血清山梨醇脱氢酶活力测定的方法学研究

目的　建立一种简易、快速的山梨醇脱氢酶 (SDH)活性测定法。方法　用双试剂法进行测定 ,波长 340nm ,温度37℃ ,血清 :试剂 =1∶15 ,第一次孵育时间 2min ,加入第二试剂后 ,用延迟时间 30s,读数间隔时间 15s,读数次数 6次。结果　最适 pH为 8 8,SDH对山梨醇的Km为 1.2 4mmol/L ,山梨醇 :NAD+=6∶1。批内CV(n =2 0 )为 2 7%～ 4.2 % ;批间CV为 3 1%～ 8.3 %。在 90U/L以下线性良好 ,参考值上限为 12 .5U/L。结论　该方法简易、快速、灵敏 ,线性范围宽 ,干扰因素少 ,所需样品量少。     

血清分离不彻底对ELISA测定HBsAg的影响

我们发现如果血清中纤维蛋白原分离不彻底，将导致ELISA测定HBsAg的假阴、假阳性结果。为此，我们进行了探讨。1材料和方法1．1材料从我院门诊和住院病人中采标本共964份，按正常程序抽血，随机编号。标本外观正常，无溶血，无脂血。试剂采用上海科华生物技术有限公司生产的立可读EIA（TMB一快速法）检测HBsAg试剂盒。仪器为DG3022A型酶联免疫检测仪，由上海分析仪器厂生产。测定波长为5O5urn。1．2入法模拟试验在室温4～8”C环境中，将标本放37”C孵育30min，再经2O00r／min离心5min，分离血清后立即测定1次，记录结果。血清放置…     

阿尔泰山哈巴河、布尔津林牧区莱姆病15例报告

1997～1999－07,我们对哈巴河、布尔津两县林区部分工人和常驻牧民进行了莱姆病血清IFA检测,对血清阳性者进行临床随访和鉴别诊断。其中15例被确诊为莱姆病患者,现报道如下： 1　材料与方法 　　人血清IFA试验,将被检血清56℃30 min灭活,用PBS稀释至1∶16,再用30％正常卵黄液 的PBS继续稀释垤 1∶128,依次加在抗原片(中国预防医学科学院流行病学微生物研究所提 供,批号9601)凹孔内,每孔各加15 μl,37℃湿盒中作用30 min,用PBS漂洗,浸泡40 min ,蒸馏 水漂洗后吹干,每孔加15 μl工作浓度的荧光素标记的羊抗人IgG(北京生物制品研究所生产 ,批号96－01),孵育、洗涤同上,吹干,用甘油封片液封片,荧光显微镜观察,1∶56为可 疑,1：128为阳性。阳性样本用钩体病Doa－ELISA试验和梅毒USR试验排除钩体和梅毒螺旋 体的交叉感染。     

用99mTc标记胰岛素样生长因子1类似物的方法学研究

目的建立^99mTc标记胰岛素样生长因子1类似物（IGF-1A）的方法，探讨其标记条件。方法通过预锡化法标记IGF-1A，改变标记条件：Tween80的用量从0～10μl，在0．25～6h不同时间点测定标记率，SnCl2·2H2O质量浓度0．75～4g／L，IGF-1A的用量20～100μg，淋洗液的体积10～200μl，加入生理盐水或人血清后1h～24h测定放化纯度，纸层析法测定标记率及胶体水平。结果^99mTc-IGF-1A最高标记率为（94．43±0．75）%，放射性胶体质量分数为（3．47±0．71）％。室温下放置6h标记率为（85．57±2．81）%，加入人血清后放置24h标记率为（54．07±3．86）％。结论上述预锡化法进行^99mTc标记IGF-1A的最佳标记方法为：浓盐酸溶解SnCl2·2H2O后用葡萄糖酸钠溶液配成3g／L，吸取100μl后加入40μl　IGF-1A（2g／L）；300μlNa3PO4和2μl,0．1％Tween80混匀后加入50μl ^99mTc O4新鲜淋洗液；在IGF-1A体系中加入淋洗液体系，混匀，室温下反应0．5h；加入500μl NaH2O4将pH值调节到7左右。该方法简捷且具有较高标记率和良好稳定性。     

硫醇修饰的磁性银花纳米粒子SERS基底在氯霉素检测中的应用

目的：制备一种新型的硫醇修饰的磁性银花纳米粒子SERS基底对氯霉素（ CAP）进行拉曼检测,确定SERS基底的增强效果。方法选择烷基硫醇作为基底的表面修饰剂,自组装到磁性银花纳米粒子的银壳表面,通过疏水作用,将CAP分子富集到基底表面,从而实现检测CAP分子拉曼信号的增强。结果3种不同硫醇修饰的基底对CAP的增强顺序是正己硫醇＞十二硫醇＞十八硫醇。利用Fe3 O4＠SiO2-Ag-C6 SERS基底对浓度范围10－3～10－10 mol／L的CAP溶液和10－3～10－9 mol／L的牛奶中CAP进行拉曼检测,检测限分别为0．1 nmol／L（32 ppt）和1 nmol／L（323 ppt）。结论硫醇修饰的磁性银花纳米粒子是一种高活性的SERS基底,可用于低浓度物质的检测分析。     

GC法同时测定盐酸美金刚片中四种杂质的含量

目的建立GC法同时测定盐酸美金刚片中4种杂质（杂质A、B、D、E）的含量。方法采用二甲基聚硅氧烷（Agilent 19091Z-213HP-1）柱（30m×0．32mm,1μm）,程序升温（初始温度120℃,以3℃·min-1的升温速率升至180℃,再以8℃／min的升温速率升至260℃,保持3min）,流速2．0ml·min-1,分流比8：1,进样量1μl,载气：氮气（恒流）;进样口温度220℃;FID检测器温度250℃。结果杂质A、B、D、E在1．34～50μg·ml。（r=0．9999）、0．76—50μg·ml。（r=0．9999）、0．45～50μg·ml-1（r=0．9999）、0．76～50μg·ml-1。（r=0．9997）范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率（n=9）分别为86．93％（RSD=1．68％）、89．91％（RSD=1．84％）、85．31（RSD=1．01％）、85．94％（RSD=4．96％）。结论该方法操作简单、快速准确,具有良好的稳定性和重复性,有效控制了盐酸美金刚片中4种杂质的含量。     

基于表面增强拉曼光谱的肝病血清检测技术研究

目的：通过比较正常人与慢性乙肝、肝硬变和肝癌患者血清之间的拉曼光谱差异,探索基于表面增强拉曼散射（ SERS）的血清诊断新方法。方法首先制备纳米银溶胶作为活性基底,分别测量30例正常人和48例慢性乙肝、48例肝硬变、46例肝癌患者血清的增强拉曼信号,并进行正交偏最小二乘法判别分析（ OPLS－DA ）。结果正常人与3组肝病患者血清在位移625、725、806、947、1018、1219、1131、1329、1440、1580、1660 cm－1处均有拉曼峰,且峰强弱存在差异;正常人血清在位移1096和1395 cm－1处有强峰,肝病患者血清在位移887 cm－1有强峰。 ROC曲线下面积（AUC）分别为0．981、0．966、0．984。结论初步研究表明血清SERS图谱可作为肝病早期诊断的一种辅助手段。     

HPLC法测定盐酸左旋去甲基苯环壬酯片的含量及有关物质

目的：建立盐酸左旋去甲基苯环壬酯（ demethyl levophencynonate hydrochloride,L-LPC）片的含量及有关物质的分析方法。方法采用高效液相色谱法;色谱柱Capcel PAK C18柱, MGⅡ5μm,4．6 mm ×250 mm,Col：No．A4AD 02992（Shiseido,日本）;流动相甲醇∶乙腈∶0．05 mol/L醋酸钠缓冲溶液（pH 5．0）为4∶3∶3;流速1．0 ml/min;检测波长220 nm;进样量20μl;柱温为室温。结果方法回收率为（100．15±0．73）％;溶液在8 h保持稳定（RSD为0．36％）;在0．1～50μg/ml范围内线性关系良好,其回归方程为Y＝81558X-4768．3（R2＝1,n＝3）。结论所建立的方法简便、准确、灵敏,专属性强,为该制剂含量测定、半成品测定及制剂稳定性研究提供了方法学依据。     

表面增强拉曼光谱在人类血清中的应用

表面增强拉曼光谱（ surface－enhanced Raman spectroscopy, SERS）近几年来在物理、化学乃至生物医学方面应用广泛。由于其具有较高的灵敏度、特异性,可用来检测人体血清成分的改变。血清中的各种生物分子包括蛋白质、脂类、核酸等都有各自的特征拉曼光谱,因此不同的拉曼位移、谱带强度及宽度,在分子水平上反映了人体血清中不同的细胞代谢异常。该文对SERS的研究概况以及在多种疾病血清检测中的最新研究进展进行了总结和进一步展望。     

GC法测定达沙替尼原料药残留溶剂

目的建立GC法检测达沙替尼原料药中残留溶剂的方法。方法色谱柱为HP-DB624毛细管柱（30 mm×0.53 mm,3.0μm）,氢火焰离子化检测器（FID）,载气为氮气;进样口温度：220℃;检测器温度：240℃;流速2 ml·min-1,采用程序升温：初温60℃,保持2 min,以20℃.min-1升温至80℃,保持2 min;以10℃·min-1升温至140℃,保持2 min;分流比为5∶1,直接进样,进样体积为1.0μl。以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,采用外标法测定。结果 4种溶剂均能达到较好的分离;峰面积与浓度呈良好的线性关系,精密度良好,回收率符合要求,3批样品检测残留溶剂均未超标。结论本测定方法简单,准确,可用于达沙替尼原料药中有机溶剂残留量的检测。     

优化积雪草苷非离子表面活性剂囊泡的处方和工艺

 目的 筛选积雪草苷非离子表面活性剂囊泡的最优处方和最佳制备工艺。方法 采用薄膜蒸发法制备积雪草苷囊泡,以包封率和载药量为指标对非离子型表面活性剂的种类和用量、投药量、胆固醇用量、孵化时间、孵化温度等处方因素和工艺条件进行单因素考察,正交设计筛选处方、优化制备工艺,并对积雪草苷囊泡的最优处方和工艺进行验证。结果 因素考察试验中,对积雪草苷囊泡包封率和载药量影响的顺序依次为:投药量>孵化温度>孵化时间。优化处方及工艺为:积雪草苷36 mg,孵化温度30 ℃,孵化时间30 min,其包封率和载药量分别为89.56%和25.26%,镜下观察成典型囊形。结论 采用薄膜蒸发法所制备的积雪草苷囊泡呈圆形,分散性好,囊泡的包封率和载药量均较高。     

膏药软化点测定最佳条件的选择

 目的 考察膏药软化点测定的影响因素,选择最佳测定条件,提高测定结果 的准确性.方法 通过试验,考察测定过程中环样熔化后室温下放置时间、初始温度下环样预热时间和升温速率对测定结果 的影响.结果 环样应在室温下放置1 h以上,在初始温度(37±0.5)℃下预热15～30 min, 并控制升温速率在(1.0～1.5)℃/min测定.结论 按照选择的测定条件测定膏药软化点,结果 准确可靠、重现性好.     

猪心脏不停跳体外循环期不同温度变化对血液流变性的影响

目的观察猪心脏不停跳体外循环期间温度变化对猪血液流变学指标的影响。方法选择猪龄3~4月、体重20~25kg的广西本地健康杂种猪14只,随机分A、B两组,每组7只。全身麻醉后建立心脏不停跳体外循环实验模型。A组：鼻咽温度降至37℃时停止血液降温,维持鼻咽温度在36℃~37℃时间30min后即行复温并缝合心脏。B组：鼻咽温度降至32℃时停止血液降温,维持鼻咽温度在31℃~32℃时间30min后即行复温并缝合心脏。于转机开始前（T1）、降温到设定值（T2）、低温维持30min（T3）、复温完成（T4）和停机后20min（T5）5个时点,经股动脉采血液标本5ml/次,测定标本中血液流变学指标。结果低、中、高切变率下的全血粘度、红细胞压积（Hct）在两组内T2、T3、T4和T5各时点均低于转流前T1水平（P〈0.05）;高切变率全血还原粘度在两组内T2、T3、T4和T5各时点均低于转流前T1水平（P〈0.05）;A组内T2和T3时点的红细胞刚性指数（IR）低于转流前T1水平（P〈0.05）;低切变率全血还原粘度和中切变率全血还原粘度、红细胞电泳指数、红细胞聚集指数（Arbc）、红细胞变形指数（TK）在两组内和两组间差异均无显著性。结论在建立的心脏不停跳体外循环猪模型中,体外循环期间两组不同变温过程均未呈现明显不利于微循环灌注的血液流变学变化。     

对不同血氨测定标本处理方法的评价

目的评价不同方法处理标本后放置时间与血氨测定值的关系。方法将43例测血氨患者的标本不同方法处理、储存,分别放置不同时间后测定其血浆氨浓度。结果所有标本放置时间越长,其血氨浓度越高;未分离标本放置30min内无明显差别（P〉0.05）,60min结果有显著性差异（P〈0.05）;分离出的血浆标本温室时120min之内无明显差别,180min则有显著性差异（P〈0.05）;置4℃冰箱冷藏的分离标本3h内之间无明显差别（P〉0.05）,4h后则有显著性差异（P〈0.05）;置-20℃冰箱冷冻的分离标本24h内无明显差别（P〉0.05）,48h后则有显著性差异（P〈0.01）。结论未分离血浆的标本应在30min内分离并完成检测,即使分离出血浆也应在2h之内检测,冷藏应于3h内、冷冻保存于24h内测定。     

不同保存温度对总蛋白与葡萄糖试剂盒稳定性的影响

目的比较不同保存温度下总蛋白、葡萄糖试剂盒的稳定性。方法观察不同保存温度下总蛋白、葡萄糖试剂盒测定标本结果的变化。结果总蛋白试剂盒在4℃和37℃保存10d后测定结果无显著性差异,葡萄糖试剂盒在4℃和37℃保存6d后测定结果存在显著性差异。结论葡萄糖试剂盒在37℃下的保存时间不可超过6d;总蛋白试剂盒的保存时间可达10d以上。     

GC法测定复方帕吉林片中盐酸帕吉林的含量

目的测定复方帕吉林片中盐酸帕吉林的含量。方法改性聚乙二醇毛细管柱(30 m×0.32 mm,1.4μm),柱温110℃保持12 min,再以40℃/min的速度升温至250℃保持10 min;进样口温度为270℃;氢火焰检测器,检测器温度为300℃;分流比为20∶1。结果盐酸帕吉林的回归方程为:Y=0.6949X-0.0112,r=0.9995,表明盐酸帕吉林在0.21～1.05mg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系。结论本法测定复方帕吉林片中的盐酸帕吉林的含量准确可靠。     

抗血管内皮生长因子MR靶向超顺磁性分子探针的构建及体外大肠癌细胞显像的实验研究

目的 探讨携带纳米铁颗粒的抗血管内皮生长因子(VEGF)分子探针的构建方法及其生物理化性状,以及对体外大肠癌细胞的靶向作用.方法 采用化学交联法构建抗体分子探针,应用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳及MR扫描仪检测抗体对比剂的生化及磁学特性.将抗体分子探针与人结肠癌SW620细胞在37℃分别孵育30、60、90 min后进行MR扫描,并进行普鲁士蓝染色验证,信号变化数据组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验;以最佳孵育时间为标准,与骨髓间充质干细胞对照,检测抗体对比剂的靶向增强作用.信号变化数据组间比较采用单因素方差分析和析因设计方差分析.结果 携带纳米铁颗粒的抗VEGF分子探针被成功构建并分离,抗体分子探针的弛豫率为0.0426×10~6 mol/s.免疫细胞荧光及普鲁士蓝染色法证实抗体分子探针可以与高表达VEGF的人结肠癌SW620细胞结合.MRI证明抗体分子探针孵育大肠癌细胞30、60、90 min后T_2信号强度分别为392±7、91±8、264±10,与孵育前(679±12)比较差异有统计学意义(F=4735.489,P<0.01),在孵育60 min后T_2WI及T_2~* WI信号强度值降低最明显.抗体分子探针孵育大肠癌细胞对照实验表明,抗体分子探针孵育大肠癌细胞组与干细胞组T_2信号强度分别为82±7和685±43,差异有统计学意义(t=39.167,P<0.05),抗体分子探针孵育大肠癌细胞组T_2WI及T_2~* WI信号强度显著降低.单纯对比剂孵育大肠癌细胞组与干细胞组比较T_2信号强度分别为419±59和400±41,差异无统计学意义(t=-0.718,P>0.05).结论 携带纳米铁颗粒的抗VEGF分子探针已将肿瘤血管生成的评价发展到受体水平,为肿瘤血管生成的诊断与抗血管生成的治疗提供了新的思路.     

Radioimmunoassay of plasma renin activity

Plasma renin activity is quantitated by measuring the rate of angiotensin generation during incubation of plasma renin with endogenous renin substrate. The angiotensin is quantitated by radioimmunoassay. Our studies indicate that the incubation step is best carried out in undiluted plasma at the pH optimum for renin (pH 5.7) in the presence of EDTA, neomycin, and DFP or PMSF. By using these conditions, incubation of low-renin samples can be prolonged for up to 18 hr, because angiotensinases and converting enzyme are completely inhibited. Accuracy is enhanced by prolongation of the incubation time, which results in more angiotensin and eliminates the need for blank subtraction. Incubation at pH 7.4 is disadvantageous because of lower rates of generation of angiotensin 1, because of the inability to maintain pH constant without addition of strong buffer, and because the incubation step cannot be prolonged beyond 3 hr. Dilution of plasma is undesirable because it results in a slower reaction rate due to dilution of both enzyme and substrate, and it is not possible to correct for the effect of substrate dilution. The radioimmunoassay of angiotensin I presents few unusual problems. The volume of plasma assayed should be 20 muI or less. If blank subtraction is used, antibodies should be screened to determine the extent to which they bind nonspecific substances in plasma, and then to ascertain whether the blank is entirely additive when angiotensin is added to it. Assay sensitivity is an important issue, since approximately 30 percent of patients with essential hypertension have subnormal plasma renin activity. In a study of three different commercial kits we found that many low-renin samples were undetectable and major fractions could not be discriminated with precision or consistency from normal renin samples. However, the incubation conditions can be easily modified, so that an 18-hr incubation can be utilized and then low-renin samples can be detected with the same degree of accuracy as those with normal plasma renin activity.     

冠舒滴丸中葛根素的含量测定

目的建立HPLC法测定冠舒滴丸中葛根素的含量。方法色谱柱:SHIMADZU VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:水-甲醇-乙腈(80∶10∶10);流速:1.0 ml/min;检测波长:250 nm;柱温:30℃;进样量:20μl。结果葛根素在12.8～102.4μg/ml范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=8 644 510.417X-876 895.15,r=0.9998,平均回收率为99.54%,RSD为0.15%。结论方法操作简便、可靠,灵敏度高,重复性好,可用于该制剂的质量控制。