能的相关性。方法选取40只健康雄性SD老年大鼠,随机分为假手术组(Sham)和阿尔茨海默病模型组(Model),每组20只,检测动物回避电击逃避行为潜伏期及错误反映次数,观察阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能等行为学的变化,测定各组大鼠脑脊液和海马组织中COMT的mRNA和蛋白表达情况。结果 (1)相较于假手术组,阿尔茨海默病模型组大鼠的潜伏期显著缩短,错误次数显著增加(P 0. 01);(2)相较于假手术组,阿尔茨海默病模型组大鼠脑脊液和海马组织中COMT的mRNA表达量均显著升高,蛋白表达量显著上调(P 0. 01)。结论阿尔茨海默病可致大鼠的学习记忆功能严重损伤,并上调其脑脊液和海马组织中COMT的mRNA和蛋白表达量,证实脑脊液和海马组织儿茶酚胺氧位甲基转移酶与阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能具有一定相关性。     

脑电图诊断颞叶癫痫的价值探讨

目的探讨脑电图检查在颞叶癫痫诊断中的价值。方法选取许昌市中心医院2015-02—2016-02收治的78例颞叶癫痫患者,均经临床检查确诊为颞叶癫痫。所有患者实施常规脑电图、长程脑电图、动态脑电图及蝶骨电极不同时长脑电图检查,分析检查结果。结果长程脑电图、动态脑电图癫痫波检出率分别为54.2%(13/24)、66.7%(16/24),差异无统计学意义(P0.05);清醒期、睡眠期癫痫波检出率分别为31.3%(15/48)、54.2%(26/48),差异有统计学意义(P0.05);常规蝶骨电极、长程蝶骨电极癫痫波检出率分别为25.0%(4/16)、71.4%(10/14),差异有统计学意义(P0.05)。结论在颞叶癫痫患者的临床诊断过程中,实施脑电图检查的效果显著,且蝶骨电极、睡眠诱发试验能促使颞叶癫痫诊断准确性得到提升。     

香萱益神方对血管性痴呆模型大鼠神经元凋亡机制研究

目的:探讨香萱益神方治疗血管性痴呆(VD)模型大鼠认知功能作用及其对神经元凋亡机制的研究。方法:两血管阻断法建立VD大鼠模型,给予中药方香萱益神方灌胃治疗6周,分别于造模后、中药喂养6周后进行Morris水迷宫行为学检测,测试大鼠认知行为能力改变,行为学测试结束后,检测VD模型大鼠海马中海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平的变化。结果:香萱益神方治疗6周后,血管性痴呆大鼠模型学习记忆能力得到改善,上调脑内海马组织神经营养因子水平,海马神经元凋亡率下降。结论:香萱益神方是治疗血管性痴呆的有效方剂,可以有效改善VD大鼠模型认知行为功能的障碍情况,起到减少海马神经元细胞凋亡,诱导海马神经元细胞修复的作用。香萱益神方可能是通过激活BDNF相关通路,起到保护海马神经元的作用。     

大量饮酒及乙醇戒断后对大鼠脑内维生素C 水平的影响

目的 研究大量饮酒4 d及乙醇戒断后大鼠脑脊液中及各重要脑区内维生素C（VC）水平 及钠依赖性VC 转运体2（SVCT2）蛋白水平的变化。方法 30 只健康Wistar 大鼠随机分为5 组，对照组 （A 组）、大量饮酒4 d（B 组）、大量饮酒4 d 后戒断1 d（C 组）、大量饮酒4 d 后戒断2 d（D组）、大量饮酒 4 d后戒断7 d（E组），每组6只。B、C、D、E组大鼠大量灌胃给予乙醇4 d，乙醇浓度为25% W/V，每8小时 灌胃1次，连续4 d；A组给予等体积蒸馏水。采用Y迷宫实验评价大鼠的空间工作记忆能力；以高效液相- 电化学法（HPLC-ECD）检测大鼠脑脊液及前额叶皮质、顶叶皮质、颞叶皮质、海马脑区内细胞内VC 含量， 免疫印迹法检测大鼠各脑区内SVCT2蛋白水平的变化。结果 （1）Y迷宫实验： C、D组大鼠自发交替反应 率分别为（24.64±15.11）% 和（41.48±13.01）%，均显著低于A 组［（75.47±8.61）%］； E 组大鼠的自发交替 反应率恢复接近正常［（61.64±11.51）%］，与A 组差异无统计学意义（P＞ 0.05）。（2）脑脊液内VC 含量：B 组大鼠脑脊液内VC 含量为（204.54±25.51）μmol/L，显著高于A 组［（145.57±18.98）μmol/L］， 而C、D 组 大鼠脑脊液内VC 水平［分别为（90.24±15.45）、（86.93±14.53）μmol/L］明显低于A、B 组，差异均有统计 学意义（均P＜ 0.001）；E 组大鼠脑脊液中VC 含量［（135.80±17.16） μmol/L］与A 组间差异无统计学意义 （P＞ 0.05）。（3）各脑区内VC 水平：B 组前额叶皮质、顶叶皮质、海马脑区脑组织匀浆（细胞内）VC 水 平变化趋势相同［分别为（1.18±0.13）、（1.14±0.12）、（1.20±0.20）μmol/g］，均显著低于A 组［分别为 （1.64±0.11）、（1.62±0.13）、（2.06±0.27）μmol/g］；C 组在乙醇戒断后，前额叶皮质、顶叶皮质、海马脑区 细胞内VC 水平［分别为（1.20±0.29）、（1.05±0.06）、（1.21±0.15）μmol/g］有所恢复，但仍明显低于A 组 （均P＜ 0.01）；C组大鼠颞叶皮质细胞内VC水平［（1.37±0.04）μmol/g］显著高于顶叶皮质（P＜0.05）；D组 各脑区细胞内VC水平均有回升趋势，前额叶皮质细胞内VC水平显著高于顶叶皮质［（1.63±0.24）μmol/g 比（1.26±0.16）μmol/g，P＜0.05］；E组前额叶皮质、顶叶皮质、颞叶皮质、海马区细胞内VC水平［分别为 （1.72±0.19）、（1.43±0.22）、（1.67±0.19）、（1.86±0.22）μmol/g］均较B组显著升高（均P＜0.01），逐渐恢复至正 常水平，海马区VC水平显著高于顶叶皮质（P＜0.05）。（4）Western blot结果显示，与A组比较，B、C、D组大 鼠前额叶皮质、顶叶皮质及C、D、E组大鼠海马区的SVCT2蛋白均显著升高（均P＜0.05）。结论 大量饮 酒4 d可致大鼠脑损伤，乙醇干预后大鼠脑脊液中及各脑区脑组织匀浆中VC水平呈现负相关的变化过程， 此过程中SVCT2蛋白表达上调，这将有助于脑脊液内的VC被转运至各脑区神经元内发挥抗氧化作用。