NOR1基因真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的影响

目的NOR1基因真核表达载体pcDNA3．1（＋）的构建并了解其对肝癌细胞系HepG2生长的影响。方法将NOR；cDNA亚克隆至pcDNA3．1（＋）真核表达载体上，并把重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR，经脂质体转染至HepG2细胞中，运用MTT法、台盼蓝排斥等试验、流式细胞仪等分析NOR，基因对肝癌细胞HepG2生物学活性的影响。结果成功构建了NOR。基因真核表达体pcDNA3．1（＋）／NORl，经pcDNA3．1（＋）／NOR1转染后的HepG2细胞生长速度明显抑制（P〈0．05），且细胞从G0／G1期进入S期明显延缓。结论重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR1能在HepG2细胞内表达，且能影响HepG2细胞的生长。     

Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白 ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析

目的：构建弓形虫Chinese 1基因型TgCtWh3（以后均简称Wh3）株棒状体蛋白（ rhoptry protein ,ROPs）16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段,克隆至pMD18-T载体;经PCR及测序分析鉴定;阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2,分别转化大肠杆菌BL21和DH5α,PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞,观察其在细胞中表达;采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3 D结构。结果各组均PCR扩增出约2．1 kb ROP16基因的特异片段,序列检测结果均正确;分别亚克隆到原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2中,成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白;真核表达质粒在293T细胞中成功表达,成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以pET-28a和pEGFP-C2为载体,分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒,并构建出其3D结构图。     

气体信号分子硫化氢在化学性毒物所致损伤中作用研究概况

硫化氢(H2S)长久以来被认为是一种臭鸡蛋气味的窒息性剧毒气体,但20世纪90年代末却在人体组织中检出了H2S,由此引发了对其潜在的生理学作用的研究热潮。随后,H2S被证明是继CO和NO之后的第3种气体信号分子,并参与慢性疾病的生理和病理生理过程[1-2]。已有研究发现H2S参与了一些环     

细胞色素P450 2E1在线粒体的定位、功能、调节因素及其毒理学意义

线粒体细胞色素P450的生化功能、结构及其可诱导性已经成为毒理学研究的新热点,为毒性机制,特别是选择毒性的研究开辟了一条新路。本文以代谢小分子职业和环境化学毒物和药物的细胞色素P450 2E1为例,系统介绍了线粒体细胞色素P450 2E1(mtCYP2E1)的分布特征、蛋白结构和功能及其信号转移机制,总结了mtCYP2E1在常见毒物毒性中的作用,并就未来的研究趋势做出了展望。     

肝损伤患者外周血单个核细胞中白细胞介素-10 mRNA的表达水平及其临床意义

白细胞介素10(IL-10)是由Th2细胞活化的B细胞、单核一巨噬细胞、Kupffer细胞等产生的细胞因子，IL—10参与抑制细胞合成炎性因子、集落刺激因子(CSF)等主要负反馈调节机制，能广谱抑制单核-巨噬细胞炎性介质IL-1、IL-6、IL-8、TNFa的合成及表达。为了解IL-10细胞因子在肝损伤患者中的表达水平，明确其在肝损伤发病机制中的作用，我们采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)方法，     

同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱快速测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的研究

  目的  建立尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱的快速测定方法。  方法  离心后的尿样上清液加入15N₅-8-羟基脱氧鸟苷、D₃-可替宁两种内标,以3 mmol/L甲酸铵水溶液稀释5倍,经0.22 μm水系滤器过滤后,引入液相色谱-串联质谱法（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）分析。以ACQUITY UPLC? BEH HILIC色谱柱（50 mm×3.0 mm, 1.7 μm）分离,3 mmol/L甲酸铵水溶液与乙腈为流动相(10∶90) 等度洗脱,柱温40 ℃,流速0.3 mL/min;质谱以电喷雾电离源（electrospray ionization, ESI）+扫描多反应监测模式检测,内标法定量。  结果  8-羟基脱氧鸟苷和可替宁在各自线性范围内线性良好,方法检出限分别为0.064 μg/L和0.035 μg/L;定量限分别为0.21 μg/L和0.12 μg/L;加标回收率分别为92.6%～102.0%和102.0%～106.0%。采用所建立的方法测定实际尿样,并通过40例样本统计分析发现,主、被动吸烟者的烟草烟气暴露量、烟草特有亚硝胺摄入量存在差异（P<0.05）,NNAL和可替宁含量在主动吸烟者尿样中含量更高;主、被动吸烟者的烟草烟气暴露与烟草特有亚硝胺暴露呈正相关（其相关系数r分别为0.487和0.786,P<0.05）。  结论  本研究成功建立同时测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁含量的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱法,该方法前处理简单、快速,通过同位素内标校正,定量灵敏准确,能够满足批量分析的需求。     

嗜黏蛋白阿克曼菌对大鼠胰岛细胞瘤细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌功能的影响

  目的  探讨嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila, A. muciniphila）对大鼠胰岛细胞瘤细胞（INS-1）增殖、凋亡及胰岛素分泌功能的影响。  方法  将INS-1细胞分为正常组、修复组和保护组,每组均用3种A. muciniphila干预物（活菌、灭活菌和分泌物）处理48 h,并设不干预的空白对照。正常组INS-1细胞直接干预;修复组INS-1细胞先用链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）造模再加干预物;保护组INS-1细胞先用干预物作用再加STZ造模。干预结束,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测细胞增殖;使用葡萄糖刺激,用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测胰岛素分泌水平;实时荧光定量PCR技术检测胰岛素分泌相关基因和凋亡基因表达,Western blot检测Bax凋亡蛋白的表达。  结果  A. muciniphila干预物对INS-1细胞作用48 h后,其细胞形态无明显变化。A. muciniphila活菌干预的修复组INS-1细胞增殖活性较空白对照降低（P<0.005）。A. muciniphila干预物对正常组、修复组和保护组INS-1细胞的胰岛素分泌没有影响（P>0.05）。A. muciniphila分泌物可促进正常组、修复组和保护组INS-1细胞葡萄糖转运蛋白2基因(glucose transporter 2, Glut2)和修复组葡萄糖激酶基因 (glucokinase, GCK)的表达（P<0.05）。3种A. muciniphila干预物处理后的正常组INS-1细胞Bcl₂-associated X基因 (Bax)的表达量减少（P<0.001）,A. muciniphila死菌干预的修复组INS-1细胞Bax基因表达量减少（P<0.05）。A. muciniphila干预物处理的细胞Bax蛋白表达减少。  结论  A. muciniphila可促进INS-1细胞胰岛素分泌相关基因的表达,抑制凋亡基因和凋亡蛋白Bax的表达,为研究如何用A. muciniphila改善2型糖尿病提供了新的方向。     

利用现有设备提高高职医学检验专业学生的就业竞争力

目的:探讨利用现有设备提高高职医学检验专业学生的就业竞争力的方法。方法:加强准本工作,示教中反复操作和讲解,通过综合实验提高学生的兴趣,学生练习期间加强巡视,允许课余时间开放实验室允许学生进入实验室练习。结果:40%的学生提高了对实验的兴趣,课余时间有更多的学生选择到开放实验室中熟练实验操作,07、08级学生的成绩显著提高,及格率与07级以前对比差异有意义(P<0.05)。实习医院对07、08级学生的满意率显著增高,与07级以前对比差异有意义(P<0.05)。结论:利用现有设备通过改变教学内容、加强示教和巡视和充足的准本工作等可以有效的提高医学检验专业学生的就业竞争力。     

糖尿病患者对过热环境所致损害的易感性

2型糖尿病等慢性疾病可能会改变身体对过热的正常反应。已有研究表明,糖尿病引起的内皮依赖性和非内皮依赖性损伤均会影响皮肤血流(SkBF)对局部热损耗(散热)反应.这就会降低过热或药物刺激所致的SkBF加快幅度。2型糖尿病会减少体温调节性出汗,因而机体把热量从体内传递到体外的传导能力则会降低。糖尿病相关的并发症和必须使用的治疗药物(尤其是那些会影响体液平衡的药物)也可减少SkBF和出汗,从而进一步增加糖尿病患者与过热相关疾病的健康风险。本文综述了2型糖尿病对热损耗反应的易感性。发现2型糖尿病及其并发症以及必需的治疗药物的使用可能会引起脱水、降低SkBF和减少出汗,进而影响这一人群的体温调节,且这一不良影响在血糖控制不佳的患者中表现得更加明显,但是那些经常参加体力活动的糖尿病人群,只需要更少的药物,同时也能很好的控制血糖水平,却和跟相似年龄和体型的健康人群一样能够耐受过热。