不同孵育时间对乙型肝炎病毒表面抗原室内质量控制的比较

乙型肝炎病毒表面抗原用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测具有操作简便、特异性强、敏感性高、试剂成本低、快速等优点,但在操作中影响检验结果的因素也很多,包括：标本的收集、保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、     

药敏试验的标准化及其进展

琼脂扩散法最早用玻璃或金属小管立于铺菌的琼脂表面，注入抗生素，抗生素在琼脂中扩散，孵育后观察抑菌圈。1974年Boudi等改用抗生素滤纸片，使用非常方便。1966年Kirby和Bauer等用稀释法测定细菌的最小抑菌浓度(MIC)井求出对应的纸片抑菌圈大小，井进行回归分析，井以其直径来表示敏     

高效液相色谱法测定人肝细胞色素P450 3A4转基因细胞中氨氯地平

目的 :研究氨氯地平经人肝细胞色素 P4 5 0 3A4 (CYP3A4 )的代谢 ,建立反相高效液相色谱的测定人肝转基因细胞 CYP3A4酶 S9孵育液中氨氯地平浓度的方法。方法 :与人肝转基因细胞提取的 S9上清液孵育之后的样品 ,用 3倍量的甲醇沉淀后离心 ,取上清液用 0 .4 5μm微孔滤膜滤过后进样。采用 Hypersil C18柱 ,以乙腈 -磷酸盐缓冲液 (4 5∶ 5 5 ,v/ v,p H4 .5 )为流动相 ,普萘洛尔为内标 ,在 2 5 0 nm波长处测定。结果 :氨氯地平浓度在 0 .2～ 30 .0μg/ ml范围内线性关系良好 ,r=0 .9993,方法平均回收率为 (98.2± 2 .4 ) % (n=5 ) ,日内和日间相对标准偏差(RSD)均小于 10 % ,检测限为 2 0 ng/ ml,定量限为 0 .2 μg/ ml(回收率为 10 4 .0 % ,RSD为 11.4 % ,n=5 )。结论 :建立的反相高效液相色谱方法简便、准确 ,可用于研究氨氯地平在人肝 CYP3A4转基因细胞中的代谢。     

流式细胞术检测细胞毒方法的建立

目的：建立一种用流式细胞仪测定细胞介导细胞毒活性的方法。方法：用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞，再用碘化丙碇(PI)标记DNA筛选细胞膜已破坏的靶细胞。效靶比为100：1—6．25：1，共孵育时间为1-6小时，流式细胞仪收集1000个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。结果：CFSE是合适的标记靶细胞的荧光染料，18小时后也能很好地区分效靶细胞；靶细胞的自然死亡率低于5％；杀伤百分率随着效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50：1—25：1，共孵育时间为2—4小时。结论：CFSE／PI双荧光染料标记的流式细胞分析检测细胞毒具有多个优点：避免放射性试剂的应用，敏感性增强，单细胞水平的分析。     

镉对大鼠子宫雌激素受体影响的体外研究

目的研究镉对子宫雌激素受体结合容量影响,并评价其环境内分泌干扰作用。方法制备大鼠子宫细胞质雌激素受体;运用正交实验设计[L16(45)]进行单剂量配基结合试验研究两因素——镉的浓度和预先孵育时间对雌二醇(E2)结合雌激素受体(ER)的最大结合容量(Bmax)影响;用竞争结合抑制试验,计算镉的IC50值,并以己烯雌酚为参照品计算相对亲和力(RBA),研究镉与ER的结合能力。结果体外不同浓度的镉(0、10-3、10-5、10-7mol/L)与孵育不同时间(0、30、60、90min)对E2与ER的最大结合位点数(Bmax,单位为pmol/mg蛋白)的改变均无统计学意义(P>0.05),同时也未见体外不同浓度的镉与孵育不同时间有交互作用,差异无统计学意义(P>0.05);其中0、10-3、10-5、10-7mol/L浓度的镉孵育0min的Bmax分别为203.15±75.16、203.41±22.78、220.82±45.35、209.10±49.66;孵育30min的Bmax分别为215.67±92.97、139.79±53.78、205.27±23.60、172.63±55.09;孵育60min的Bmax分别为197.11±50.68、203.24±66.33、183.92±31.89、183.33±32.70;孵育90min的Bmax分别为229.69±76.88、175.70±70.28、164.26±24.46、150.78±65.97。氯化镉的半数抑制浓度(IC50)为10-4～10-3mol/L之间,Cd与ER结合的RBA约为DES的10-6～10-7。结论镉对E2与子宫雌     

硫化氢对大鼠心室组织心钠素分泌的影响

目的探讨外源性硫化氢(hydrogensulfide,H2S)对大鼠心室组织心钠素(atrialnatriureticpeptide,ANP)分泌的影响。方法将正常Wistar大鼠的左心室和右心室分别分为对照组和H2S供体组(孵育时加入硫氢化钠,终浓度10-4mol/L),每组各12例,用Krebs液作为孵育液,放入37℃恒温水浴箱中振荡孵育4h,孵育后,用放射免疫法测定孵育液中ANP的含量。结果H2S供体组大鼠左心室和右心室组织孵育液中ANP的含量分别为(16.89±12.85)和(18.25±14.37)ng/gwettissue,对照组分别为(52.05±31.65)和(62.73±41.66)ng/gwettissue,两组相比差异有显著性。结论H2S可以抑制大鼠左右心室组织ANP的分泌。     

不锈钢罐孵育系统对绵羊胚胎体外发育效果的影响

实验旨在测定绵羊植入前胚胎在304不锈钢罐孵育器内的发育能力,为建立稳定的胚胎体外培养环境提供研究基础。本试验以绵羊孤雌激活胚胎和体细胞克隆重构胚作为测试样品,以不锈钢罐和MIC-101孵育器为研究对象进行比较。在不锈钢罐中培养效果同MIC-101相比,孤雌激活胚胎第7 d囊胚发育率达26.45%vs 24.84%(P>0.05);重构胚第7 d囊胚发育率达16.07%vs 16.84%(P>0.05)。结果表明,在密闭的304不锈钢罐内,气体环境和湿度水平保持稳定,符合绵羊早起胚胎体外培养所需环境。304不锈钢罐组合标准混合气体和恒温箱,是一种价格适宜、环境稳定、有效的、可供选择的早期胚胎体外培养孵育系统。     

精卵孵育时间与活性氧的关系以及对体外受精结局的影响

目的检测长、短时受精受精液中活性氧的不同,分析精卵孵育不同时间对体外受精-胚胎移植结局的影响。方法155例接受常规IVF受精的患者,每人取出的OCCC随机分为两组：A组为短时受精,B组为长时受精。检测受精液中H202、CTA的含量。移植的119名患者随机分为两组,一组60人移植短时受精的胚胎,一组59人移植长时受精的胚胎。结果B组的受精液中H202水平明显高于A组（P〈0．05）,CTA水平明显低于A组（P〈0．05）。B组的多精受精率明显高于A组（P〈0．05）,A组的优胚率明显高于B组（P〈0．05）,两组间的受精率、卵裂率、植入率、临床妊娠率无统计学差异。结论长时受精时,过量的活性氧对卵子及胚胎有不利影响。短时受精在不影响受精率的前提下,可以降低多精受精率,提高优胚率。     

基于表面增强拉曼散射的血清指纹谱检测方法研究

目的：对基于表面增强拉曼光谱检测血清指纹谱的试验条件进行优化。方法以正常人血清为例,银胶溶液为活性基底,分别检测不同血清用量（2．5～500μl）、不同孵育时间（10～30 min）、不同孵育温度（4℃、室温、37℃）及不同血清处理方法（萃取、去蛋白）的增强拉曼信号。结果及结论血清用量不宜超过50μl,与增强基底材料的比例1∶1到5∶1均适宜;孵育时间在10～30 min均可;孵育温度为4℃、室温、37℃均可;血清直接与增强基底混合信号效果极强,进行萃取和去蛋白处理后,拉曼信号会减弱。     

小鼠主动脉平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞与格列本脲共孵育的反应

目的:观察磺酰脲类药物格列本脲对平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞内酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)酶活性的影响.方法:实验于2003-06/2005--07在华中科技大学同济医学院实验中心完成.①用组织贴块法培养小鼠主动脉平滑肌细胞,采用两步超速离心法制备低密度脂蛋白后,运用CuCl2氧化法制备氧化低密度脂蛋白,采用100 mg/L的氧化低密度脂蛋白作用于平滑肌细胞72 h.建立泡沫细胞模型.②在平滑肌细胞和泡沫细胞分别加入格列本脲,使终浓度为200μmol/L,孵育24 h,用放射性同位素标记法检测ACAT1酶活性.结果: ①平滑肌细胞转变为泡沫细胞后,ACAT1酶活性上升(P<0.05).②平滑肌细胞被格列本脲干预后,ACAT1酶活性无明显变化(P>0.05);肌源性泡沫细胞加入格列本脲后,ACAT1酶活性下降(P<0.05)结论:格列本脲能抑制肌源性泡沫细胞内ACAT1的酶活性,抑制平滑肌细胞向泡沫细胞的转化,有可能成为防止动脉粥样硬化的有效药物.